33 matches
-
diluat în soluție tampon carbonată/bicarbonată, la un pH de 9,6. Plăcile de ELISA se incubează peste noapte la 4°C. 1.1.1.2. Se spală plăcile de trei ori prin inundarea și golirea godeurilor cu soluție salină fosfată tamponată (SSFT), cu pH de la 7,2 la 7,4, și se usucă pe hârtie adsorbantă. 1.1.2. Godeuri de control 1.1.2.1. Se titrează serul pozitiv de control într-o serie de diluție dublă, de la 1
EUR-Lex () [Corola-website/Law/175417_a_176746]
-
de cinci ori cu apă distilată care conține 0,01 % (v/v) Tween 20 (soluție de spălare). Plăcile se tamponează ușor cu material absorbant pentru a îndepărta reziduurile de la spălare. 2.1.1.3. Plăcile se blochează cu soluție salină fosfată tamponată (SSFT) + 5 % (w/v) lapte smântânit (lapte praf smântânit Nestle^TM), 200 f2æl/godeu, timp de o oră, la 37°C. 2.1.1.4. Se îndepărtează soluția de blocare și se tamponează ușor plăcile cu un material absorbant
EUR-Lex () [Corola-website/Law/175417_a_176746]
-
Se acoperă plăcile pentru ELISA cu AVPE-4 VP7 recombinat, diluat în soluție tampon carbonată/ bicarbonată, cu pH de 9,6. Se incubează peste noapte la 4°C. 3.1.1.2. Plăcile se spală de cinci ori cu soluție salină fosfată tamponată (SSFT) care conține 0,05 % (v/v) Tween 20 (SSFTT). 3.1.1.3. Placa se stabilizează prin tratare cu o soluție stabilizatoare (pentru a permite stocarea pe termen lung la temperatura de 4°C fără pierderea activității) și
EUR-Lex () [Corola-website/Law/175417_a_176746]
-
ocazia testelor de depistare a C. m. ssp. sepedonicus. Ca martori pozitivi se prepară suspensii care conțin între 105 și 106 celule/ml de C. m. ssp. sepedonicus (sușe NCPPB 4053 sau PD 406, de exemplu) într-o soluție tampon fosfatată la 0,01 M, pe baza unei culturi de trei până la cinci zile (a se vedea apendicele 2 pentru preparare). Se prepară lame martori pozitivi distincte ale sușei omoloage sau ale oricărei alte sușe de referință de C. m. ssp
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
se lasă la incubat toată noaptea la 4 °C. Se mai poate utiliza ca fixativ etanol la 96 %. În acest caz, extractul concentrat menționat la punctul 5.1.2 se dizolvă într-un amestec format din 50 μl de tampon fosfatat la 0,01 M și din 50 μl etanol la 96 %. Se amestecă la vortex și se lasă la incubat la 4 °C timp de 30-60 minute. 5.1.4. Se pune la centrifugat timp de 8 minute la 7
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
la incubat la 4 °C timp de 30-60 minute. 5.1.4. Se pune la centrifugat timp de 8 minute la 7 000 g, se elimină lichidul supernatant și se repune în suspensie extractul concentrat în 75 μl de tampon fosfatat la 0,01 M. 5.1.5. Se depun 16 μl de suspensii fixate pe o lamă multitest, astfel cum se indică în figura 3. Pe fiecare lamă se aplică două probe diferite, nediluate, și din acestea se diluează 10
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
Se depun 16 μl de suspensii fixate pe o lamă multitest, astfel cum se indică în figura 3. Pe fiecare lamă se aplică două probe diferite, nediluate, și din acestea se diluează 10 μl la 1:100 (într-un tampon fosfatat de 0,01 M). Restul soluției de probă (49 μl) poate fi conservată la -20 °C, după ce s-a adăugat o cantitate de etanol la 96 %. În cazul în care este necesară repetarea testului FISH, se elimină etanolul prin centrifugare
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
μl) poate fi conservată la -20 °C, după ce s-a adăugat o cantitate de etanol la 96 %. În cazul în care este necesară repetarea testului FISH, se elimină etanolul prin centrifugare și se înlocuiește cu o cantitate echivalentă de tampon fosfatat la 0,01 M (se omogenizează prin agitare). Figura 3. Dispunerea unei lame pentru testul FISH ***[PLEASE INSERT FIGURE AND THE FOLLOWING TEXT IN RO LANGUAGE]*** échantillon 1 = eșantion 1 témoin = martor témoin = martor témoin = martor échantillon 2 = eșantion 2
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
