41,410 matches
-
colonii supraviețuitoare și frecvența recombinărilor mitotice trebuie folosite medii de cultură adecvate. Folosirea martorilor negativi și pozitivi Martorii pozitivi, cei netratați și cei tratați cu solvent, trebuie preparați simultan. Pentru fiecare mecanism de recombinare specific se folosesc substanțe adecvate ca martor pozitiv . Concentrații de expunere Trebuie realizate cel puțin cinci concentrații ale substanței de testare, cu intervale corespunzătoare între acestea. Printre factorii care trebuie luați în considerare se numără citotoxicitatea și solubilitatea. Concentrația minimă trebuie să nu afecteze viabilitatea celulară. În
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
experimentale: celule în faza staționară sau în faza de creștere, compoziția mediilor de cultură, temperatura de incubație și durata acesteia, sistemul de activare metabolică, ― condițiile de tratament: concentrațiile de expunere, procedura și durata tratamentului, temperatura la care se realizează tratamentul, martorii pozitivi și negativi, ― numărul coloniilor, numărul recombinantelor, supraviețuirea și frecvența recombinării, relația doză/răspuns (dacă este cazul), evaluarea statistică a datelor, ― discutarea rezultatelor, ― interpretarea rezultatelor. 3.2. Evaluare și interpretare Vezi introducerea generală: partea B. 4. REFERINȚE Vezi introducerea generală
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
și în absența unui sistem exogen adecvat de activare metabolică la mamifere. Dacă se folosesc celule cu activitate metabolică intrinsecă, trebuie să se cunoască intensitatea și natura acestei activități, astfel încât să corespundă clasei de substanțe chimice testate. Condiții experimentale Folosirea martorilor pozitivi și negativi Fiecare experiment include martori pozitivi, folosind atât un compus cu activitate directă, cât și un compus ce necesită activare metabolică. De asemenea, trebuie folosit și un martor negativ (excipient). Exemple de substanțe ce pot fi folosite ca
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
de activare metabolică la mamifere. Dacă se folosesc celule cu activitate metabolică intrinsecă, trebuie să se cunoască intensitatea și natura acestei activități, astfel încât să corespundă clasei de substanțe chimice testate. Condiții experimentale Folosirea martorilor pozitivi și negativi Fiecare experiment include martori pozitivi, folosind atât un compus cu activitate directă, cât și un compus ce necesită activare metabolică. De asemenea, trebuie folosit și un martor negativ (excipient). Exemple de substanțe ce pot fi folosite ca martor pozitiv: - compuși cu activitate directă: - etilmetansulfonatul
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
să corespundă clasei de substanțe chimice testate. Condiții experimentale Folosirea martorilor pozitivi și negativi Fiecare experiment include martori pozitivi, folosind atât un compus cu activitate directă, cât și un compus ce necesită activare metabolică. De asemenea, trebuie folosit și un martor negativ (excipient). Exemple de substanțe ce pot fi folosite ca martor pozitiv: - compuși cu activitate directă: - etilmetansulfonatul, - hicantona. - compuși cu activitate indirectă: - 2-acetilaminofluoren, - 7,12-dimetilbenzantracenul, - N-nitrozodimetilamina. Dacă este necesar, poate fi inclus un martor pozitiv suplimentar, care să aparțină aceleiași
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
pozitivi și negativi Fiecare experiment include martori pozitivi, folosind atât un compus cu activitate directă, cât și un compus ce necesită activare metabolică. De asemenea, trebuie folosit și un martor negativ (excipient). Exemple de substanțe ce pot fi folosite ca martor pozitiv: - compuși cu activitate directă: - etilmetansulfonatul, - hicantona. - compuși cu activitate indirectă: - 2-acetilaminofluoren, - 7,12-dimetilbenzantracenul, - N-nitrozodimetilamina. Dacă este necesar, poate fi inclus un martor pozitiv suplimentar, care să aparțină aceleiași clase de substanțe ca substanța de testare. Concentrațiile de expunere Trebuie
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
