80 matches
-
blocare, în fiecare godeu. 1.1.5.4. Se incubează timp de o oră la 37 °C pe un agitator orbital. 1.1.5.5. Plăcile se spală de trei ori și se usucă ca mai sus. 1.1.6. Cromogen Se prepară soluția de cromogen OFD (orto-fenildiamină) conform instrucțiunilor producătorului (0,4 mg/ml în apă distilată sterilă), exact înainte de utilizare. Se adaugă substratul [peroxid de hidrogen H(2)O(2)] pentru a rezultă o concentrație finală de 0,05
EUR-Lex () [Corola-website/Law/175417_a_176746]
-
1.5.4. Se incubează timp de o oră la 37 °C pe un agitator orbital. 1.1.5.5. Plăcile se spală de trei ori și se usucă ca mai sus. 1.1.6. Cromogen Se prepară soluția de cromogen OFD (orto-fenildiamină) conform instrucțiunilor producătorului (0,4 mg/ml în apă distilată sterilă), exact înainte de utilizare. Se adaugă substratul [peroxid de hidrogen H(2)O(2)] pentru a rezultă o concentrație finală de 0,05% (v/v) (1/2.000
EUR-Lex () [Corola-website/Law/175417_a_176746]
-
în SFT + 5 % lapte + 0,05 % Tween 20, la un pH de 7,2. Se incubează o oră la 37°C. 2.1.3.2. Se spală plăcile așa cum este descris la punctul 2.1.1.2. 2.1.4. Cromogen/Substrat 2.1.4.1. Se adaugă 200 f2æl pe godeu de soluție de cromogen/ substrat (10 ml de soluție de 80,6 mM de DMAB (dimetil amino benzaldehidă) + 10 ml de soluție 1.56 mM de MBTHC (3-metil-2-benzo-tiazolină hidrazonă
EUR-Lex () [Corola-website/Law/175417_a_176746]
-
incubează o oră la 37°C. 2.1.3.2. Se spală plăcile așa cum este descris la punctul 2.1.1.2. 2.1.4. Cromogen/Substrat 2.1.4.1. Se adaugă 200 f2æl pe godeu de soluție de cromogen/ substrat (10 ml de soluție de 80,6 mM de DMAB (dimetil amino benzaldehidă) + 10 ml de soluție 1.56 mM de MBTHC (3-metil-2-benzo-tiazolină hidrazonă clorhidrat) + 5 f2æl H(2)0(2)). Dezvoltarea culorii este oprită prin adăugarea a 50
EUR-Lex () [Corola-website/Law/175417_a_176746]
-
MBTHC (3-metil-2-benzo-tiazolină hidrazonă clorhidrat) + 5 f2æl H(2)0(2)). Dezvoltarea culorii este oprită prin adăugarea a 50 f2æl H(2)SO(4) 3N după aproximativ 5-10 minute (înainte ca testul negativ de control să înceapă să se coloreze). Alți cromogeni, ca ABTS (2,2'-azino-bis-[3-etilbenzotiazolină-6-acid sulfonic]), TMB (tetrametil benzidină), sau OFD (orto-fenildiamină) pot fi de asemenea utilizate. 2.1.4.2. Plăcile se citesc la 600 nm (sau 620 nm). 2.2. Interpretarea rezultatelor 2.2.1. Valoarea finală
EUR-Lex () [Corola-website/Law/175417_a_176746]
-
se amestecă ușor pentru a asigura omogenizarea. Se incubează timp de 30 de minute la 37°C. 3.1.4. Se spală plăcile de cinci ori cu SSFTT și se usucă așa cum a fost descris mai sus. 3.1.5. Cromogen/ Substrat Se adaugă câte 100 f2æl/godeu de soluție de cromogen/ substrat (1 ml ABTS (2,2'-azino-bis-[3-etilbenzotiazolină-6-acid sulfonic])5 mg/ml + 9 ml de soluție tampon de substrat (soluție tampon de fosfat-citrat 0,1 M cu pH de
EUR-Lex () [Corola-website/Law/175417_a_176746]
-
30 de minute la 37°C. 3.1.4. Se spală plăcile de cinci ori cu SSFTT și se usucă așa cum a fost descris mai sus. 3.1.5. Cromogen/ Substrat Se adaugă câte 100 f2æl/godeu de soluție de cromogen/ substrat (1 ml ABTS (2,2'-azino-bis-[3-etilbenzotiazolină-6-acid sulfonic])5 mg/ml + 9 ml de soluție tampon de substrat (soluție tampon de fosfat-citrat 0,1 M cu pH de 4, care conține H(2)O(2) 0,03 %] și se
