261 matches
-
colonii homozigote recesive sau sectoare produse în sușele heterozigote. Conversia genică se analizează prin producerea de revertanți prototrofici într-o sușă auxotrofică heteroalelică, purtătoare a două alele defective diferite ale aceleiași gene. Tulpinile cele mai folosite la decelarea conversiei genice mitotice sunt D4 (heteroalelică la ade2 și trp5), D7 (heteroalelică la trp5), BZ34 (heteroalelică la arg4) și JD1 (heteroalelică la his4 și trp5). Încrucișarea mitotică ce produce sectoare homozigote roșu și roz poate fi analizată în D5 sau în D7 (care
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
a două alele defective diferite ale aceleiași gene. Tulpinile cele mai folosite la decelarea conversiei genice mitotice sunt D4 (heteroalelică la ade2 și trp5), D7 (heteroalelică la trp5), BZ34 (heteroalelică la arg4) și JD1 (heteroalelică la his4 și trp5). Încrucișarea mitotică ce produce sectoare homozigote roșu și roz poate fi analizată în D5 sau în D7 (care, de asemenea, măsoară conversia genică mitotică și mutația reversă la ilv1-92), ambele sușe fiind heteroalelice pentru alelele complementare ale ade2. 1.5. Criterii de
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
și trp5), D7 (heteroalelică la trp5), BZ34 (heteroalelică la arg4) și JD1 (heteroalelică la his4 și trp5). Încrucișarea mitotică ce produce sectoare homozigote roșu și roz poate fi analizată în D5 sau în D7 (care, de asemenea, măsoară conversia genică mitotică și mutația reversă la ilv1-92), ambele sușe fiind heteroalelice pentru alelele complementare ale ade2. 1.5. Criterii de calitate Nici unul. 1.6. Descrierea metodei de testare Pregătire Soluțiile substanțelor testate și ale compușilor martor sau de referință trebuie preparate chiar
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
Condițiile de desfășurare a testului Sușe celulare testate Sușele utilizate cel mai frecvent folosite sunt cele diploide D4, D5, D7 și JD1. Pot fi utilizate și alte sușe. Medii de cultură Pentru determinarea numărului de colonii supraviețuitoare și frecvența recombinărilor mitotice trebuie folosite medii de cultură adecvate. Folosirea martorilor negativi și pozitivi Martorii pozitivi, cei netratați și cei tratați cu solvent, trebuie preparați simultan. Pentru fiecare mecanism de recombinare specific se folosesc substanțe adecvate ca martor pozitiv . Concentrații de expunere Trebuie
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
microscopic în vederea decelării formării sporilor, prezența acestora invalidând testul. Condiții de incubație Cutiile se incubează între 4 și 7 zile la o temperatură de 28 - 30șC, la întuneric. Cutiile utilizate pentru determinarea sectoarelor homozigote roșu și roz produse prin încrucișare mitotică se păstrează în frigider la aproximativ 4˚C, timp de una-două zile înaintea numărării, pentru a permite dezvoltarea de colonii pigmentate corespunzătoare. Frecvențele recombinării mitotice spontane Se utilizează subculturi celulare cu o frecvență a mutațiilor spontane în limitele normale admise
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
30șC, la întuneric. Cutiile utilizate pentru determinarea sectoarelor homozigote roșu și roz produse prin încrucișare mitotică se păstrează în frigider la aproximativ 4˚C, timp de una-două zile înaintea numărării, pentru a permite dezvoltarea de colonii pigmentate corespunzătoare. Frecvențele recombinării mitotice spontane Se utilizează subculturi celulare cu o frecvență a mutațiilor spontane în limitele normale admise. Numărul replicatelor Se utilizează cel puțin trei cutii pe concentrație pentru analiza prototrofilor produși prin conversia mitotică genică și pentru analiza viabilității. În cazul analizei
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
