5,095 matches
-
de obținut și de aceea extrem de costisitor, ceea ce face ca laboratoarele de histopatologie clinică să îl folosească rar. De aceea, cele mai multe laboratoare utilizează seruri non-imune, de la animale din aceeași specie cu animalul imunizat, sursă a anticorpului primar, sau antiseruri cu specificități irelevante. Dacă anticorpul primar este monoclonal, probabil cel mai bun control negativ este alt anticorp irelevant. Obiectivul principal în alegerea unui bun control este acela de a imita anticorpul primar sub toate aspectele, mai puțin specificitatea antigenică. Anticorpul și substituentul
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
primar, sau antiseruri cu specificități irelevante. Dacă anticorpul primar este monoclonal, probabil cel mai bun control negativ este alt anticorp irelevant. Obiectivul principal în alegerea unui bun control este acela de a imita anticorpul primar sub toate aspectele, mai puțin specificitatea antigenică. Anticorpul și substituentul trebuie să conțină concentrații proteice aproximativ identice, să aibă vechime (±1 an) și, astfel, să conțină cantități similare de agregate proteice, care ar putea contribui la colorare nespecifică (DAKO Corporation). B. Controale tisulare Pot fi de
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
celor două tipuri de ER poate fi explicată prin diferențele dintre regiunile aminok terminale. Domeniile C sau de legare a ADN sunt omoloage, cu secvențe P-box identice și, astfel, Erα și Erβ leagă diferite elemente ale răspunsului estrogenic, cu specificitate și afinitate similare [127]. AF 2 are rol în transcripția ligand-dependentă a receptorilor nucleari [88,134,202,279]. Liganzi diferiți induc conformații diferite ale receptorilor [49,340,351], acestea afectând eficacitatea sau potențialul ligandului. O altă diferență apare la nivelul
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
colagenaza 3) și determină degradarea colagenului fibrilar interstițial. Gelatinazele (colagenaze de tip IV) acționează în special asupra colagenului denaturat și includ MMP-2 (gelatinaza A9 și MMP-9 (gelatinaza B). Stromelizinele 1,2 și 3 (MMP-3, MMP-10, MMP 11) au o mare specificitate de substrat și degradează laminina și fibronectina ]24,126,381]. Activarea MMP poate fi controlată la multiple nivele ce includ activarea transcripției, conversia precursorilor în enzime active și inhibiția prin intermediul interacțiunii cu inhibitori specifici ai MMP (TIMP-1,2,3) [437
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
de procese. Un marker perfect trebuie să fie de o mare acuratețe, să nu fie costisitor, să poată fi utilizat pentru categorii largi de populație. Nu există un marker cu utilizare curentă. Problema o constituie lipsa de sensibilitate și de specificitate. Rezultatele fals pozitive pot fi mai mult acceptate decât cele fals negative. Utilzarea simultană a mai multor markeri serologici ar putea crește eficiența acestor testări [220]. Antigenul carcinoembrionar (CEA) este o glicoproteină de 180 kD, în care 60% reprezintă componenta
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
cromosomi minusculi dubli) [128,160]. Modificările specifice interesează oncogene și gene supresoare. În cancerul mamar apar mutația și deleția p53, amplificarea genei erbB2 [8,45,239] pe CRS17q și deleții pe 1q, 3p, 6q, 17q, 18q [452]. Există o anumită specificitate pentru stadiul cancerogenezei, o secvențialitate în producerea alterărilor genetice precum și o cooperare a acțiunii diferitelor gene. Cooperarea genică, demonstrată experimental, este evidentă în toate neoplaziile [345]. Stadiul final al cancerogenezei este reprezentat de progresia celulei neoplazice în celula malignă. Acest
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
se afle în stare buna de lucru. Aceste controale implică: A. substituiri de reactivi; B. controale tisulare. A. Substituiri de reactivi Dintre toți componenții utilizați în tehnicile de imunhistochimie, anticorpul primar este, fără nici o îndoiala, critic. Pentru a-i verifica specificitatea, el este înlocuit: fie cu un antiser absorbit prin afinitate; fie cu un alt anticorp, irelevant; fie cu un ser de la un animal neimunizat, din aceeași specie cu animalul de la care a fost obținut anticorpul primar. Absorbția prin afinitate a
