7,898 matches
-
limita superioară a concentrației se determină de la caz la caz. Condiții de incubație Cutiile se incubează timp de 4 - 7 zile, la o temperatură de 28 - 30șC, la întuneric. Frecvențele mutațiilor spontane Se folosesc subculturi celulare cu o frecvență a mutațiilor spontane în limitele normale admise. Numărul replicatelor Pentru analiza prototrofilor produși prin mutageneză și a viabilității celulare se utilizează cel puțin trei cutii pentru fiecare concentrație. În cazul experimentelor în care se utilizează marcatori cum ar fi hom 3-10 cu
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
admise. Numărul replicatelor Pentru analiza prototrofilor produși prin mutageneză și a viabilității celulare se utilizează cel puțin trei cutii pentru fiecare concentrație. În cazul experimentelor în care se utilizează marcatori cum ar fi hom 3-10 cu o rată scăzută a mutațiilor, numărul cutiilor trebuie să crească, astfel încât să se poată obțină rezultate relevante din punct de vedere statistic. Mod de operare Tratamentul sușelor de Saccharomices cerevisiae se realizează de obicei printr-o metodă de testare în lichid care presupune utilizarea fie
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
necesar; pe parcursul expunerii, se adaugă o cantitate corespunzătoare de sistem de activare metabolică. La sfârșitul tratamentului, celulele sunt centrifugate, spălate și însămânțate pe un mediu de cultură potrivit. După incubație, cutiile sunt inventariate în vederea stabilirii ratei de supraviețuire și a mutațiilor genice produse. Dacă primul experiment este negativ, trebuie realizat un al doilea experiment, folosind celule în fază staționară. Dacă primul experiment este pozitiv, acesta trebuie confirmat printr-un experiment independent adecvat. 2. DATE Datele se prezintă într-un tabel, indicându
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
al doilea experiment, folosind celule în fază staționară. Dacă primul experiment este pozitiv, acesta trebuie confirmat printr-un experiment independent adecvat. 2. DATE Datele se prezintă într-un tabel, indicându-se numărul coloniilor, numărul mutantelor, frecvența coloniilor supraviețuitoare și a mutațiilor. Toate rezultatele trebuie confirmate printr-un experiment independent. Toate rezultatele observate se evaluează cu ajutorul unei metode statistice adecvate. 3. RAPORT 3.1. Protocol de test Protocolul trebuie să conțină, dacă este posibil, informațiile următoare: ― sușele folosite, ― condițiile experimentale: celule în
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
D7 (heteroalelică la trp5), BZ34 (heteroalelică la arg4) și JD1 (heteroalelică la his4 și trp5). Încrucișarea mitotică ce produce sectoare homozigote roșu și roz poate fi analizată în D5 sau în D7 (care, de asemenea, măsoară conversia genică mitotică și mutația reversă la ilv1-92), ambele sușe fiind heteroalelice pentru alelele complementare ale ade2. 1.5. Criterii de calitate Nici unul. 1.6. Descrierea metodei de testare Pregătire Soluțiile substanțelor testate și ale compușilor martor sau de referință trebuie preparate chiar înaintea testării
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
și roz produse prin încrucișare mitotică se păstrează în frigider la aproximativ 4˚C, timp de una-două zile înaintea numărării, pentru a permite dezvoltarea de colonii pigmentate corespunzătoare. Frecvențele recombinării mitotice spontane Se utilizează subculturi celulare cu o frecvență a mutațiilor spontane în limitele normale admise. Numărul replicatelor Se utilizează cel puțin trei cutii pe concentrație pentru analiza prototrofilor produși prin conversia mitotică genică și pentru analiza viabilității. În cazul analizei homozigotismului recesiv produs prin încrucișarea mitotică, numărul cutiilor trebuie să
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