4. Se asigură izolarea față de plantele simptomatice, prelevând o secțiune de tulpină la o înălțime de 2 cm deasupra punctului de inoculare. Se reduce și se pune în suspensie într-o cantitate mică de apă distilată sterilă sau de tampon fosfatat la 50 mM (a se vedea apendicele 3). Se izolează de suspensie, diluând prin însămânțare simplă sau în striuri pe MTNA și YPGA (a se vedea apendicele 5), se lasă la incubat timp de trei-cinci zile la o temperatură cuprinsă
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
PCR/IF și FISH Se pune în cultură timp de 72 de ore o sușă virulentă de C. m. ssp. sepedonicus [NCPPB 4053 sau PD 406] pe un mediu de bază MTNA și se pune în suspensie într-un tampon fosfatat la 10 mM, astfel încât să se obțină o densitate celulară de aproximativ 1-2 x 108 UFC pe mililitru. Aceasta corespunde, în general, unei suspensii ușor turbide care prezintă o densitate optică de 0,20-600 nm. Se prelevează un con de
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
să lipsească complet la martorii negativi. Apendicele 3 Tampoane pentru procedurile de testare GENERALITATE: tampoanele sterilizate care nu sunt deschise pot fi depozitate timp de maximum un an. 1. Tampoane pentru procedura de extragere 1.1. Tampon de extragere (tampon fosfatat la 50 mM, pH 7,0) Tamponul menționat este utilizat pentru extragerea, prin omogenizare sau agitare, a bacteriei prezente în țesuturile plantei. Na2HPO4 (anhidru) 4,26 g KH2PO4 2,72 g Apă distilată 1,00 l Se dizolvă ingredientele, se
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
DC silicon Agent antispumant* 1,0 ml Pirofosfat tetrasodic Antioxidant 1,0 g Polivinilpirolidonă -40 000 (PVP-40) Legătură de inhibitori de PCR 50 g *A se utiliza cu metoda de extragere prin omogenizare. 1.2. Tampon de extract concentrat (tampon fosfatat la 10 mM, pH 7,2) Tamponul menționat este utilizat pentru repunerea în suspensie și diluția extractelor de stoloni de tuberculi de cartofi concentrați prin centrifugare. Na2HPO4.12H2O 2,7 g NaH2PO4.2H2O 0,4 g Apă distilată 1,00
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
se adaugă 0,4 g de paraformaldehidă. Paraformaldehida se dizolvă după ce s-au adăugat 5 picături de 1N NaOH și se amestecă cu un agitator magnetic. (ii) Se ajustează pH-ul la 7,0 adăugându-se 1 ml de tampon fosfatat la 0,1 M (PB; pH 7,0) și 5 picături de 1N HCl. Se verifică pH-ul cu bandele indicatoare și se ajustează, în cazul în care este necesar, cu HCl sau NaOH. [ATENȚIE! NU SE UTILIZEAZĂ PH-METRU ÎN
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
diluat în soluție tampon carbonată/bicarbonată, la un pH de 9,6. Plăcile de ELISA se incubează peste noapte la 4°C. 1.1.1.2. Se spală plăcile de trei ori prin inundarea și golirea godeurilor cu soluție salină fosfată tamponată (SSFT), cu pH de la 7,2 la 7,4, și se usucă pe hârtie adsorbantă. 1.1.2. Godeuri de control 1.1.2.1. Se titrează serul pozitiv de control într-o serie de diluție dublă, de la 1
EUR-Lex () [Corola-website/Law/220362_a_221691]
-
de cinci ori cu apă distilată care conține 0,01 % (v/v) Tween 20 (soluție de spălare). Plăcile se tamponează ușor cu material absorbant pentru a îndepărta reziduurile de la spălare. 2.1.1.3. Plăcile se blochează cu soluție salină fosfată tamponată (SSFT) + 5 % (w/v) lapte smântânit (lapte praf smântânit Nestle^TM), 200 f2æl/godeu, timp de o oră, la 37°C. 2.1.1.4. Se îndepărtează soluția de blocare și se tamponează ușor plăcile cu un material absorbant
EUR-Lex () [Corola-website/Law/220362_a_221691]
-
Se acoperă plăcile pentru ELISA cu AVPE-4 VP7 recombinat, diluat în soluție tampon carbonată/ bicarbonată, cu pH de 9,6. Se incubează peste noapte la 4°C. 3.1.1.2. Plăcile se spală de cinci ori cu soluție salină fosfată tamponată (SSFT) care conține 0,05 % (v/v) Tween 20 (SSFTT). 3.1.1.3. Placa se stabilizează prin tratare cu o soluție stabilizatoare (pentru a permite stocarea pe termen lung la temperatura de 4°C fără pierderea activității) și
EUR-Lex () [Corola-website/Law/220362_a_221691]
-