De asemenea, trebuie folosit și un martor negativ (excipient). Exemple de substanțe ce pot fi folosite ca martor pozitiv: - compuși cu activitate directă: - etilmetansulfonatul, - hicantona. - compuși cu activitate indirectă: - 2-acetilaminofluoren, - 7,12-dimetilbenzantracenul, - N-nitrozodimetilamina. Dacă este necesar, poate fi inclus un martor pozitiv suplimentar, care să aparțină aceleiași clase de substanțe ca substanța de testare. Concentrațiile de expunere Trebuie folosite mai multe concentrații ale substanței de testare. Acestea trebuie alese astfel încât să producă efect toxic în raport cu concentrația, concentrația maximă determinând un nivel
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
de expunere Trebuie folosite mai multe concentrații ale substanței de testare. Acestea trebuie alese astfel încât să producă efect toxic în raport cu concentrația, concentrația maximă determinând un nivel scăzut de supraviețuire, iar supraviețuirea la concentrația minimă fiind aproximativ aceeași cu cea de la martorul negativ. Substanțele relativ insolubile în apă trebuie testate până la limita superioară a solubilității, prin metode corespunzătoare. Pentru substanțele netoxice cu o solubilitate ridicată în apă, limita maximă a concentrației se stabilește de la caz la caz. Mod de operare Alegerea numărului
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
și fără agenți selectivi, pentru determinarea numărului de mutante și a viabilității. Toate rezultatele se verifică într-un experiment independent. 2. DATE Datele se sistematizează în tabele. Se indică numărul de celule pe fiecare cutie pentru substanța de testare și martori, atât în termeni de inducere a mutațiilor, cât și de supraviețuire. Se prezintă de asemenea numărul mediu de colonii per cutie și deviația standard. Frecvența mutațiilor trebuie exprimată ca număr de celule mutante raportat la numărul de celule supraviețuitoare. Eficiența
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
prezintă de asemenea numărul mediu de colonii per cutie și deviația standard. Frecvența mutațiilor trebuie exprimată ca număr de celule mutante raportat la numărul de celule supraviețuitoare. Eficiența de clonare și cea de supraviețuire se exprimă ca procent din nivelul martor. Datele se evaluează prin metode statistice adecvate. 3. RAPORT 3.1. Protocol de test Protocolul trebuie să conțină, dacă este posibil, informațiile următoare: - linia celulară folosită, numărul de culturi celulare, metodele de menținere a culturilor celulare, - condițiile experimentale: compoziția mediilor
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
incubare, timpul de incubare, durata perioadei de expresie fenotipică (dacă este cazul, raportul poate include numărul de celule cultivate și subculturile și schemele de alimentare), durata tratamentului, densitatea celulară pe parcursul tratamentului, tipul de sistem de activare metabolică la mamifere folosit, martorii pozitivi și negativi, tipul de agent selectiv folosit, - argumentarea alegerii dozelor, - metoda folosită pentru exprimarea numărului de celule viabile și mutante, - evaluarea statistică, - discutarea rezultatelor, - interpretarea rezultatelor. 3.2. Evaluare și interpretare Vezi introducerea generală: partea B. 4. REFERINȚE Vezi
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
tratează cu agentul testat cu și fără un sistem exogen de activare metabolică. USD poate fi măsurată prin tehnici in vivo. 1.5. Criterii de calitate Nici unul. 1.6. Descrierea metodei de testare Pregătire: Substanța chimică de testare și substanța martor sau substanța de referință trebuie preparate în mediul de creștere sau dizolvate sau suspensionate într-un excipient adecvat și ulterior diluate în mediul de cultură folosit în această tehnică. Concentrația finală a excipientului nu trebuie să afecteze viabilitatea celulară. În
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