permite dezvoltarea de colonii pigmentate corespunzătoare. Frecvențele recombinării mitotice spontane Se utilizează subculturi celulare cu o frecvență a mutațiilor spontane în limitele normale admise. Numărul replicatelor Se utilizează cel puțin trei cutii pe concentrație pentru analiza prototrofilor produși prin conversia mitotică genică și pentru analiza viabilității. În cazul analizei homozigotismului recesiv produs prin încrucișarea mitotică, numărul cutiilor trebuie să crească, astfel încât să furnizeze un număr corespunzător de colonii. Mod de operare Tratamentul sușelor de Saccharomices cerevisiae se realizează de obicei prin
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
cu o frecvență a mutațiilor spontane în limitele normale admise. Numărul replicatelor Se utilizează cel puțin trei cutii pe concentrație pentru analiza prototrofilor produși prin conversia mitotică genică și pentru analiza viabilității. În cazul analizei homozigotismului recesiv produs prin încrucișarea mitotică, numărul cutiilor trebuie să crească, astfel încât să furnizeze un număr corespunzător de colonii. Mod de operare Tratamentul sușelor de Saccharomices cerevisiae se realizează de obicei prin procedeul de testare în lichid, care presupune utilizarea fie de celule staționare, fie de
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
de testare cu și fără un sistem exogen de activare metabolică la mamifere, dacă este cazul, apoi sunt cultivate pe o perioadă de două cicluri de replicare într-un mediu ce conține BrdU. După tratarea cu un inhibitor de fus mitotic (de exemplu colchicină) pentru oprirea celulelor în stadiul de metafază al mitozei (c-metafaza), celulele sunt prelevate și se efectuează preparatele cromozomiale. 1.5. Criterii de calitate Nici unul. 1.6. Descrierea metodei de testare Pregătire Pentru acest test se pot
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
a adăugat BrdU se va lucra la întuneric sau iluminare slabă de la o sursă incandescentă până în momentul prelevării celulelor, pentru reducerea la minim a fotolizei ADN-ului care conține BrdU. Prelevarea celulelor Culturile se tratează cu un inhibitor de fus mitotic (de exemplu colchicină) cu 1 - 4 ore înainte de prelevarea celulelor. Fiecare cultură este prelevată și prelucrată separat în vederea obținerii preparatelor cromozomiale. Prepararea și colorarea cromozomilor Preparatele cromozomiale se obțin prin tehnici citogenetice standard. Colorarea lamelor pentru evidențierea SCE se poate
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
decela tipul de aberație cromatidiană și cromozomială. Metoda utilizează preparate din mamifere care au tratate cu substanța chimică de testare administrată pe căi specifice și sacrificate la diferite intervale de timp. Animalele sunt tratate în continuare cu inhibitori ai fusului mitotic cum ar fi colchicina pentru a opri celulele în stadiul de metafază a mitozei (c-metafază), apoi sunt sacrificate. Se realizează preparate cromozomiale pornind de la celule uscate în aer și apoi colorate, care se examinează microscopic. Analiza spermatocitelor în stadiul
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
fiind sacrificate la 24 de ore după ultima administrare. Se pot folosi recoltări suplimentare efectuate într-un interval de 6 - 24 ore. Pregătirea testiculelor Pentru analiza mitozelor spermatogoniilor, animalele sunt injectate intraperitoneal cu o doză adecvată de inhibitor al fusului mitotic (ex. colchicina). Apoi animalele sunt sacrificate la intervale de timp adecvate: pentru șoareci, intervalul variază între trei și cinci ore, în timp ce pentru hamsterii chinezești pot fi necesare mai mult de cinci ore. Se folosește tehnica de uscare la aer. Procedura
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
Protocolul trebuie să conțină, dacă este posibil, informațiile următoare: ― specia și rasa, vârsta și greutatea masculilor, ― numărul animalelor folosite atât în lotul tratat cât și în lotul martor, ― condițiile experimentale: descrierea detaliată a tratamentului, dozele folosite, excipientul, inhibitorul de fus mitotic utilizat, ― numărul celulelor analizate pentru fiecare animal din fiecare lot, ― tipurile și numărul anomaliilor pentru fiecare animal din fiecare lot (tratat și martor), ― evaluarea statistică a rezultatelor, ― discutarea rezultatelor, ― interpretarea rezultatelor. 3.2. Evaluare și interpretare Vezi introducerea generală: partea