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
de obținut și de aceea extrem de costisitor, ceea ce face ca laboratoarele de histopatologie clinică să îl folosească rar. De aceea, cele mai multe laboratoare utilizează seruri non-imune, de la animale din aceeași specie cu animalul imunizat, sursă a anticorpului primar, sau antiseruri cu specificități irelevante. Dacă anticorpul primar este monoclonal, probabil cel mai bun control negativ este alt anticorp irelevant. Obiectivul principal în alegerea unui bun control este acela de a imita anticorpul primar sub toate aspectele, mai puțin specificitatea antigenică. Anticorpul și substituentul
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
primar, sau antiseruri cu specificități irelevante. Dacă anticorpul primar este monoclonal, probabil cel mai bun control negativ este alt anticorp irelevant. Obiectivul principal în alegerea unui bun control este acela de a imita anticorpul primar sub toate aspectele, mai puțin specificitatea antigenică. Anticorpul și substituentul trebuie să conțină concentrații proteice aproximativ identice, să aibă vechime (±1 an) și, astfel, să conțină cantități similare de agregate proteice, care ar putea contribui la colorare nespecifică (DAKO Corporation). B. Controale tisulare Pot fi de
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
Retrieval Antigen Solution - DAKO), la 98 0 C, timp de 20 de minute. Prima etapă a protocolului de lucru a fost incubarea secțiunilor, la 4 0 C, cu nu anticorp monoclonal murin, anti-p53 uman (clona DO-7 - DAKO), anticorp ce are specificitate pentru un epitop comun, ceea ce face posibilă interacțiunea sa cu forma normală cât și cu cele mutante. În a doua etapă s-a realizat incubarea secțiunilor cu anticorpul secundar, biotinilat, la temperatura camerei, 10 minute. A treia etapă a constat
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
Nobiscan 3A. Luând în considerație determinările lotului „tumori benigne” și determinările inițiale (nivelul bazal) ale lotului „ tumori maligne ”, pentru un interval de referință cu o valoare cut-off de până la 20 U/ml, pentru CA 15-3, am obținut următoarele rezultate: Sensibilitate 60 % Specificitate 92,8 % Valoare predictivă pozitivă 90% Valoare predictivă negativă 70% Corelarea cu stadiul tumoral 53% Doar două paciente (15% din totalul persoanelor investigate) au urmat tratament radio-chimioterapic. Rezultatele studiului sunt remarcabile datorită unei selecții foarte riguroase a subiecților pe baza
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
studiului sunt remarcabile datorită unei selecții foarte riguroase a subiecților pe baza examenului anatomo patologic. Pentru un interval de referință cu o valoare cut off de până la 35 U ml, indicată de literatura de specialitate și de producătorul kit-ului, specificitatea markerului CA 15-3 ar fi fost de 100%, valoare ideală, deci inacceptabilă. Determinările în dinamică ale CA 15 -3 (a doua zi postoperator) au relevat o scădere a concentrației markerului cercetat într-o proporție de 80 % (11 cazuri), pentru 13
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
înseamnă, în mod automat, absența bolii. Din aceste motive, se justifică continuarea studiilor realizate până în prezent, atât pentru identificarea de noi markeri, mai specifici, dar și de dezvoltare a datelor referitoare la markerii deja cunoscuți, urmărindu-se gradul lor de specificitate și selectivitate, semnificația lor ca factori de diagnostic sau prognostic, ca și a lămuririi mecanismului lor biologic de acțiune. Întrucât cancerul glandei mamare este caracterizat prin controlul hormonal al creșterii celulare, curent se realizează măsurători de ER, pentru selecția pacienților
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
suficient pentru legarea la ADN și activarea transcripției. DBD conține aminoacizii care servesc la recunoașterea specifică a elementului de răspuns hormonal (sau steroidic), localizat în ADN, genomic adiacent genelor țintă. S-a sugerat că primul "deget" conține informația primară pentru specificitatea secvențială de legare, în timp ce cel de-al doilea "deget" stabilizează legarea receptorului la elementul de răspuns al ADN. Adiacent "degetului de zinc" C-terminal se află o secvență scurtă care pare a fi, cel puțin în parte, responsabilă de localizarea
