2,747 matches
-
amfoliții cu soluția "stock" de gel (vezi 4.1.1). 9,0 ml soluție "stock" 24 mg ß-alanină 500 μl amfolit pH 3,5 - 9,517 250 μl amfolit pH 5-717 250 μl amfolit pH 6-817 Se amestecă soluția de gel și se degazeifică timp de două sau trei minute într-o baie ultrasonică sau sub vid. Observație: Soluția de gel se prepară imediat înainte de a o turna (vezi 6.2). 4.1.3. Soluții catalizator 4.1.3.1. N
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
amfolit pH 3,5 - 9,517 250 μl amfolit pH 5-717 250 μl amfolit pH 6-817 Se amestecă soluția de gel și se degazeifică timp de două sau trei minute într-o baie ultrasonică sau sub vid. Observație: Soluția de gel se prepară imediat înainte de a o turna (vezi 6.2). 4.1.3. Soluții catalizator 4.1.3.1. N, N, N' N' - tetrametiletilendiamină (Temed). 4.1.3.2. 40 % m/v persulfat de amoniu (PER): Se dizolvă 800 mg
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
11.2) imediat înainte de colorare. Obs.: Se recomandă prepararea soluției de colorare în ziua folosirii acesteia. 5. Aparatură 5.1. Plăci de sticlă (265 × 125 × 4 mm); rolă de cauciuc (lățime 15 cm); masă reglabilă 5.2. Foaie susținătoare de gel (265 × 125 mm) 5.3. Foaie de acoperire (280 x 125 mm). Se lipește o bucată de bandă adezivă (280 × 6 × 0,25 mm) pe fiecare latură lungă (vezi Figura 1). 5.4. Cuvă de electrofocalizare cu placă de răcire
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
2 mg ditiotreitol. Observație: Pentru a obține o simetrie mai mare a benzilor cazeinice focalizate se recomandă liofilizarea soluției după adăugarea acidului ε-aminocaproic și dizolvarea reziduurilor în 0,5 ml soluție tampon pentru dizolvarea proteinelor (4.6). 6.2. Prepararea gelurilor poliacrilamide care conțin uree Cu ajutorul câtorva picături de apă se întinde foaia susținătoare de gel (5.2) pe o placă de sticlă (5.1), îndepărtându-se surplusul de apă cu un șervețel. Se întinde în mod similar foaia de acoperire
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
se recomandă liofilizarea soluției după adăugarea acidului ε-aminocaproic și dizolvarea reziduurilor în 0,5 ml soluție tampon pentru dizolvarea proteinelor (4.6). 6.2. Prepararea gelurilor poliacrilamide care conțin uree Cu ajutorul câtorva picături de apă se întinde foaia susținătoare de gel (5.2) pe o placă de sticlă (5.1), îndepărtându-se surplusul de apă cu un șervețel. Se întinde în mod similar foaia de acoperire (5.3) cu spațiatoare (0,25 mm) pe o altă placă de sticlă. Se așează
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
Se întinde în mod similar foaia de acoperire (5.3) cu spațiatoare (0,25 mm) pe o altă placă de sticlă. Se așează placa orizontal pe masa reglabilă. Se adaugă 10 μl Temed (4.1.3.1) la soluția de gel degazeificată pregătită (4.1.2), se amestecă și se adaugă 10 μl soluție PER (4.1.3.2), se amestecă bine și se toarnă imediat amestecul într-un strat egal pe centrul foii de acoperire. Se pune o margine a
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
1.2), se amestecă și se adaugă 10 μl soluție PER (4.1.3.2), se amestecă bine și se toarnă imediat amestecul într-un strat egal pe centrul foii de acoperire. Se pune o margine a plăcii susținătoare de gel (cu fața foii îndreptată în jos) pe placa de acoperire și se coboară încet, astfel încât între foi să se formeze un strat subțire de gel care să se întindă uniform și fără bule ( Figura 3). Se coboară cu grijă până la
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
strat egal pe centrul foii de acoperire. Se pune o margine a plăcii susținătoare de gel (cu fața foii îndreptată în jos) pe placa de acoperire și se coboară încet, astfel încât între foi să se formeze un strat subțire de gel care să se întindă uniform și fără bule ( Figura 3). Se coboară cu grijă până la capăt placa susținătoare de gel, folosind o spatulă subțire, apoi se așează încă trei plăci de sticlă deasupra, pentru a acționa ca greutate. După încheierea
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
în jos) pe placa de acoperire și se coboară încet, astfel încât între foi să se formeze un strat subțire de gel care să se întindă uniform și fără bule ( Figura 3). Se coboară cu grijă până la capăt placa susținătoare de gel, folosind o spatulă subțire, apoi se așează încă trei plăci de sticlă deasupra, pentru a acționa ca greutate. După încheierea polimerizării (aproximativ 60 minute), se transferă gelul polimerizat împreună cu foaia de acoperire pe foaia susținătoare de gel, înclinând plăcile de