a.p. în apă și se diluează până la 1 000 ml; se sterilizează. 4.4. Amestec de metanol, pur/apă/acid clorhidric a.p. (d: 1,18 la 1,19): 80/17,5/2,5 (v/v/v). 4.5. Soluție tampon fosfată, pH 6,5 Fosfat acid de potasiu K2HPO4 a.p. (22,15 g) Fosfat diacid de potasiu KH2PO4 a.p. (27,85 g) Apă până la 1 000 ml. 4.6. Acid clorhidric a.p. (d: 1,18 până la 1,19) 4.7. Acid
jrc464as1978 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85602_a_86389]
-
activității indicate). Se adaugă 5 ml de acid clorhidric de 0,1 N (4.7) și se lasă să stea timp de 15 minute. Se adaugă 30 ml de apă, se ajustează pH-ul la 4,5 cu soluție tampon fosfată cu pH-ul de 6,5 (4.5) (aproximativ 4 ml), se completează până la de 50 ml cu apă și se amestecă bine (1 ml = 21 u.i.). Din această soluție se prepară, prin diluare succesivă cu soluție tampon fosfată
jrc464as1978 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85602_a_86389]
-
fosfată cu pH-ul de 6,5 (4.5) (aproximativ 4 ml), se completează până la de 50 ml cu apă și se amestecă bine (1 ml = 21 u.i.). Din această soluție se prepară, prin diluare succesivă cu soluție tampon fosfată cu pH-ul de 6,5 (4.5), următoarele soluții: S8 0,42 u.i./ml S4 0,21 u.i./ml S2 0,105 u.i./ml S1 0,0525 u.i./ml 6. PREPARAREA EXTRACTULUI 6.1. Extracția
jrc464as1978 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85602_a_86389]
-
eșantion de 2,0-5,0 g, se adaugă 30 ml de amestec (4.4 ) și se agită scurt. Se verifică dacă pH-ul este de aproximativ 2. Se agită timp de 10 minute, se adaugă 30 ml de soluție tampon fosfată cu pH-ul de 6,5 (4.5) și se agită timp de 15 minute. Se diluează cu soluție tampon fosfată (4.5) pentru a obține un conținut de bacitracin de zinc estimat de 0,42 u.i. 1 ml
jrc464as1978 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85602_a_86389]
-
pH-ul este de aproximativ 2. Se agită timp de 10 minute, se adaugă 30 ml de soluție tampon fosfată cu pH-ul de 6,5 (4.5) și se agită timp de 15 minute. Se diluează cu soluție tampon fosfată (4.5) pentru a obține un conținut de bacitracin de zinc estimat de 0,42 u.i. 1 ml (= U8). 6.1.2. Concentrate de proteine Se cântărește o cantitate de eșantion de 10,0 g, se adaugă 50 ml
jrc464as1978 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85602_a_86389]
-
de eșantion de 10,0 g, se adaugă 50 ml de amestec (4.4 ) și se agită scurt. Se verifică dacă pH-ul este de aproximativ 2. Se agită timp de 10 minute, se adaugă 50 ml de soluție tampon fosfată cu pH-ul de 6,5 (4.5) și se agită timp de 15 minute. Se diluează cu soluție tampon fosfată (4.5) pentru a obține un conținut de bacitracin de zinc estimat de 0,42 u.i./ ml (= U8
jrc464as1978 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85602_a_86389]
-
pH-ul este de aproximativ 2. Se agită timp de 10 minute, se adaugă 50 ml de soluție tampon fosfată cu pH-ul de 6,5 (4.5) și se agită timp de 15 minute. Se diluează cu soluție tampon fosfată (4.5) pentru a obține un conținut de bacitracin de zinc estimat de 0,42 u.i./ ml (= U8). 6.1.3. Alte alimente Se cântărește o cantitate de eșantion de 10,0 g (20,0 g pentru un conținut
jrc464as1978 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85602_a_86389]
-
10,0 g (20,0 g pentru un conținut estimat de bacitracin de zinc 5 mg/kg), se adaugă 25 ml de amestec (4.4 ) și se omogenizează timp de aproximativ 10 minute. Se adaugă 25 ml de soluție tampon fosfată cu pH-ul 6,5 (4.5), se agită timp de 15 minute și se centrifughează. Se iau 20 ml de soluție supernatantă și se ajustează pH-ul până la 6,5 cu ajutorul soluției de hidroxid de sodiu cu 1 N
jrc464as1978 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85602_a_86389]
-
analiză Din soluția U8 se prepară soluțiile U4 (conținut estimat: 0,21 u.i./ ml), U2 (conținut estimat: 0,105 u.i./ml) și U1 (conținut estimat: 0,0525 u.i./ml) prin diluare succesivă (1+1) cu soluție tampon fosfată (4.5). 7. PROCEDURA DE ANALIZĂ 7.1. Inocularea mediului de analiză Se inoculează mediul de analiză (4.2) cu suspensie bacteriană (3.2) la aproximativ 50˚C. Prin încercări preliminare pe plăci cu mediu de analiză (4.2) se
jrc464as1978 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85602_a_86389]