164 matches
-
tulpini haploide, cum ar fi măsurarea transformării din mutanți roșii, care au nevoie de adenină (ade-1, ade-2), în mutanți albi cu nevoi duble de adenină, și metode selective precum inducerea rezistenței la canavnaină și cicloheximidă. Cel mai folosit sistem de reversie validat presupune folosirea sușei haploide XV185-14C, care conține mutații de codon non-sens ade 2-1, arg 4-17, lys 1-1 și trp 5-48, reversibile prin acțiunea agenților mutageni responsabili de substituția de bază, care induc mutații într-un locus specific sau mutații
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
sușă care necesită un aminoacid (histidină sau respectiv triptofan) pentru a produce o sușă independentă de aportul exterior de aminoacid. Mutageni care provoacă substituția perechilor de bază sunt agenți care provoacă substituirea unei baze din ADN. Într-un test de reversie, acest tip de modificare poate să se producă la locul mutației inițiale sau într-un al doilea loc în genomul bacterian. Mutageni de decalare a cadrului de citire sunt agenți care produc adăugarea sau deleția uneia sau a mai multor
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
1535; TA 1537 sau TA97a sau TA97; TA98 și TA100) pentru care comparațiile între laboratoare au indicat că sunt fiabile și dau răspunsuri reproductibile. Cele patru sușe de S. typhimurium menționate posedă perechi de bază GC în primul situs de reversie și se cunoaște că acestea nu pot să detecteze anumiți agenți mutageni oxidanți, agenți de reticulare și unele hidrazine. Detectarea acestor substanțe este posibilă cu ajutorul sușelor de E. coli WP2 sau de S. typhimurium TA102 (19) care posedă o pereche
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
să detecteze anumiți agenți mutageni oxidanți, agenți de reticulare și unele hidrazine. Detectarea acestor substanțe este posibilă cu ajutorul sușelor de E. coli WP2 sau de S. typhimurium TA102 (19) care posedă o pereche de bază AT în situsul primar de reversie. Combinația de sușe recomandată este, prin urmare, următoarea: − S. typhimurium TA1535 și − S. typhimurium TA1537 sau TA97 sau TA97a și − S. typhimurium TA98 și − S. typhimurium TA100 și − E. coli WP2 uvrA sau E. coli WP2 uvrA (pKM101) sau S.
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
în S. typhimurium prin sensibilizare la cristal violet și mutația uvrA în E. coli sau mutația uvrB în S.typhimurium prin sensibilizare la lumina ultravioletă) (2) (3). De asemenea, sușele ar trebui să producă un număr de colonii spontane de reversie pe fiecare placă, între limitele de frecvență estimate pe baza datelor de laborator anterioare și, de preferință, între limitele semnalate în literatura de specialitate. 1.5.1.2. Mediul Se utilizează o geloză minimală corespunzătoare (de ex. una care conține
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
urmează se utilizeze sunt citotoxicitatea și solubilitatea în amestecul final de tratare. Ar putea fi util un test preliminar pentru determinarea toxicității și caracteristicilor de solubilitate. Detectarea citotoxicității poate fi posibilă printr-o reducere a numărului de colonii care provoacă reversia, o clarificare și diminuare a fondului de bacterii sau a gradului de supraviețuire a culturilor tratate. Prezența sistemelor de activare metabolică poate să influențeze citotoxicitatea unei substanțe. Insolubilitatea ar trebui să fie evaluată prin formarea în amestecul final, în condiții
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
ex. în vase închise ermetic (12) (14) (15) (16). 1.5.4. Incubarea Toată plăcile dintr-un test dat ar trebui să fie incubate la 37oC timp de 48-72 de ore. După incubare, se procedează la numărătoarea coloniilor care provoacă reversia de pe fiecare placă. 2. DATELE 2.1. PRELUCRAREA REZULTATELOR Datele ar trebui să se prezinte sub forma numărului de colonii care provoacă reversia de pe fiecare placă. De asemenea, ar trebui să se prezinte numărul de colonii care provoacă reversie, atât
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
incubate la 37oC timp de 48-72 de ore. După incubare, se procedează la numărătoarea coloniilor care provoacă reversia de pe fiecare placă. 2. DATELE 2.1. PRELUCRAREA REZULTATELOR Datele ar trebui să se prezinte sub forma numărului de colonii care provoacă reversia de pe fiecare placă. De asemenea, ar trebui să se prezinte numărul de colonii care provoacă reversie, atât pe plăcile cu martor negativ (martor solvent și martor netratat, dacă s-a utilizat), cât și pentru plăcile cu martor pozitiv. Ar trebui
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
provoacă reversia de pe fiecare placă. 2. DATELE 2.1. PRELUCRAREA REZULTATELOR Datele ar trebui să se prezinte sub forma numărului de colonii care provoacă reversia de pe fiecare placă. De asemenea, ar trebui să se prezinte numărul de colonii care provoacă reversie, atât pe plăcile cu martor negativ (martor solvent și martor netratat, dacă s-a utilizat), cât și pentru plăcile cu martor pozitiv. Ar trebui să se prezinte numărătoarea pentru fiecare placă, numărul mediu de colonii care provoacă reversia pentru fiecare
