942 matches
-
mare de 50%. Pot fi, de asemenea, folosite alte linii celulare sau medii de creștere cu eficacitate dovedită. Se vor adăuga 225 f2æl de supernatant de cultură ce se presupune a fi infectată cu virus în fiecare din cele două godeuri, se amestecă și se transferă 225 f2æl pe următoarele două godeuri la o diluție de 1:5. Două godeuri suplimentare vor fi lăsate neinoculate pentru a servi drept martor. Probele de la fiecare fermă piscicola vor fi lucrate pe lame separate
EUR-Lex () [Corola-website/Law/176411_a_177740]
-
sau medii de creștere cu eficacitate dovedită. Se vor adăuga 225 f2æl de supernatant de cultură ce se presupune a fi infectată cu virus în fiecare din cele două godeuri, se amestecă și se transferă 225 f2æl pe următoarele două godeuri la o diluție de 1:5. Două godeuri suplimentare vor fi lăsate neinoculate pentru a servi drept martor. Probele de la fiecare fermă piscicola vor fi lucrate pe lame separate, la fel și cele care servesc drept martori. Virusul se controlează
EUR-Lex () [Corola-website/Law/176411_a_177740]
-
vor adăuga 225 f2æl de supernatant de cultură ce se presupune a fi infectată cu virus în fiecare din cele două godeuri, se amestecă și se transferă 225 f2æl pe următoarele două godeuri la o diluție de 1:5. Două godeuri suplimentare vor fi lăsate neinoculate pentru a servi drept martor. Probele de la fiecare fermă piscicola vor fi lucrate pe lame separate, la fel și cele care servesc drept martori. Virusul se controlează folosindu-se un izolat de referință al virusului
EUR-Lex () [Corola-website/Law/176411_a_177740]
-
incubate la 14±2°C și examinate microscopic în timp de cel mult 7 zile. Dacă se observă ECP într-un stadiu incipient sau dacă acest lucru nu apare în timpul celor 7 zile, următoarea etapă va fi fixarea. Pentru aceasta, godeurile vor fi spălate cu PBS și fixate prin incubare cu acetona 80% timp de 20 de minute la temperatura camerei. Lamelele vor fi uscate la aer și colorate imediat sau stocate la o temperatură cuprinsă între 0 și 6°C
EUR-Lex () [Corola-website/Law/176411_a_177740]
-
timp de 20 de minute la temperatura camerei. Lamelele vor fi uscate la aer și colorate imediat sau stocate la o temperatură cuprinsă între 0 și 6°C pentru maximum 24 de ore înainte de colorare. III.6.1.3. Duplicatele godeurilor vor fi colorate cu anticorpi monoclonali 3H6F8 de virusul AIS sau orice alt anticorp monoclonal ale cărui eficacitate și specificitate au fost dovedite, diluate în PBS și incubate la temperatura de 37 ± 4��C timp de 30 de minute. Anticorpii
EUR-Lex () [Corola-website/Law/176411_a_177740]
-
de 30 de minute. Anticorpii monoclonali vor fi îndepărtați și lamelele vor fi spălate de trei ori cu Tween 20 0,05% în PBS. Conjugatul IgG marcat cu FITC (izotiocianat de fluoresceina) antisoarece diluat în PBS trebuie adăugat în fiecare godeu și incubat la temperatura de 37 ± 4°C timp de 30 de minute. Notă: diluțiile de la loturi diferite de anticorpi monoclonali și conjugatul FITC trebuie optimizate în fiecare laborator. III.6.1.4. Godeurile trebuie examinate imediat, folosindu-se un
EUR-Lex () [Corola-website/Law/176411_a_177740]
-
în PBS trebuie adăugat în fiecare godeu și incubat la temperatura de 37 ± 4°C timp de 30 de minute. Notă: diluțiile de la loturi diferite de anticorpi monoclonali și conjugatul FITC trebuie optimizate în fiecare laborator. III.6.1.4. Godeurile trebuie examinate imediat, folosindu-se un microscop inversat, echipat pentru examinarea fluorescentei cu un filtru corespunzător pentru stimularea FITC. Un test este considerat pozitiv dacă se observă celule flourescente. Pentru că un test să fie valid trebuie că martorii pozitivi să
EUR-Lex () [Corola-website/Law/176411_a_177740]
-
4. Confirmarea prin PCR a virusului AIS izolat în cultura tisulara Dacă un efect citopatic (ECP) complet a fost observat în cursul examin��rii virusologice a probelor de țesut în celulele SHK-1, se vor îndepărta 400 f2æl de supernatant de pe godeu și vor fi puse într-un tub steril de 1,5 ml. Se va extrage ARN din această probă, după cum s-a arătat la pct. III.1, si se va efectua testul PCR-RT. Dacă sunt folosite culturi fără CPE complet
EUR-Lex () [Corola-website/Law/176411_a_177740]
-