EUR-Lex () [Corola-website/Law/175417_a_176746]
-
de grup (3-17-A3) prin adăugarea de ser de testare. Anticorpii de BTV prezenți în serul de testare blochează reactivitatea anticorpului monoclonal (AcM) și cauzează o reducere a dezvoltării scontate a culorii după adăugarea unui anticorp antișoarece marcat enzimatic și a cromogenului/substratului. Serurile pot fi testate într-o singură diluție de 1:5 (testul spot - apendicele 1) sau pot fi titrate (titrarea serului - apendicele 2) pentru a defini punctele limită de diluție. Valorile de inhibiție mai mari decât 50 % pot fi
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
specifice, păstrat la -20 °C sau liofilizat și diluat la 1/100 cu tampon de blocare înainte de utilizare. 5. Conjugat: globulină de iepure antișoarece (adsorbită și eluată) conjugată cu peroxidază din hrean și păstrat la întuneric la 4 °C. 6. Cromogen și substrat: Ortofenilen diamină (cromogen OFD) a cărei concentrație finală este de 0,4 mg/ml în apă distilată sterilă. Peroxid de hidrogen (substrat 30 % w/v), 0,05 % v/v adăugat imediat înainte de utilizare (5µl H2O2 per 10 ml
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
sau liofilizat și diluat la 1/100 cu tampon de blocare înainte de utilizare. 5. Conjugat: globulină de iepure antișoarece (adsorbită și eluată) conjugată cu peroxidază din hrean și păstrat la întuneric la 4 °C. 6. Cromogen și substrat: Ortofenilen diamină (cromogen OFD) a cărei concentrație finală este de 0,4 mg/ml în apă distilată sterilă. Peroxid de hidrogen (substrat 30 % w/v), 0,05 % v/v adăugat imediat înainte de utilizare (5µl H2O2 per 10 ml OFD). (A se manevra OFD
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
Se adaugă 50 µl de globulină de iepure antișoarece conjugată cu peroxidază din hrean, diluată la o concentrație pretitrată optimă, în fiecare godeu al plăcii de microtitrare. 8. Se incubează o oră la 37 °C. 9. Se adaugă substrat și cromogen după indicațiile anterioare. Se întrerupe reacția după 10 minute prin adăugarea acidului sulfuric 1 M (50 µl/godeu). În testul de concurență, anticorpul monoclonal trebuie să fie în exces, astfel, se alege o diluție a antigenului ce se găsește pe
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
de microtitrare. După spălarea plăcilor în vederea eliminării materialului liber, se adaugă un conjugat anti-Erns marcat peroxidază. Acesta se leagă de antigenul Erns complexat cu anticorpul plasat pe placa de microtitrare. Conjugatul nelegat este îndepărtat prin spălare și se adaugă substratul cromogen. Intensitatea culorii care apare este invers proporțională cu cantitatea de anticorpi specifici pentru Erns prezenți în probă. Dacă proba nu conține anticorpi (probă negativă), o mare parte din cantitatea definită de antigen Erns care a fost adăugată se poate lega
jrc5970as2003 by Guvernul României () [Corola-website/Law/91142_a_91929]
-
