185 matches
-
aibă dotare pentru: culturi celulare: - hotă de biosecuritate clasa A2; - incubator cu atmosferă controlată de CO(2); - microscop inversat; microscopie optică: - microscop cu examinare în câmp luminos cu lumină transmisă și epifluorescență; - programe pentru scanare automată a lamelor și captarea metafazelor și cariotipare; - program pentru captarea, prelucrarea și analiza imaginilor FISH (standard FISH, M-FISH, m-BAND, Q-FISH, CGH); - să aibă personal specializat în examenul citogenetic și FISH cu experiență în domeniu de cel puțin 1 an; 3. laboratoare de biologie
EUR-Lex () [Corola-website/Law/267229_a_268558]
-
investigarea aprofundată a potențialului unei substanțe de a produce aberații cromozomiale, se pot dovedi fi adecvate unul sau mai multe din testele următoare: (a) studii citogenetice in vivo pe mamifere; Analiza in vivo a celulelor din măduva osoasă aflate în metafază trebuie luată în considerare, dacă nu a fost inclusă în evaluarea inițială (studiile din "dosarul de bază"). În plus, poate fi cercetată in vivo citogenetica celulelor germinative; (b) studii citogenetice in vitro pe celule de mamifere, dacă acesta nu a
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
metabolică la mamifere, dacă este cazul, apoi sunt cultivate pe o perioadă de două cicluri de replicare într-un mediu ce conține BrdU. După tratarea cu un inhibitor de fus mitotic (de exemplu colchicină) pentru oprirea celulelor în stadiul de metafază al mitozei (c-metafaza), celulele sunt prelevate și se efectuează preparatele cromozomiale. 1.5. Criterii de calitate Nici unul. 1.6. Descrierea metodei de testare Pregătire Pentru acest test se pot folosi culturi celulare primare (limfocite umane) sau linii celulare bine
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
este cazul, apoi sunt cultivate pe o perioadă de două cicluri de replicare într-un mediu ce conține BrdU. După tratarea cu un inhibitor de fus mitotic (de exemplu colchicină) pentru oprirea celulelor în stadiul de metafază al mitozei (c-metafaza), celulele sunt prelevate și se efectuează preparatele cromozomiale. 1.5. Criterii de calitate Nici unul. 1.6. Descrierea metodei de testare Pregătire Pentru acest test se pot folosi culturi celulare primare (limfocite umane) sau linii celulare bine caracterizate (de exemplu, celule
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
citogenetice standard. Colorarea lamelor pentru evidențierea SCE se poate face prin mai multe tehnici (de exemplu, prin fluorescență plus metoda Giemsa). Analiza Numărul de celule analizate depinde de frecvența spontană a SCE la martori. De obicei, cel puțin 25 de metafaze bine exprimate pe cultură sunt analizate în termeni de SCE. Lamele trebuie etichetate înainte de analiză. La limfocitele umane se analizează numai celulele care conțin 46 de centromeri. Pe liniile celulare bine caracterizate se analizează numai metafazele care conțin 2 centromeri
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
cel puțin 25 de metafaze bine exprimate pe cultură sunt analizate în termeni de SCE. Lamele trebuie etichetate înainte de analiză. La limfocitele umane se analizează numai celulele care conțin 46 de centromeri. Pe liniile celulare bine caracterizate se analizează numai metafazele care conțin 2 centromeri din numărul modal. Trebuie precizat dacă marcarea joncțiunii centromerice este sau nu inventariată ca SCE. Rezultatele trebuie confirmate într-un experiment independent. 2. DATE Datele se sistematizează în tabele. Pentru fiecare cultură tratată sau martor se
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
Trebuie precizat dacă marcarea joncțiunii centromerice este sau nu inventariată ca SCE. Rezultatele trebuie confirmate într-un experiment independent. 2. DATE Datele se sistematizează în tabele. Pentru fiecare cultură tratată sau martor se menționează separat numărul de SCE pentru fiecare metafază și numărul de SCE pe cromozom pentru fiecare metafază. Datele se evaluează prin metode statistice adecvate. 3. RAPORT 3.1. Protocol de test Protocolul trebuie să conțină, dacă este posibil, informațiile următoare: - celulele folosite, metodele de întreținere a culturilor celulare
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
inventariată ca SCE. Rezultatele trebuie confirmate într-un experiment independent. 2. DATE Datele se sistematizează în tabele. Pentru fiecare cultură tratată sau martor se menționează separat numărul de SCE pentru fiecare metafază și numărul de SCE pe cromozom pentru fiecare metafază. Datele se evaluează prin metode statistice adecvate. 3. RAPORT 3.1. Protocol de test Protocolul trebuie să conțină, dacă este posibil, informațiile următoare: - celulele folosite, metodele de întreținere a culturilor celulare, - condițiile de desfășurare a testului: compoziția mediului, concentrația CO2
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