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
care provoacă reversie, atât pe plăcile cu martor negativ (martor solvent și martor netratat, dacă s-a utilizat), cât și pentru plăcile cu martor pozitiv. Ar trebui să se prezinte numărătoarea pentru fiecare placă, numărul mediu de colonii care provoacă reversia pentru fiecare placă și deviația standard pentru substanța de testat și pentru martorii pozitivi și negativi (netratați și/sau solvent). Nu este necesară verificarea unui răspuns clar pozitiv. Rezultatele nesigure ar trebui să fie clarificate prin teste suplimentare, realizate de
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
activare metabolică. 2.2. EVALUAREA ȘI INTERPRETAREA REZULTATELOR Există câteva criterii pentru determinarea unui rezultat pozitiv, precum creșterea în funcție de concentrație peste intervalul testat și/sau o creștere reproductibilă a uneia sau mai multor concentrații ale numărului de colonii care provoacă reversia per placă, la cel puțin o sușă cu sau fără sistem de activare metabolică (23). În primul rând ar trebui să se aibă în vedere relevanța biologică a rezultatelor. Pentru evaluarea rezultatelor testelor se poate recurge și la ajutorul unor
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
dozei și numărului de plăci per concentrație, - mediile utilizate, - tipul și compoziția sistemului de activare metabolică, inclusiv criteriile de acceptabilitate, - procedurile de tratament. Rezultatele: - semnele de toxicitate, - semnele de precipitare, - numărătoarea pentru fiecare placă, - numărul mediu de colonii care provoacă reversia pentru fiecare placă și deviația standard - relația doză-răspuns, dacă este posibil, - analizele statistice, dacă există, - datele privind martorii negativi (solvent/vehicul) și pozitivi studiați în paralel, cu domenii, valori medii și deviații standard, - datele privind martorii negativi (solvent/vehicul) și
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
REVERSĂ PE ESCHERICHIA COLI) 1. METODĂ 1.1. INTRODUCERE Vezi introducerea generală: partea B (punctul A). 1.2. DEFINIȚIE Vezi introducerea generală: partea B (punctul C). 1.3. SUBSTANȚE DE REFERINȚĂ Nici una. 1.4. PRINCIPIUL METODEI DE TESTARE Sistemul de reversie cu triptofan al E. coli (trp) este un test microbian care permite măsurarea reversiei trp-→trp+ datorată unor substanțe chimice responsabile de substituția de bază la nivelul genomului uman. Se expun bacteriile la substanțele de testare cu sau fără activare
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
punctul A). 1.2. DEFINIȚIE Vezi introducerea generală: partea B (punctul C). 1.3. SUBSTANȚE DE REFERINȚĂ Nici una. 1.4. PRINCIPIUL METODEI DE TESTARE Sistemul de reversie cu triptofan al E. coli (trp) este un test microbian care permite măsurarea reversiei trp-→trp+ datorată unor substanțe chimice responsabile de substituția de bază la nivelul genomului uman. Se expun bacteriile la substanțele de testare cu sau fără activare metabolică. După o perioadă de incubație adecvată minimă pe mediul în cauză, se numără
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
unor substanțe chimice responsabile de substituția de bază la nivelul genomului uman. Se expun bacteriile la substanțele de testare cu sau fără activare metabolică. După o perioadă de incubație adecvată minimă pe mediul în cauză, se numără coloniile derivate prin reversie și se compară numărul obținut cu cel al revertanților spontani observați într-o cultură martor netratată și / sau în prezența solventului. 1.5. CRITERII DE CALITATE Nici unul. 1.6. DESCRIEREA METODEI DE TESTARE Testul se poate realiza prin metodele următoare
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
4. Concentrația substanței de testare per placă Se testează cel puțin cinci concentrații diferite de substanță, alese în progresie semilogaritmică. Substanțele se testează până la limita solubilității sau toxicității. Toxicitatea este evidențiată printr-o reducere a numărului de colonii care suferă reversii spontane, o limpezire a fundalului sau prin gradul de supraviețuire a culturilor tratate. Substanțele netoxice se testează la concentrația de 5 mg /cutie pentru a putea considera testul negativ. 1.6.2.5. Condiții de incubație Cutiile se incubează la
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
se amestecă și se varsă la suprafața unei cutii de agar-agar selectiv. Agar-agarul de acoperire se solidifică, iar cutiile se incubează la 37șC timp de 48 până la 72 de ore. La sfârșitul perioadei de incubație, se numără coloniile derivate prin reversie pe cutie. Pentru metoda de preincubare, se incubează în prealabil un amestec conținând substanța de testare, 0,1 ml de cultură bacteriană proaspătă și o cantitate adecvată de amestec de activare de enzime hepatice sau aceeași cantitate de soluție tampon