cazul, pe parcursul tratamentului, se adaugă o cantitate corespunzătoare de sistem de activare metabolică. La sfârșitul tratamentului celulele sunt centrifugate, spălate și însămânțate pe un mediu de cultură potrivit. După incubație, cutiile se inventariază în vederea stabilirii ratei de supraviețuire și a mutațiilor genice produse. Dacă primul experiment este negativ, trebuie realizat un al doilea experiment în care se utilizează celule în fază staționară. Dacă primul experiment este pozitiv, acesta trebuie confirmat printr-un experiment independent corespunzător. 2. DATE Datele se prezintă sub
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
recombinantelor, supraviețuirea și frecvența recombinării, relația doză/răspuns (dacă este cazul), evaluarea statistică a datelor, ― discutarea rezultatelor, ― interpretarea rezultatelor. 3.2. Evaluare și interpretare Vezi introducerea generală: partea B. 4. REFERINȚE Vezi introducerea generală: partea B. TEST IN VITRO DE MUTAȚIE GENICĂ PE CELULE DE MAMIFERE 1. METODĂ 1.1. Introducere Vezi introducerea generală: partea B. 1.2. Definiție Vezi introducerea generală: partea B. 1.3. Substanțe de referință Nu sunt specificate. 1.4. Principiul metodei de testare Pentru determinarea mutațiilor
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
MUTAȚIE GENICĂ PE CELULE DE MAMIFERE 1. METODĂ 1.1. Introducere Vezi introducerea generală: partea B. 1.2. Definiție Vezi introducerea generală: partea B. 1.3. Substanțe de referință Nu sunt specificate. 1.4. Principiul metodei de testare Pentru determinarea mutațiilor cauzate de substanțele chimice se pot folosi sisteme de culturi celulare de mamifere. Printre cele mai utilizate linii celulare se numără celulele limfomatoase L5178Y de șoarece și liniile celulare CHO și V-79 de hamster chinezesc. În aceste linii celulare
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
pot folosi sisteme de culturi celulare de mamifere. Printre cele mai utilizate linii celulare se numără celulele limfomatoase L5178Y de șoarece și liniile celulare CHO și V-79 de hamster chinezesc. În aceste linii celulare, sistemele cele mai utilizate măsoară mutațiile la nivelul locusurilor timidin kinazei (TK), hipoxantin guanin fosforibozil transferazei (HPRT)19 și Na+/K+ ATP-azei; sistemele mutaționale TK și HPRT decelează mutațiile de perechi de baze, mutațiile cadrului de citire și deleții mici. Sistemul Na+/K+ ATP-azei detectează numai
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
celulare CHO și V-79 de hamster chinezesc. În aceste linii celulare, sistemele cele mai utilizate măsoară mutațiile la nivelul locusurilor timidin kinazei (TK), hipoxantin guanin fosforibozil transferazei (HPRT)19 și Na+/K+ ATP-azei; sistemele mutaționale TK și HPRT decelează mutațiile de perechi de baze, mutațiile cadrului de citire și deleții mici. Sistemul Na+/K+ ATP-azei detectează numai mutații de perechi de baze. Celulele deficiente în timidin kinază (TK), datorită mutațiilor directe TK+ → TKˉ sunt rezistente la bromodeoxiuridină (BrdU), fluorodeoxiuridină (FdU
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
de hamster chinezesc. În aceste linii celulare, sistemele cele mai utilizate măsoară mutațiile la nivelul locusurilor timidin kinazei (TK), hipoxantin guanin fosforibozil transferazei (HPRT)19 și Na+/K+ ATP-azei; sistemele mutaționale TK și HPRT decelează mutațiile de perechi de baze, mutațiile cadrului de citire și deleții mici. Sistemul Na+/K+ ATP-azei detectează numai mutații de perechi de baze. Celulele deficiente în timidin kinază (TK), datorită mutațiilor directe TK+ → TKˉ sunt rezistente la bromodeoxiuridină (BrdU), fluorodeoxiuridină (FdU) sau trifluorotimidină (TFT), deoarece acești
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