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
fără bule ( Figura 3). Se coboară cu grijă până la capăt placa susținătoare de gel, folosind o spatulă subțire, apoi se așează încă trei plăci de sticlă deasupra, pentru a acționa ca greutate. După încheierea polimerizării (aproximativ 60 minute), se transferă gelul polimerizat împreună cu foaia de acoperire pe foaia susținătoare de gel, înclinând plăcile de sticlă. Se curăță cu grijă spatele foii susținătoare de gel pentru a elimina reziduurile de gel și de uree. Se sudează marginile "sandvișului" de gel astfel încât să
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
placa susținătoare de gel, folosind o spatulă subțire, apoi se așează încă trei plăci de sticlă deasupra, pentru a acționa ca greutate. După încheierea polimerizării (aproximativ 60 minute), se transferă gelul polimerizat împreună cu foaia de acoperire pe foaia susținătoare de gel, înclinând plăcile de sticlă. Se curăță cu grijă spatele foii susținătoare de gel pentru a elimina reziduurile de gel și de uree. Se sudează marginile "sandvișului" de gel astfel încât să se obțină un tub și se păstrează în refrigerator (timp
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
plăci de sticlă deasupra, pentru a acționa ca greutate. După încheierea polimerizării (aproximativ 60 minute), se transferă gelul polimerizat împreună cu foaia de acoperire pe foaia susținătoare de gel, înclinând plăcile de sticlă. Se curăță cu grijă spatele foii susținătoare de gel pentru a elimina reziduurile de gel și de uree. Se sudează marginile "sandvișului" de gel astfel încât să se obțină un tub și se păstrează în refrigerator (timp de maximum șase săptămâni). Observație: Foaia de acoperire și spațiatoarele pot fi refolosite
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
acționa ca greutate. După încheierea polimerizării (aproximativ 60 minute), se transferă gelul polimerizat împreună cu foaia de acoperire pe foaia susținătoare de gel, înclinând plăcile de sticlă. Se curăță cu grijă spatele foii susținătoare de gel pentru a elimina reziduurile de gel și de uree. Se sudează marginile "sandvișului" de gel astfel încât să se obțină un tub și se păstrează în refrigerator (timp de maximum șase săptămâni). Observație: Foaia de acoperire și spațiatoarele pot fi refolosite. Gelul de poliacrilamidă poate fi tăiat
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
se transferă gelul polimerizat împreună cu foaia de acoperire pe foaia susținătoare de gel, înclinând plăcile de sticlă. Se curăță cu grijă spatele foii susținătoare de gel pentru a elimina reziduurile de gel și de uree. Se sudează marginile "sandvișului" de gel astfel încât să se obțină un tub și se păstrează în refrigerator (timp de maximum șase săptămâni). Observație: Foaia de acoperire și spațiatoarele pot fi refolosite. Gelul de poliacrilamidă poate fi tăiat la dimensiuni mai mici, acțiune care este recomandată în
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
pentru a elimina reziduurile de gel și de uree. Se sudează marginile "sandvișului" de gel astfel încât să se obțină un tub și se păstrează în refrigerator (timp de maximum șase săptămâni). Observație: Foaia de acoperire și spațiatoarele pot fi refolosite. Gelul de poliacrilamidă poate fi tăiat la dimensiuni mai mici, acțiune care este recomandată în cazul în care există puține probe sau dacă se folosește un aparat automat de electroforeză (două geluri format 4,5 x 5 cm). 6.3. Focalizarea
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
Observație: Foaia de acoperire și spațiatoarele pot fi refolosite. Gelul de poliacrilamidă poate fi tăiat la dimensiuni mai mici, acțiune care este recomandată în cazul în care există puține probe sau dacă se folosește un aparat automat de electroforeză (două geluri format 4,5 x 5 cm). 6.3. Focalizarea izoelectrică Se reglează termostatul de răcire la 12 °C. Se șterge cu kerosen spatele foii susținătoare de gel, apoi se picură câteva picături de kerosen (4.2) pe centrul blocului de
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
există puține probe sau dacă se folosește un aparat automat de electroforeză (două geluri format 4,5 x 5 cm). 6.3. Focalizarea izoelectrică Se reglează termostatul de răcire la 12 °C. Se șterge cu kerosen spatele foii susținătoare de gel, apoi se picură câteva picături de kerosen (4.2) pe centrul blocului de răcire. Se rulează apoi pe el "sandvișul" de gel, cu partea susținătoare de gel îndreptată în jos, având grijă să se evite formarea bulelor. Se șterge excesul