diviziune celulară folosit, concentrația acestuia și timpul de tratament cu acesta, tipul de sistem folosit pentru activarea metabolică la mamifere, martorii pozitivi și negativi, - numărul de culturi la fiecare punct experimental, - detalii despre tehnica folosită pentru prepararea lamelor, - numărul de metafaze analizate (datele vor fi redate separat pentru fiecare cultură în parte), - numărul mediu de SCE per celulă și per cromozom (datele trebuie redate separat pentru fiecare cultură în parte), - criteriile pentru inventariere ca SCE, - argumentarea alegerii dozelor, - relația doză-răspuns, dacă
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
care au tratate cu substanța chimică de testare administrată pe căi specifice și sacrificate la diferite intervale de timp. Animalele sunt tratate în continuare cu inhibitori ai fusului mitotic cum ar fi colchicina pentru a opri celulele în stadiul de metafază a mitozei (c-metafază), apoi sunt sacrificate. Se realizează preparate cromozomiale pornind de la celule uscate în aer și apoi colorate, care se examinează microscopic. Analiza spermatocitelor în stadiul diachineză-metafaza I permite obținerea unor informații suplimentare referitoare la translocarea multivalentă a
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
substanța chimică de testare administrată pe căi specifice și sacrificate la diferite intervale de timp. Animalele sunt tratate în continuare cu inhibitori ai fusului mitotic cum ar fi colchicina pentru a opri celulele în stadiul de metafază a mitozei (c-metafază), apoi sunt sacrificate. Se realizează preparate cromozomiale pornind de la celule uscate în aer și apoi colorate, care se examinează microscopic. Analiza spermatocitelor în stadiul diachineză-metafaza I permite obținerea unor informații suplimentare referitoare la translocarea multivalentă a spermatogoniei, în urma tratamentului. 1
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
specia folosită. Suspensia de celule obținută se tratează cu soluție hipotonică apoi se fixează. Celulele se așează pe lame și se colorează. Lamele numerotate se examinează microscopic. Analiză Pentru stabilirea aberațiilor cromozomiale structurale, trebuie analizate cel puțin o sută de metafaze cu număr complet de centromeri. Pentru a se evidenția un posibil efect citotoxic, se stabilește raportul dintre primele mitoze spermatogonice și a doua metafază meiotică, care poate fi determinat pe un număr total de 100 diviziuni celulare pe animal. 2
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
se examinează microscopic. Analiză Pentru stabilirea aberațiilor cromozomiale structurale, trebuie analizate cel puțin o sută de metafaze cu număr complet de centromeri. Pentru a se evidenția un posibil efect citotoxic, se stabilește raportul dintre primele mitoze spermatogonice și a doua metafază meiotică, care poate fi determinat pe un număr total de 100 diviziuni celulare pe animal. 2. DATE Datele se sistematizează în tabele. Pentru fiecare animal tratat și martor întocmește o fișă individuală în care se consemnează tipul de aberație, numărul
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
consemnează tipul de aberație, numărul total de celule analizate și numărul total de celule cu aberații pentru fiecare lot. Se calculează deviația standard și mediile tuturor parametrilor. Dacă este calculat, raportul mediu între mitozele spermatogonice de la prima și a doua metafază meiotică este trecut în tabel pentru fiecare lot de experiment și lot martor. Datele se evaluează prin metode statistice corespunzătoare. 3. RAPORT 3.1. Protocol de test Protocolul trebuie să conțină, dacă este posibil, informațiile următoare: ― specia și rasa, vârsta
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
dovada necesară că animalul testat este purtătorul unei translocații. Dacă nu s-a produs nici o selecție prin reproducere, toți masculii F1 se examinează citogenetic. Se analizează microscopic minim 25 de celule în faza de diachineză-metafaza I pentru fiecare mascul. Examinarea metafazei mitotice în spermatogonii sau în celulele măduvei osoase este necesară la masculii F1 cu testicule mici și rupere meiotică înainte de diachineză sau la femele F1 suspecte XO. Prezența unui cromozom neobișnuit de lung și/sau scurt în fiecare a zecea
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
nu intră în mitoză, ci începe o altă fază S. Rezultă cromozomi cu 4, 8, 16, ... cromatide. Lacună: leziune acromatică mai mică decât lățimea unei cromatide și cu o eroare minimă de aliniere a cromatidelor. Index mitotic: numărul celulelor în metafază împărțit la numărul total de celule observate într-o populație de celule; indică gradul de proliferare a populației respective. Aberație numerică: modificare a numărului de cromozomi față de numărul normal caracteristic pentru celulele utilizate. Poliploidie: multiplicare a numărului (n) de cromozomi
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
numărului de cromozomi față de numărul normal caracteristic pentru celulele utilizate. Poliploidie: multiplicare a numărului (n) de cromozomi haploizi, alta decât diploidia (adică 3n, 4n etc.). Aberație structurală: modificare a structurii cromozomilor, detectabilă la examinarea microscopică a celulelor în stadiul de metafază al diviziunii acestora, care se prezintă sub formă de deleții și fragmente, modificări intracromozomiale și intercromozomiale. 1.3. PRINCIPIUL METODEI DE TESTARE Culturile de celule sunt expuse la substanța de testat, atât cu, cât și fără activare metabolică. După expunerea