unui sistem adecvat de activare metabolică. Condiții experimentale Numărul culturilor Pentru fiecare metodă experimentală sunt necesare cel puțin două culturi celulare pentru autoradiografiere și șase culturi (sau mai puține, dacă există argumente științifice) pentru determinările prin LSC a UDS. Folosirea martorilor negativi și pozitivi În fiecare experiment trebuie incluși martori pozitivi și negativi (netratați și/sau excipient) suplimentari, cu și fără activare metabolică. În testele care folosesc hepatocite de șobolan, exemple de martori pozitivi sunt 7,12-dimetilbenzantracenul (7,12-DMBA) sau 2-acetilaminofluorenul
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
culturilor Pentru fiecare metodă experimentală sunt necesare cel puțin două culturi celulare pentru autoradiografiere și șase culturi (sau mai puține, dacă există argumente științifice) pentru determinările prin LSC a UDS. Folosirea martorilor negativi și pozitivi În fiecare experiment trebuie incluși martori pozitivi și negativi (netratați și/sau excipient) suplimentari, cu și fără activare metabolică. În testele care folosesc hepatocite de șobolan, exemple de martori pozitivi sunt 7,12-dimetilbenzantracenul (7,12-DMBA) sau 2-acetilaminofluorenul (2-AAF). În cazul liniilor celulare bine caracterizate, 4-nitroquinolin-N oxid
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
științifice) pentru determinările prin LSC a UDS. Folosirea martorilor negativi și pozitivi În fiecare experiment trebuie incluși martori pozitivi și negativi (netratați și/sau excipient) suplimentari, cu și fără activare metabolică. În testele care folosesc hepatocite de șobolan, exemple de martori pozitivi sunt 7,12-dimetilbenzantracenul (7,12-DMBA) sau 2-acetilaminofluorenul (2-AAF). În cazul liniilor celulare bine caracterizate, 4-nitroquinolin-N oxid (4-NQO) poate fi utilizat atât pentru autoradiografie, cât și pentru testele LSC efectuate fără activare metabolică. N-dimetilnitrozamina este un exemplu de compus care
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
7,12-DMBA) sau 2-acetilaminofluorenul (2-AAF). În cazul liniilor celulare bine caracterizate, 4-nitroquinolin-N oxid (4-NQO) poate fi utilizat atât pentru autoradiografie, cât și pentru testele LSC efectuate fără activare metabolică. N-dimetilnitrozamina este un exemplu de compus care poate fi folosit ca martor pozitiv când se folosesc sisteme de activare metabolică. Concentrații de expunere Trebuie folosite mai multe concentrații ale substanței de testare, alese într-un interval adecvat pentru definirea răspunsului. Concentrația maximă trebuie să producă unele efecte citotoxice. Compușii relativ insolubili în
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
citoplasmă se determină prin numărarea a trei arii de mărimea nucleului, din citoplasma fiecărei celule numărate. Determinările LSC Pentru determinarea prin LSC a USD, se utilizează un număr adecvat de culturi pentru fiecare concentrație a substanței de testare și pentur martori. Toate rezultatele trebuie confirmate într-un experiment independent. 2. DATE Datele sunt prezentate sub formă de tabele. 2.1. Determinările autoradiografice Cantitatea de 3H-TdR încorporată în citoplasmă și numărul de granulații găsite în nucleii celulari trebuie să fie înregistrate separat
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
tratamentului, numărul de culturi celulare, - metodele folosite pentru menținerea culturilor, inclusiv compoziția mediului, temperatura și concentrația CO2, - substanța de testare, excipientul folosit, concentrațiile și motivația alegerii acestor concentrații folosite în experiment, - informații despre sistemul de activare metabolică, - schema de tratament, - martorii pozitivi și negativi, - tehnica de autoradiografie folosită, - metodele folosite pentru a bloca intrarea celulelor în faza S, - metodele folosite pentru extragerea ADN și determinarea conținutului total în ADN prin tehnica LSC, - dacă este posibil, relația doză-efect, - evaluarea statistică, - discutarea rezultatelor
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
suspensionate într-un excipient adecvat înainte de începerea tratamentului celulelor. Concentrația finală de excipient în mediul de cultură nu trebuie să afecteze în mod semnificativ viabilitatea celulară sau rata de creștere, iar efectele asupra frecvenței SCE trebuie monitorizate printr-un solvent martor. Celulele se tratează cu substanța de testare atât în prezența cât și în absența unui sistem exogen adecvat de activare metabolică la mamifere. Alternativ, dacă se folosesc celule cu activitate metabolică intrinsecă, trebuie să se cunoască intensitatea și natura acestei