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
Focalizarea izoelectrică Se reglează termostatul de răcire la 12 °C. Se șterge cu kerosen spatele foii susținătoare de gel, apoi se picură câteva picături de kerosen (4.2) pe centrul blocului de răcire. Se rulează apoi pe el "sandvișul" de gel, cu partea susținătoare de gel îndreptată în jos, având grijă să se evite formarea bulelor. Se șterge excesul de kerosen și se îndepărtează foaia de acoperire. Se îmbibă benzile de electrozi în soluțiile electrolitice (4.3, 4.4), se taie
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
de răcire la 12 °C. Se șterge cu kerosen spatele foii susținătoare de gel, apoi se picură câteva picături de kerosen (4.2) pe centrul blocului de răcire. Se rulează apoi pe el "sandvișul" de gel, cu partea susținătoare de gel îndreptată în jos, având grijă să se evite formarea bulelor. Se șterge excesul de kerosen și se îndepărtează foaia de acoperire. Se îmbibă benzile de electrozi în soluțiile electrolitice (4.3, 4.4), se taie după lungimea gelului și se
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
susținătoare de gel îndreptată în jos, având grijă să se evite formarea bulelor. Se șterge excesul de kerosen și se îndepărtează foaia de acoperire. Se îmbibă benzile de electrozi în soluțiile electrolitice (4.3, 4.4), se taie după lungimea gelului și se plasează în poziția prevăzută (distanța dintre electrozi de 9,5 cm). Condiții pentru focalizarea izoelectrică: 6.3.1. Dimensiunile gelului 265 x 125 x 0,25 mm Pasul Timp (min) Tensiune (V) Intensitate (mA) Putere (W) Volți oră
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
de acoperire. Se îmbibă benzile de electrozi în soluțiile electrolitice (4.3, 4.4), se taie după lungimea gelului și se plasează în poziția prevăzută (distanța dintre electrozi de 9,5 cm). Condiții pentru focalizarea izoelectrică: 6.3.1. Dimensiunile gelului 265 x 125 x 0,25 mm Pasul Timp (min) Tensiune (V) Intensitate (mA) Putere (W) Volți oră (Vh) 1. Pre-focalizare 30 maximumum 2 500 maximum 15 constant 4 c. 300 2. Focalizarea probei 1 60 maximumum 2 500 maximum
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
000 30 maximum 2 500 maximum 7 maximum 25 c. 3 000 1 Aplicarea probei: După pre-focalizare (etapa 1), se picură 18 μl din proba și din soluțiile standard pe aplicatorii probei (10 x 5 mm), se plasează aplicatorii pe gel la distanță de 1 mm unul de celălalt și la 5 mm longitudinal față de anod și se apasă ușor. Procedura de focalizare se finalizează în condițiile specificate mai sus, îndepărtând cu grijă aplicatorii probei după 60 minute de focalizare a
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
și la 5 mm longitudinal față de anod și se apasă ușor. Procedura de focalizare se finalizează în condițiile specificate mai sus, îndepărtând cu grijă aplicatorii probei după 60 minute de focalizare a probei. Observație: Dacă se modifică grosimea sau lățimea gelurilor, atunci intensitatea și puterea curentului trebuie ajustate în consecință (de exemplu, dacă se folosește un gel de 265 × 125 × 0,5 mm se dublează valorile pentru intensitatea și puterea curentului electric). 6.3.2. Exemplu de program de tensiune pentru
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
în condițiile specificate mai sus, îndepărtând cu grijă aplicatorii probei după 60 minute de focalizare a probei. Observație: Dacă se modifică grosimea sau lățimea gelurilor, atunci intensitatea și puterea curentului trebuie ajustate în consecință (de exemplu, dacă se folosește un gel de 265 × 125 × 0,5 mm se dublează valorile pentru intensitatea și puterea curentului electric). 6.3.2. Exemplu de program de tensiune pentru un aparat automat de electroforeză (2 geluri de 5,0 x 4,5 cm), cu electrozi
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
ajustate în consecință (de exemplu, dacă se folosește un gel de 265 × 125 × 0,5 mm se dublează valorile pentru intensitatea și puterea curentului electric). 6.3.2. Exemplu de program de tensiune pentru un aparat automat de electroforeză (2 geluri de 5,0 x 4,5 cm), cu electrozi fără benzi și aplicați direct pe gel Pasul Tensiune Intensitate Putere Temp. Volți oră 1. Pre-focalizare 1 000 V 10,0 mA 3,5 W 8 °C 85 Vh 2. Focalizarea
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]