blocare, în fiecare godeu. 1.1.5.4. Se incubează timp de o oră la 37 °C pe un agitator orbital. 1.1.5.5. Plăcile se spală de trei ori și se usucă ca mai sus. 1.1.6. Cromogen Se prepară soluția de cromogen OFD (orto-fenildiamină) conform instrucțiunilor producătorului (0,4 mg/ml în apă distilată sterilă), exact înainte de utilizare. Se adaugă substratul [peroxid de hidrogen H(2)O(2)] pentru a rezultă o concentrație finală de 0,05
EUR-Lex () [Corola-website/Law/220362_a_221691]
-
1.5.4. Se incubează timp de o oră la 37 °C pe un agitator orbital. 1.1.5.5. Plăcile se spală de trei ori și se usucă ca mai sus. 1.1.6. Cromogen Se prepară soluția de cromogen OFD (orto-fenildiamină) conform instrucțiunilor producătorului (0,4 mg/ml în apă distilată sterilă), exact înainte de utilizare. Se adaugă substratul [peroxid de hidrogen H(2)O(2)] pentru a rezultă o concentrație finală de 0,05% (v/v) (1/2.000
EUR-Lex () [Corola-website/Law/220362_a_221691]
-
în SFT + 5 % lapte + 0,05 % Tween 20, la un pH de 7,2. Se incubează o oră la 37°C. 2.1.3.2. Se spală plăcile așa cum este descris la punctul 2.1.1.2. 2.1.4. Cromogen/Substrat 2.1.4.1. Se adaugă 200 f2æl pe godeu de soluție de cromogen/ substrat (10 ml de soluție de 80,6 mM de DMAB (dimetil amino benzaldehidă) + 10 ml de soluție 1.56 mM de MBTHC (3-metil-2-benzo-tiazolină hidrazonă
EUR-Lex () [Corola-website/Law/220362_a_221691]
-
incubează o oră la 37°C. 2.1.3.2. Se spală plăcile așa cum este descris la punctul 2.1.1.2. 2.1.4. Cromogen/Substrat 2.1.4.1. Se adaugă 200 f2æl pe godeu de soluție de cromogen/ substrat (10 ml de soluție de 80,6 mM de DMAB (dimetil amino benzaldehidă) + 10 ml de soluție 1.56 mM de MBTHC (3-metil-2-benzo-tiazolină hidrazonă clorhidrat) + 5 f2æl H(2)0(2)). Dezvoltarea culorii este oprită prin adăugarea a 50
EUR-Lex () [Corola-website/Law/220362_a_221691]
-
MBTHC (3-metil-2-benzo-tiazolină hidrazonă clorhidrat) + 5 f2æl H(2)0(2)). Dezvoltarea culorii este oprită prin adăugarea a 50 f2æl H(2)SO(4) 3N după aproximativ 5-10 minute (înainte ca testul negativ de control să înceapă să se coloreze). Alți cromogeni, ca ABTS (2,2'-azino-bis-[3-etilbenzotiazolină-6-acid sulfonic]), TMB (tetrametil benzidină), sau OFD (orto-fenildiamină) pot fi de asemenea utilizate. 2.1.4.2. Plăcile se citesc la 600 nm (sau 620 nm). 2.2. Interpretarea rezultatelor 2.2.1. Valoarea finală
EUR-Lex () [Corola-website/Law/220362_a_221691]
-
se amestecă ușor pentru a asigura omogenizarea. Se incubează timp de 30 de minute la 37°C. 3.1.4. Se spală plăcile de cinci ori cu SSFTT și se usucă așa cum a fost descris mai sus. 3.1.5. Cromogen/ Substrat Se adaugă câte 100 f2æl/godeu de soluție de cromogen/ substrat (1 ml ABTS (2,2'-azino-bis-[3-etilbenzotiazolină-6-acid sulfonic])5 mg/ml + 9 ml de soluție tampon de substrat (soluție tampon de fosfat-citrat 0,1 M cu pH de
EUR-Lex () [Corola-website/Law/220362_a_221691]
-
30 de minute la 37°C. 3.1.4. Se spală plăcile de cinci ori cu SSFTT și se usucă așa cum a fost descris mai sus. 3.1.5. Cromogen/ Substrat Se adaugă câte 100 f2æl/godeu de soluție de cromogen/ substrat (1 ml ABTS (2,2'-azino-bis-[3-etilbenzotiazolină-6-acid sulfonic])5 mg/ml + 9 ml de soluție tampon de substrat (soluție tampon de fosfat-citrat 0,1 M cu pH de 4, care conține H(2)O(2) 0,03 %] și se