5 ml. Se va extrage ARN din această probă, după cum s-a arătat la pct. III.1, si se va efectua testul PCR-RT. Dacă sunt folosite culturi fără CPE complet, supernatantul va fi îndepărtat, celulele vor fi răzuite de pe suprafață godeului sau flaconului și plasate într-un tub steril de 1,5 ml pentru a se extrage ARN și a se efectua un test PCR-RT. IV.1.5. Confirmarea produselor de PCR cu ajutorul probelor ADN a) Specificitatea unui produs PCR de
EUR-Lex () [Corola-website/Law/176411_a_177740]
-
fosfat salin. ... c) Laboratorul de referință comunitar va recomanda utilizarea că antigene standard virusurile H5 și H7 cu virulenta scăzută. ... 2. Metodă de lucru se efectuează după cum urmează: a) se distribuie câte 0,025 ml tampon fosfat salin în fiecare godeu al unei microplaci din material plastic; se utilizează cele cu baza în formă de V; ... b) se adaugă 0,025 ml suspensie de virus, adică lichid alantoidian în primul godeu; ... c) se utilizează un microdilutor și se realizează diluții binare
EUR-Lex () [Corola-website/Law/176932_a_178261]
-
distribuie câte 0,025 ml tampon fosfat salin în fiecare godeu al unei microplaci din material plastic; se utilizează cele cu baza în formă de V; ... b) se adaugă 0,025 ml suspensie de virus, adică lichid alantoidian în primul godeu; ... c) se utilizează un microdilutor și se realizează diluții binare de la 1/2 la 1/4096 din godeu în godeu; ... d) se adaugă 0,025 ml tampon fosfat salin în fiecare godeu; ... e) se adaugă 0,025 ml eritrocite 1
EUR-Lex () [Corola-website/Law/176932_a_178261]
-
utilizează cele cu baza în formă de V; ... b) se adaugă 0,025 ml suspensie de virus, adică lichid alantoidian în primul godeu; ... c) se utilizează un microdilutor și se realizează diluții binare de la 1/2 la 1/4096 din godeu în godeu; ... d) se adaugă 0,025 ml tampon fosfat salin în fiecare godeu; ... e) se adaugă 0,025 ml eritrocite 1% în fiecare godeu; ... f) se amestecă agitând ușor și se lasă în repaus la temperatura de 4°C
EUR-Lex () [Corola-website/Law/176932_a_178261]
-
cu baza în formă de V; ... b) se adaugă 0,025 ml suspensie de virus, adică lichid alantoidian în primul godeu; ... c) se utilizează un microdilutor și se realizează diluții binare de la 1/2 la 1/4096 din godeu în godeu; ... d) se adaugă 0,025 ml tampon fosfat salin în fiecare godeu; ... e) se adaugă 0,025 ml eritrocite 1% în fiecare godeu; ... f) se amestecă agitând ușor și se lasă în repaus la temperatura de 4°C; ... g) se
EUR-Lex () [Corola-website/Law/176932_a_178261]
-
suspensie de virus, adică lichid alantoidian în primul godeu; ... c) se utilizează un microdilutor și se realizează diluții binare de la 1/2 la 1/4096 din godeu în godeu; ... d) se adaugă 0,025 ml tampon fosfat salin în fiecare godeu; ... e) se adaugă 0,025 ml eritrocite 1% în fiecare godeu; ... f) se amestecă agitând ușor și se lasă în repaus la temperatura de 4°C; ... g) se citesc plăcile după 30 - 40 de minute de la terminarea sedimentarii martorilor; se
EUR-Lex () [Corola-website/Law/176932_a_178261]
-
utilizează un microdilutor și se realizează diluții binare de la 1/2 la 1/4096 din godeu în godeu; ... d) se adaugă 0,025 ml tampon fosfat salin în fiecare godeu; ... e) se adaugă 0,025 ml eritrocite 1% în fiecare godeu; ... f) se amestecă agitând ușor și se lasă în repaus la temperatura de 4°C; ... g) se citesc plăcile după 30 - 40 de minute de la terminarea sedimentarii martorilor; se citesc plăcile prin înclinare, pentru a observa prezența sau absența unui
EUR-Lex () [Corola-website/Law/176932_a_178261]
-
și având 4 sau 8 unități hemaglutinante/0,025 ml; ... c) eritrocite 1% de pui; ... d) ser de pui martor negativ; e) ser martor pozitiv. ... 2. Metodă de lucru: a) se distribuie 0,025 ml tampon fosfat salin în toate godeurile unei microplaci din material plastic; godeurile au baza în formă de V; ... b) se adaugă 0,025 ml ser în primul godeu al plăcii; ... c) se utilizează un microdilutor pentru realizarea diluțiilor duble din godeu în godeu; ... d) se adaugă
EUR-Lex () [Corola-website/Law/176932_a_178261]
-
hemaglutinante/0,025 ml; ... c) eritrocite 1% de pui; ... d) ser de pui martor negativ; e) ser martor pozitiv. ... 2. Metodă de lucru: a) se distribuie 0,025 ml tampon fosfat salin în toate godeurile unei microplaci din material plastic; godeurile au baza în formă de V; ... b) se adaugă 0,025 ml ser în primul godeu al plăcii; ... c) se utilizează un microdilutor pentru realizarea diluțiilor duble din godeu în godeu; ... d) se adaugă 0,025 ml lichid alantoidian conținând