la nivelul locusurilor timidin kinazei (TK), hipoxantin guanin fosforibozil transferazei (HPRT)19 și Na+/K+ ATP-azei; sistemele mutaționale TK și HPRT decelează mutațiile de perechi de baze, mutațiile cadrului de citire și deleții mici. Sistemul Na+/K+ ATP-azei detectează numai mutații de perechi de baze. Celulele deficiente în timidin kinază (TK), datorită mutațiilor directe TK+ → TKˉ sunt rezistente la bromodeoxiuridină (BrdU), fluorodeoxiuridină (FdU) sau trifluorotimidină (TFT), deoarece acești antimetaboliți nu sunt încorporați în nucleotidele celulare de către sistemul enzimatic "de salvare" al
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
și Na+/K+ ATP-azei; sistemele mutaționale TK și HPRT decelează mutațiile de perechi de baze, mutațiile cadrului de citire și deleții mici. Sistemul Na+/K+ ATP-azei detectează numai mutații de perechi de baze. Celulele deficiente în timidin kinază (TK), datorită mutațiilor directe TK+ → TKˉ sunt rezistente la bromodeoxiuridină (BrdU), fluorodeoxiuridină (FdU) sau trifluorotimidină (TFT), deoarece acești antimetaboliți nu sunt încorporați în nucleotidele celulare de către sistemul enzimatic "de salvare" al timidin kinazei; nucleotidele necesare pentru metabolismul celular se obțin exclusiv prin sinteza
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
Pregătire Celule Pentru această tehnică sunt disponibile mai multe linii celulare, printre care subclonele L5178Y, celulele CHO sau celulele V-79, care au o sensibilitate demonstrată la agenții chimici mutageni, o eficiență de clonare ridicată și o frecvență redusă a mutațiilor spontane. Celulele pot fi analizate periodic pentru verificarea stabilității cariotipului și se examinează în vederea decelării contaminării cu micoplasmă. Pentru mutațiile genice cauzate de substanțele chimice se pot utiliza și alte tipuri de celule, cu condiția ca validitatea utilizării în acest
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
79, care au o sensibilitate demonstrată la agenții chimici mutageni, o eficiență de clonare ridicată și o frecvență redusă a mutațiilor spontane. Celulele pot fi analizate periodic pentru verificarea stabilității cariotipului și se examinează în vederea decelării contaminării cu micoplasmă. Pentru mutațiile genice cauzate de substanțele chimice se pot utiliza și alte tipuri de celule, cu condiția ca validitatea utilizării în acest scop să fie pe deplin argumentată cu documentație. Mediu Se utilizează medii de cultură și condiții de incubare corespunzătoare (de
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
limita superioară a solubilității, prin metode corespunzătoare. Pentru substanțele netoxice cu o solubilitate ridicată în apă, limita maximă a concentrației se stabilește de la caz la caz. Mod de operare Alegerea numărului de celule utilizate pe cultură se face funcție de frecvența mutațiilor spontane; regula generală constă în utilizarea unui număr de celule viabile care să fie de 10 ori inversul frecvenței mutațiilor spontane. Celulele trebuie expuse o perioadă corespunzătoare, în cele mai multe cazuri fiind suficiente două până la cinci ore. Celulele fără o activitate
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
se stabilește de la caz la caz. Mod de operare Alegerea numărului de celule utilizate pe cultură se face funcție de frecvența mutațiilor spontane; regula generală constă în utilizarea unui număr de celule viabile care să fie de 10 ori inversul frecvenței mutațiilor spontane. Celulele trebuie expuse o perioadă corespunzătoare, în cele mai multe cazuri fiind suficiente două până la cinci ore. Celulele fără o activitate metabolică intrinsecă suficientă trebuie expuse la substanța de testare atât în prezența, cât și în absența unui sistem adecvat de
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
de mutante și a viabilității. Toate rezultatele se verifică într-un experiment independent. 2. DATE Datele se sistematizează în tabele. Se indică numărul de celule pe fiecare cutie pentru substanța de testare și martori, atât în termeni de inducere a mutațiilor, cât și de supraviețuire. Se prezintă de asemenea numărul mediu de colonii per cutie și deviația standard. Frecvența mutațiilor trebuie exprimată ca număr de celule mutante raportat la numărul de celule supraviețuitoare. Eficiența de clonare și cea de supraviețuire se