EUR-Lex () [Corola-website/Law/220362_a_221691]
-
50, cu tampon de blocare înainte de utilizare, dirijat contra polipeptidei p7 specifică de grup 5. Conjugat: globulina de iepure antisoarece "absorbita și eluata", conjugata cu peroxidaza de hrean și păstrată la întuneric la temperatura de 4°C 6. Substrat și cromogen: 0,2 g de ortofenilen-diamina "OFD" dizolvată într-un tampon constând în 2,553 g acid citric și 4,574 g di-sodium hidrogen ortofosfat adus la 500 ml cu apă distilata, împărțită în cote-părți de 25 ml și păstrată la
EUR-Lex () [Corola-website/Law/143681_a_145010]
-
marcat cu peroxidază, care se leagă de antigenul E^(rns) care formează un complex cu anticorpii cu care a fost căptușită suprafața microplăcii. Conjugatul care nu s-a legat se îndepărtează prin spălare și se adaugă un substrat ce conține cromogen. Intensitatea culorii care se dezvoltă, este invers proporțională cu cantitatea de anticorpi specifici pentru E^(rns) prezenți în probă. Dacă proba nu conține anticorpi (probă negativă) mare parte din cantitatea definită de antigen E^(rns) adăugat se poate lega de
EUR-Lex () [Corola-website/Law/220391_a_221720]
-
blocare, în fiecare godeu. 1.1.5.4. Se incubează timp de o oră la 37 °C pe un agitator orbital. 1.1.5.5. Plăcile se spală de trei ori și se usucă ca mai sus. 1.1.6. Cromogen Se prepară soluția de cromogen OFD (orto-fenildiamină) conform instrucțiunilor producătorului (0,4 mg/ml în apă distilată sterilă), exact înainte de utilizare. Se adaugă substratul [peroxid de hidrogen H(2)O(2)] pentru a rezultă o concentrație finală de 0,05
EUR-Lex () [Corola-website/Law/220360_a_221689]
-
1.5.4. Se incubează timp de o oră la 37 °C pe un agitator orbital. 1.1.5.5. Plăcile se spală de trei ori și se usucă ca mai sus. 1.1.6. Cromogen Se prepară soluția de cromogen OFD (orto-fenildiamină) conform instrucțiunilor producătorului (0,4 mg/ml în apă distilată sterilă), exact înainte de utilizare. Se adaugă substratul [peroxid de hidrogen H(2)O(2)] pentru a rezultă o concentrație finală de 0,05% (v/v) (1/2.000
EUR-Lex () [Corola-website/Law/220360_a_221689]
-
în SFT + 5 % lapte + 0,05 % Tween 20, la un pH de 7,2. Se incubează o oră la 37°C. 2.1.3.2. Se spală plăcile așa cum este descris la punctul 2.1.1.2. 2.1.4. Cromogen/Substrat 2.1.4.1. Se adaugă 200 f2æl pe godeu de soluție de cromogen/ substrat (10 ml de soluție de 80,6 mM de DMAB (dimetil amino benzaldehidă) + 10 ml de soluție 1.56 mM de MBTHC (3-metil-2-benzo-tiazolină hidrazonă
EUR-Lex () [Corola-website/Law/220360_a_221689]
-
incubează o oră la 37°C. 2.1.3.2. Se spală plăcile așa cum este descris la punctul 2.1.1.2. 2.1.4. Cromogen/Substrat 2.1.4.1. Se adaugă 200 f2æl pe godeu de soluție de cromogen/ substrat (10 ml de soluție de 80,6 mM de DMAB (dimetil amino benzaldehidă) + 10 ml de soluție 1.56 mM de MBTHC (3-metil-2-benzo-tiazolină hidrazonă clorhidrat) + 5 f2æl H(2)0(2)). Dezvoltarea culorii este oprită prin adăugarea a 50
EUR-Lex () [Corola-website/Law/220360_a_221689]