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
de încorporare directă pe cutie. Toate cutiile pregătite pentru cele două metode se pregătesc în cel puțin trei exemplare. 2. DATE Atât pentru seriile martor cât și pentru cele tratate, se prezintă numărul de colonii în care s-au produs reversii pe fiecare cutie. Pentru substanța de testare și pentru martori se prezintă rezultatele pentru fiecare cutie, numărul mediu per cutie al coloniilor derivate prin reversie și deviația standard. Rezultatele se evaluează prin metode statistice adecvate. Se efectuează cel puțin două
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
cât și pentru cele tratate, se prezintă numărul de colonii în care s-au produs reversii pe fiecare cutie. Pentru substanța de testare și pentru martori se prezintă rezultatele pentru fiecare cutie, numărul mediu per cutie al coloniilor derivate prin reversie și deviația standard. Rezultatele se evaluează prin metode statistice adecvate. Se efectuează cel puțin două experimente independente. Nu este obligatoriu ca al doilea experiment să se desfășoare în mod identic cu experimentul inițial. Anumite condiții de testare pot fi modificate
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
conține, dacă este posibil, următoarele informații: - bacterii, linii folosite; - condiții experimentale: doze, toxicitate, compoziția mediilor de cultură, metodele de tratament (preincubație, incubație), sistemul activator metabolic, substanțe de referință, martori negativi; - rezultatele individuale, numărul mediu per cutie al coloniilor derivate prin reversie, deviația standard, relația doză/efect, dacă este posibil; - discutarea rezultatelor; - interpretarea rezultatelor. 3.2. Evaluare și interpretare Vezi introducerea generală: partea B (punctul D). 4. REFERINȚE BIBLIOGRAFICE Vezi introducerea generală: partea B (punctul E). B.14. MUTAGENEZA (TEST DE MUTAȚIE
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
REVERSĂ PE SALMONELLA TYPHIMURIUM ) 1. METODĂ 1.1. INTRODUCERE Vezi introducerea generală: partea B (punctul A). 1.2. DEFINIȚIE Vezi introducerea generală: partea B (punctul C). 1.3. SUBSTANȚE DE REFERINȚĂ Nici una. 1.4. PRINCIPIUL METODEI DE TESTARE Sistemul de reversie cu histidină (his) al Salmonella typhimurium este un test microbian care permite măsurarea reversiei his- - his+ indusă de substanțe chimice responsabile pentru substituția de bază sau a mutațiilor care deplasează cadrul de citire în genomul organismului. Se expun bacteriile la
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
punctul A). 1.2. DEFINIȚIE Vezi introducerea generală: partea B (punctul C). 1.3. SUBSTANȚE DE REFERINȚĂ Nici una. 1.4. PRINCIPIUL METODEI DE TESTARE Sistemul de reversie cu histidină (his) al Salmonella typhimurium este un test microbian care permite măsurarea reversiei his- - his+ indusă de substanțe chimice responsabile pentru substituția de bază sau a mutațiilor care deplasează cadrul de citire în genomul organismului. Se expun bacteriile la substanța de testare cu sau fără activare metabolică și se varsă la suprafața unui
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
mutațiilor care deplasează cadrul de citire în genomul organismului. Se expun bacteriile la substanța de testare cu sau fără activare metabolică și se varsă la suprafața unui mediu minim. După o perioadă de incubație adecvată, se numără coloniile derivate prin reversie și se compară numărul obținut cu cel al revertanților spontani observați într-o cultură martor netratată și/sau în prezența solventului. 1.5. CRITERII DE CALITATE Nici unul. 1.6. DESCRIEREA METODEI DE TESTARE 1.6.1. Pregătiri 1.6.1
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
martorilor negativi și pozitivi Se folosesc simultan culturi martor netratate și culturi martor tratate cu solvent. Martorii pozitivi se folosesc în două scopuri: (i) pentru confirmarea sensibilității liniilor bacteriene; Pentru testele fără activare metabolică se pot utiliza următorii compuși: Sușă Reversie cu: TA 1535, TA 100 azida de sodiu TA 1538, TA 98, TA 97 2-nitrofluoren TA 1537 9-aminoacridina TA 102 hidroperoxid de cumen (ii) pentru a asigura acțiunea activatorului de sistem metabolic. Unul din martorii pozitivii pentru activatorul sistemului metabolic
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
2.4. Concentrația substanței testate per placă Se testează cel puțin cinci concentrații diferite de substanță, alese în progresie semilogaritmică. Substanțele se testează până la limita solubilității sau toxicității. Toxicitatea este evidențiată printr-o reducere a numărului de colonii care suferă reversii spontane, o limpezire a fundalului sau prin gradul de supraviețuire a culturilor tratate. Substanțele netoxice se testează la concentrația de 5 mg /cutie pentru a putea considera testul negativ. 1.6.2.5. Condiții de incubație Plăcile se incubează la
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]