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
necesară că animalul testat este purtătorul unei translocații. Dacă nu s-a produs nici o selecție prin reproducere, toți masculii F1 se examinează citogenetic. Se analizează microscopic minim 25 de celule în faza de diachineză-metafaza I pentru fiecare mascul. Examinarea metafazei mitotice în spermatogonii sau în celulele măduvei osoase este necesară la masculii F1 cu testicule mici și rupere meiotică înainte de diachineză sau la femele F1 suspecte XO. Prezența unui cromozom neobișnuit de lung și/sau scurt în fiecare a zecea celulă
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
cromozom neobișnuit de lung și/sau scurt în fiecare a zecea celulă indică un mascul cu sterilitate prin translocație (tip c-t). Anumite translocații X-autozomale care determină sterilitatea masculină pot fi identificate numai printr-o serie de analize ale cromozomilor mitotici. Prezența a 39 de cromozomi în toate cele 10 mitoze dovedește starea XO a unei femele. 2. DATE Datele sunt prezentate sub formă de tabele. Pentru fiecare perioadă de împerechere, se înregistrează raportul numeric între sexe și numărul mediu al
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
linii celulare stabilite, precum și culturi de celule primare. După expunerea la substanțele de testare în prezența și în absența unui amestec de activare a enzimelor hepatice (fracțiune postmitocondrială suplimentată cu cofactori), culturile celulare se tratează cu un inhibitor al fusului mitotic, precum colchinina în vederea acumulării celulelor în stadiu de tip metafază al mitozei (c-metafază). Celulele se recoltează la momente adecvate și se realizează preparate cromozomiale. Preparatele se colorează și celulele în metafază se analizează pentrua se evidenția anomaliile cromozomiale. 1
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
se folosește mixtura hepatică enzimatică activatoare, este folosit ca martor pozitiv un compus cunoscut că necesită activare metabolică. Doze: Se folosesc cel puțin trei doze din substanța de testare situate în cel puțin un interval logaritmic. Doza maximă inhibă activitatea mitotică în proporție de aproximativ 50% sau prezintă câteva alte semne de citotoxicitate. Dacă nu este toxică, substanța se testează până la limita superioară a solubilității sau până la o concentrație maximă de 5 mg/ml. Condiții de cultură: Se folosesc medii de
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
fixare multipli în vederea prelevării eșantioanelor de celule care se găseau în stadii diferite ale ciclului celular în momentul tratamentului, adică G1, S și G2. Recoltarea celulelor: Înainte de recoltare, culturile celulare se tratează o perioadă adecvată cu un inhibitor de fus mitotic. Fiecare cultură se recoltează și se prelucrează separat în vederea preparării cromozomilor. Sunt necesari minim doi timpi de prelevare. Se recomandă ca primul timp să fie după aproximativ un ciclu celular, iar cel de-al doilea mai târziu. Acest lucru asigură
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
metafaze bine etalate. Înainte de analiză, lamele se codează. Pentru limfocitele umane se analizează doar metafazele care conțin 46 de centromeri. În liniile celulare stabilite se analizează numai metafazele ce conțin ±2 centromeri din numărul modal. În plus, se calculează indicele mitotic sau alți indicatori de citotoxicitate pe parcursul experimentului la fiecare doză. 2. DATE Datele se sistematizează în tabele. Aberațiile de tip cromatidian (lacune, fisuri, translocări reciproce), aberațiile de tip cromozomic (lacune, fisuri, cromozomi minut, inele, dicentrice, policentrice) și numărul de metafaze
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