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
folosesc celule cu activitate metabolică intrinsecă, trebuie să se cunoască intensitatea și natura acestei activități, astfel încât să fie corespunzătoare clasei de substanțe chimice testate. Condiții experimentale Numărul de culturi Pentru fiecare punct experimental se folosesec cel puțin două culturi. Folosirea martorilor pozitivi și negativi În toate experimentele se folosesc martori pozitivi, folosind atât un compus cu activare directă, cât și un compus ce necesită activare metabolică; de asemenea, se folosește și un martor pentru excipient. Exemple de substanțe ce pot fi
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
cunoască intensitatea și natura acestei activități, astfel încât să fie corespunzătoare clasei de substanțe chimice testate. Condiții experimentale Numărul de culturi Pentru fiecare punct experimental se folosesec cel puțin două culturi. Folosirea martorilor pozitivi și negativi În toate experimentele se folosesc martori pozitivi, folosind atât un compus cu activare directă, cât și un compus ce necesită activare metabolică; de asemenea, se folosește și un martor pentru excipient. Exemple de substanțe ce pot fi folosite ca martori pozitivi: - compuși cu activare directă: - etilmetansulfonatul
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
experimental se folosesec cel puțin două culturi. Folosirea martorilor pozitivi și negativi În toate experimentele se folosesc martori pozitivi, folosind atât un compus cu activare directă, cât și un compus ce necesită activare metabolică; de asemenea, se folosește și un martor pentru excipient. Exemple de substanțe ce pot fi folosite ca martori pozitivi: - compuși cu activare directă: - etilmetansulfonatul, - compuși cu activare indirectă: - ciclofosfamida. După caz, se poate introduce un martor pozitiv suplimentar din aceeași clasă chimică cu substanța de testare. Concentrații
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
negativi În toate experimentele se folosesc martori pozitivi, folosind atât un compus cu activare directă, cât și un compus ce necesită activare metabolică; de asemenea, se folosește și un martor pentru excipient. Exemple de substanțe ce pot fi folosite ca martori pozitivi: - compuși cu activare directă: - etilmetansulfonatul, - compuși cu activare indirectă: - ciclofosfamida. După caz, se poate introduce un martor pozitiv suplimentar din aceeași clasă chimică cu substanța de testare. Concentrații de expunere Se vor folosi cel puțin trei concentrații ale substanței
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
compus ce necesită activare metabolică; de asemenea, se folosește și un martor pentru excipient. Exemple de substanțe ce pot fi folosite ca martori pozitivi: - compuși cu activare directă: - etilmetansulfonatul, - compuși cu activare indirectă: - ciclofosfamida. După caz, se poate introduce un martor pozitiv suplimentar din aceeași clasă chimică cu substanța de testare. Concentrații de expunere Se vor folosi cel puțin trei concentrații ale substanței de testare, spațiate în mod adecvat. Concentrația maximă trebuie să producă un efect toxic semnificativ, permițând totuși producerea
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]
-
cromozomilor Preparatele cromozomiale se obțin prin tehnici citogenetice standard. Colorarea lamelor pentru evidențierea SCE se poate face prin mai multe tehnici (de exemplu, prin fluorescență plus metoda Giemsa). Analiza Numărul de celule analizate depinde de frecvența spontană a SCE la martori. De obicei, cel puțin 25 de metafaze bine exprimate pe cultură sunt analizate în termeni de SCE. Lamele trebuie etichetate înainte de analiză. La limfocitele umane se analizează numai celulele care conțin 46 de centromeri. Pe liniile celulare bine caracterizate se
by Guvernul Romaniei () [Corola-other/Law/86466_a_87253]