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
tabele. Se indică numărul de celule pe fiecare cutie pentru substanța de testare și martori, atât în termeni de inducere a mutațiilor, cât și de supraviețuire. Se prezintă de asemenea numărul mediu de colonii per cutie și deviația standard. Frecvența mutațiilor trebuie exprimată ca număr de celule mutante raportat la numărul de celule supraviețuitoare. Eficiența de clonare și cea de supraviețuire se exprimă ca procent din nivelul martor. Datele se evaluează prin metode statistice adecvate. 3. RAPORT 3.1. Protocol de
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
METODĂ 1.1. Introducere Vezi introducerea generală: partea B. 1.2. Definiție Vezi introducerea generală: partea B. 1.3. Substanțe de referință Nici una. 1.4. Principiul metodei de testare Testul SLRL pe Drosophila melanogaster este un test care depistează incidența mutațiilor, atât a mutațiilor punctiforme, cât și a delețiilor mici, în liniile germinative ale insectelor. Acest test este un test de mutații directe, prin care pot decela mutațiile în aproximativ 800 locusuri de pe cromozomul X, ceea ce reprezintă aproximativ 80% din totalul
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
Introducere Vezi introducerea generală: partea B. 1.2. Definiție Vezi introducerea generală: partea B. 1.3. Substanțe de referință Nici una. 1.4. Principiul metodei de testare Testul SLRL pe Drosophila melanogaster este un test care depistează incidența mutațiilor, atât a mutațiilor punctiforme, cât și a delețiilor mici, în liniile germinative ale insectelor. Acest test este un test de mutații directe, prin care pot decela mutațiile în aproximativ 800 locusuri de pe cromozomul X, ceea ce reprezintă aproximativ 80% din totalul locusurilor acestuia. Cromozomul
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
referință Nici una. 1.4. Principiul metodei de testare Testul SLRL pe Drosophila melanogaster este un test care depistează incidența mutațiilor, atât a mutațiilor punctiforme, cât și a delețiilor mici, în liniile germinative ale insectelor. Acest test este un test de mutații directe, prin care pot decela mutațiile în aproximativ 800 locusuri de pe cromozomul X, ceea ce reprezintă aproximativ 80% din totalul locusurilor acestuia. Cromozomul X reprezintă aproximativ o cincime din întreg genomul haploid. Mutațiile cromozomului X la Drosophila melanogaster se exprimă fenotipic
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
de testare Testul SLRL pe Drosophila melanogaster este un test care depistează incidența mutațiilor, atât a mutațiilor punctiforme, cât și a delețiilor mici, în liniile germinative ale insectelor. Acest test este un test de mutații directe, prin care pot decela mutațiile în aproximativ 800 locusuri de pe cromozomul X, ceea ce reprezintă aproximativ 80% din totalul locusurilor acestuia. Cromozomul X reprezintă aproximativ o cincime din întreg genomul haploid. Mutațiile cromozomului X la Drosophila melanogaster se exprimă fenotipic la masculi purtători ai genei mutante
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
ale insectelor. Acest test este un test de mutații directe, prin care pot decela mutațiile în aproximativ 800 locusuri de pe cromozomul X, ceea ce reprezintă aproximativ 80% din totalul locusurilor acestuia. Cromozomul X reprezintă aproximativ o cincime din întreg genomul haploid. Mutațiile cromozomului X la Drosophila melanogaster se exprimă fenotipic la masculi purtători ai genei mutante. Dacă mutația este letală în condiții de hemizigotism, prezența sa se deduce din absența unei generații de descendenți de sex masculin, din cele două care sunt
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]