3. RAPORT 3.1. Protocol de test Protocolul testului cuprinde, dacă este posibil, următoarele date: - celulele folosite, - condițiile experimentale: compoziția mediului, concentrația CO2, temperatura de incubare, timpul de incubare, nivelul dozelor, timpul de tratare, durata tratamentului cu inhibitor de fus mitotic și concentrația acestuia, tipul de amestec hepatic enzimatic activator folosit, martorii pozitivi și negativi, - numărul de culturi celulare, - numărul de metafaze analizate (datele se raportează separat pentru fiecare cultură), - indicele mitotic sau alți indicatori de citotoxicitate, - tipul și numărul de
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
timpul de tratare, durata tratamentului cu inhibitor de fus mitotic și concentrația acestuia, tipul de amestec hepatic enzimatic activator folosit, martorii pozitivi și negativi, - numărul de culturi celulare, - numărul de metafaze analizate (datele se raportează separat pentru fiecare cultură), - indicele mitotic sau alți indicatori de citotoxicitate, - tipul și numărul de aberații raportate separat pentru fiecare cultură tratată sau martor, numărul modal al cromozomilor liniilor celulare stabilite folosite, - evaluarea statistică, - discutarea rezultatelor, - interpretarea rezultatelor. 3.2. Evaluare și interpretare Vezi introducerea generală
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
schemă de tratament repetat, pot fi utilizate doze repetate, iar probele se recoltează la 6 și la 24 de ore de la ultimul tratament. Pregătirea măduvei osoase Înainte de sacrificarea animalelor, li se injectează intraperitoneal o doză adecvată de inhibitor de fus mitotic în vederea obținerii unui număr de celule adecvate în metafază. Măduva osoasă se prelevează prin clătire cu ajutorul unei soluții izotonice, din femurul animalelor proaspăt sacrificate. După un tratament hipotonic adecvat, celulele se fixează, apoi se întind pe lame. După uscarea la
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
lamele se colorează. Analiză Lamele se codează înainte de a fi folosite la microscop. Se analizează cel puțin 50 de metafaze bine etalate, incluzând numărul complet de centromeri pe animal pentru a evidenția aberații cromozomiale structurale. Se pot stabili și indexuri mitotice pentru fiecare animal. 2. DATE Datele se prezintă sub formă de tabele. Aberațiile de tip cromatidian și izocromatidian (lacune, fisuri, rearanjări) și numărul de metafaze anormale (lacune incluse și excluse), precum și indexurile mitotice (când se stabilesc) se înregistrează separat pentru
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
cromozomiale structurale. Se pot stabili și indexuri mitotice pentru fiecare animal. 2. DATE Datele se prezintă sub formă de tabele. Aberațiile de tip cromatidian și izocromatidian (lacune, fisuri, rearanjări) și numărul de metafaze anormale (lacune incluse și excluse), precum și indexurile mitotice (când se stabilesc) se înregistrează separat pentru toate animalele tratate, ca și pentru animalele martor. Se înregistrează și mediile și diferențele tip obținute pentru fiecare lot tratat, precum și pentru fiecare lot martor. Datele se evaluează prin metode statistice adecvate. 3
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]
-
următoarele informații: - specia, linia și vârsta animalelor utilizate, - numărul animalelor de fiecare sex din loturile tratat și martor, - condițiile experimentale: descrierea detaliată a schemei de tratament și a planului de prelevare, mărimea dozelor, durata tratamentului și concentrația inhibitorului de fus mitotic, - numărul metafazelor analizate la fiecare animal, - indicii mitotici, dacă sunt determinați, - tipul și numărul aberațiilor, înregistrate separat pentru fiecare animal tratat și martor, - semne de toxicitate pe perioada desfășurării studiului, - evaluarea statistică, - discutarea rezultatelor, - interpretarea rezultatelor. 3.2. Evaluare și
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/87087_a_87874]