EUR-Lex () [Corola-website/Law/176932_a_178261]
-
ser martor pozitiv. ... 2. Metodă de lucru: a) se distribuie 0,025 ml tampon fosfat salin în toate godeurile unei microplaci din material plastic; godeurile au baza în formă de V; ... b) se adaugă 0,025 ml ser în primul godeu al plăcii; ... c) se utilizează un microdilutor pentru realizarea diluțiilor duble din godeu în godeu; ... d) se adaugă 0,025 ml lichid alantoidian conținând 4 sau 8 unități hemaglutinante; ... e) se amestecă agitând ușor și se lasă în repaus placă
EUR-Lex () [Corola-website/Law/176932_a_178261]
-
tampon fosfat salin în toate godeurile unei microplaci din material plastic; godeurile au baza în formă de V; ... b) se adaugă 0,025 ml ser în primul godeu al plăcii; ... c) se utilizează un microdilutor pentru realizarea diluțiilor duble din godeu în godeu; ... d) se adaugă 0,025 ml lichid alantoidian conținând 4 sau 8 unități hemaglutinante; ... e) se amestecă agitând ușor și se lasă în repaus placă la temperatura de 4°C, cel putin 60 de minute sau la temperatura
EUR-Lex () [Corola-website/Law/176932_a_178261]
-
salin în toate godeurile unei microplaci din material plastic; godeurile au baza în formă de V; ... b) se adaugă 0,025 ml ser în primul godeu al plăcii; ... c) se utilizează un microdilutor pentru realizarea diluțiilor duble din godeu în godeu; ... d) se adaugă 0,025 ml lichid alantoidian conținând 4 sau 8 unități hemaglutinante; ... e) se amestecă agitând ușor și se lasă în repaus placă la temperatura de 4°C, cel putin 60 de minute sau la temperatura ambianța, cel
EUR-Lex () [Corola-website/Law/176932_a_178261]
-
agitând ușor și se lasă în repaus placă la temperatura de 4°C, cel putin 60 de minute sau la temperatura ambianța, cel putin 30 de minute; ... f) se adaugă 0,025 ml din suspensia de eritrocite 1% în toate godeurile; ... g) se amestecă agitând ușor și se lasă în repaus la temperatura de 4°C; ... h) se citește placă după 30 - 40 de minute, la sedimentarea hematiilor martor; se face citirea prin inclinarea plăcii pentru a se observă prezența sau
EUR-Lex () [Corola-website/Law/176932_a_178261]
-
h) se citește placă după 30 - 40 de minute, la sedimentarea hematiilor martor; se face citirea prin inclinarea plăcii pentru a se observă prezența sau absența unui flux în formă de lacrima, care se înclină în același mod că și godeurile martor care conțin numai hematii - 0,025 ml și tampon fosfat salin -0,025 ml; ... i) titrul inhibohemaglutinant corespunde celei mai mari diluții de antiser care a determinat o inhibare completă a 4 sau 8 unități de virus; pentru fiecare
EUR-Lex () [Corola-website/Law/176932_a_178261]
-
U(1)]. Aceste patru concentrații ale extractului și etalonului trebuie, în mod necesar, să fie plasate în fiecare placă. În acest scop, se aleg plăci destul de mari pentru a permite să fie realizate în mediu de agar cel puțin opt godeuri cu un diametru de 10 până la 13 mm și la nu mai puțin de 30 mm între centre. Testul poate fi efectuat pe plăci formate dintr-o placă de sticlă cu o fată din aluminiu sau un inel din plastic
EUR-Lex () [Corola-website/Law/165046_a_166375]
-
cantitate din mediul (4.2), însămânțat cum este indicat la punctul 8.1., pentru a se obține un strat de aproximativ 2 mm grosime (60 ml pentru o placă de 200 mm diametru). Se lasă să se solidifice, se realizează godeuri și se pun în acestea volume de probă exact măsurate și soluții standard (între 0,10 și 0,15 ml/godeu, conform diametrului). Se utilizează fiecare concentrație de cel puțin patru ori, astfel încât fiecare determinare să fie supusă unei evaluări
EUR-Lex () [Corola-website/Law/165046_a_166375]
-
2 mm grosime (60 ml pentru o placă de 200 mm diametru). Se lasă să se solidifice, se realizează godeuri și se pun în acestea volume de probă exact măsurate și soluții standard (între 0,10 și 0,15 ml/godeu, conform diametrului). Se utilizează fiecare concentrație de cel puțin patru ori, astfel încât fiecare determinare să fie supusă unei evaluări a 32 zone de inhibiție. 8.3. Incubație Se incubează plăcile timp de aproximativ 18 ore, la 35-37°C. 9. Evaluare
EUR-Lex () [Corola-website/Law/165046_a_166375]