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
METODEI DE TESTARE Culturile de celule sunt expuse la substanța de testat, atât cu, cât și fără activare metabolică. După expunerea celulelor la substanța de testat, acestea se tratează la intervale de timp prestabilite cu o substanță de inhibare a metafazei (de ex. Colcemid(r) sau colchicină), se recoltează, se colorează și celulele în metafază sunt analizate la microscop pentru detectarea aberațiilor cromozomiale. 1.4. DESCRIEREA METODEI DE TESTARE 1.4.1. Preparatele 1.4.1.1. Celulele Se pot utiliza
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
cât și fără activare metabolică. După expunerea celulelor la substanța de testat, acestea se tratează la intervale de timp prestabilite cu o substanță de inhibare a metafazei (de ex. Colcemid(r) sau colchicină), se recoltează, se colorează și celulele în metafază sunt analizate la microscop pentru detectarea aberațiilor cromozomiale. 1.4. DESCRIEREA METODEI DE TESTARE 1.4.1. Preparatele 1.4.1.1. Celulele Se pot utiliza diferite linii celulare, sușe de celule sau culturi de celule primare, inclusiv celule umane
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
precum și fixarea și colorarea acestora. 1.4.3.5. Analiza Toate lamelele, inclusiv cele cu martorii pozitivi și negativi, ar trebui să fie codificate independent înaintea analizei microscopice. Deoarece procedurile de fixare generează adesea scindarea unei proporții de celulele în metafază cu pierdere de cromozomi, toate celulele înregistrate ar trebui, prin urmare, să conțină un număr de centromeri egal cu numărul modal ≠ 2 pentru toate tipurile de celule. Pentru fiecare concentrație și fiecare martor ar trebui să se înregistreze cel puțin
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
toate celulele înregistrate ar trebui, prin urmare, să conțină un număr de centromeri egal cu numărul modal ≠ 2 pentru toate tipurile de celule. Pentru fiecare concentrație și fiecare martor ar trebui să se înregistreze cel puțin 200 de celule în metafază bine etalate, repartizate în mod egal între culturile în dublu exemplar, dacă este cazul. Atunci când se constată un număr mare de aberații, numărul menționat se poate reduce. Deși scopul testului este detectarea aberațiilor cromozomial-structurale ale cromozomilor, este important să se
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
ciclului celular, - sexul donatorilor de sânge, sângele complet sau limfocite izolate, mitogenul utilizat, - numărul de reînsămânțări, dacă este cazul, - metodele de întreținere a culturilor celulare, dacă este cazul, - numărul modal de cromozomi. Condițiile de testare: - identitatea substanței de inhibare a metafazei, concentrațiile acesteia și timpul de expunere a celulelor, - justificarea alegerii concentrațiilor și numărului de culturi, inclusiv datele de citotoxicitate și limitele de solubilitate, dacă sunt disponibile, - compoziția mediului, concentrația de CO2, dacă este cazul, - concentrația substanței de testat, - volumul vehiculului
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
de incubare, - timpul de incubare, - durata tratamentului, - densitatea celulară la însămânțare, dacă este cazul, - tipul și compoziția sistemului de activare metabolică, inclusiv criteriile de acceptabilitate, - martorii pozitivi și negativi, - metodele de preparare a lamelelor, - criteriile pentru numărătoarea aberațiilor, - numărul de metafaze analizate, - metodele de măsurare a toxicității, - criteriile utilizate la caracterizarea studiilor ca fiind pozitive, negative sau nesigure. Rezultatele: - semnele de toxicitate, de exemplu gradul de confluență, datele privind ciclul celular, numărătoarea celulelor, indexul mitotic, - semnele de precipitare, - datele privind valoarea
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
numărului de cromozomi față de numărul normal caracteristic pentru celulele utilizate. Poliploidie: multiplicare a numărului (n) de cromozomi haploizi, alta decât diploidia (adică 3n, 4n etc.). Aberație structurală: modificare a structurii cromozomilor, detectabilă la examinarea microscopică a celulelor în stadiul de metafază al diviziunii acestora, care se prezintă sub formă de deleții și fragmente, modificări intracromozomiale și intercromozomiale. 1.3. PRINCIPIUL METODEI DE TESTARE Animalele se expun la substanța de testat printr-o cale de expunere corespunzătoare și se sacrifică în momente
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
intercromozomiale. 1.3. PRINCIPIUL METODEI DE TESTARE Animalele se expun la substanța de testat printr-o cale de expunere corespunzătoare și se sacrifică în momente corespunzătoare după tratament. Înainte de sacrificare, animalele se supun tratamentului cu un agent de inhibare a metafazei (de exemplu colchicină sau Colcemid(r)). Apoi, din celulele de măduvă osoasă se realizează preparate cromozomiale care se colorează și celulele în metafază se examinează pentru a se pune în evidență aberațiile cromozomiale. 1.4. DESCRIEREA METODEI DE TESTARE 1
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]