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
specifici, diferiți pentru fiecare moleculă de hormon steroidic, chiar dacă diferența structurală dintre hormoni este minimă. În plus, același hormon poate produce efecte diferite în diverse celule, astfel că ei conduc la răspunsuri foarte variate, depinzând de tipul celular. Există o specificitate a răspunsului hormonal, în diverse celule, care se poate subdivide în: specificitate de hormon, de receptor, de genă și de celulă. Deși efectele unei clase de hormoni pot fi influențate de stadiul metabolic al celulei sau de ciclul celular, ele
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
hormoni este minimă. În plus, același hormon poate produce efecte diferite în diverse celule, astfel că ei conduc la răspunsuri foarte variate, depinzând de tipul celular. Există o specificitate a răspunsului hormonal, în diverse celule, care se poate subdivide în: specificitate de hormon, de receptor, de genă și de celulă. Deși efectele unei clase de hormoni pot fi influențate de stadiul metabolic al celulei sau de ciclul celular, ele sunt caracteristice acestei clase de hormoni și sunt, de aceea specifice fiecărui
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
liber, dar nu și a complexului hormon-receptor [270]. Din punct de vedere principial, un studiu DCC constă în incubarea probelor de citosol cu hormoni marcați radioactiv 3H-E, respectiv 3H-P. În paralel, sunt incubate, în același mod, probe de control pentru specificitate, care conțin, în plus, competitori hormonali (dietilstilbestrol, respectiv progesteronă sintetică), în exces. Incubarea este terminată prin adăugarea soluției DCC. Cărbunele pe care este absorbit hormonul este sedimentat prin centrifugare. Radioactivitatea radiometric cu un spectrometru de radiații ( counter). Pentru o precizie
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
antigenică directă. EIA reprezintă o alternativă eficientă față de DCC, atât în privința performanțelor, cât și a costului. Se observă astfel, o concordanță a rezultatelor, determinate prin EIA și respectiv DCC, de până la 100%, în cazul ER având deci o sensibilitate și specificitate practic egală cu DCC; concordanța se reduce însă la numai 84%, în cazul PR (sensibilitatea EIA față de DCC = 90,9%, iar specificitatea este de aprox. 80%). Cu toate valorile mai reduse, în cazul determinărilor de PR, deoarece EIA este o
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
rezultatelor, determinate prin EIA și respectiv DCC, de până la 100%, în cazul ER având deci o sensibilitate și specificitate practic egală cu DCC; concordanța se reduce însă la numai 84%, în cazul PR (sensibilitatea EIA față de DCC = 90,9%, iar specificitatea este de aprox. 80%). Cu toate valorile mai reduse, în cazul determinărilor de PR, deoarece EIA este o metoda mai rapidă, ea tinde să capete o utilizare tot mai frecventă, mai ales în studii curente. Analiza SCATCHARD (metoda dozelor multiple
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
C) în soluție Retrieval (DAKO Retrieval Target Solution), timp de 20 de minute, pentru demascarea situsurilor antigenice. Incubarea secțiunilor cu anticorpii primari s-a efectuat la 4 0 C. Au fost folosiți 2 anticorpi monoclonali: un anticorp monoclonal murin, cu specificitate pentru receptorul estrogenic uman (clona 1 D5 - DAKO) și un anticorp monoclonal murin cu specificitate pentru receptorul progesteronic uman (clona PgR 636 - DAKO). A doua etapă de incubare, cu anticorp secundar, s a efectuat la temperatura camerei, timp de 10
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
situsurilor antigenice. Incubarea secțiunilor cu anticorpii primari s-a efectuat la 4 0 C. Au fost folosiți 2 anticorpi monoclonali: un anticorp monoclonal murin, cu specificitate pentru receptorul estrogenic uman (clona 1 D5 - DAKO) și un anticorp monoclonal murin cu specificitate pentru receptorul progesteronic uman (clona PgR 636 - DAKO). A doua etapă de incubare, cu anticorp secundar, s a efectuat la temperatura camerei, timp de 10 minute, utilizând un anticorp secundar biotinilat, cu specificitate pentru anticorpii murini primari. Etapa a treia
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
DAKO) și un anticorp monoclonal murin cu specificitate pentru receptorul progesteronic uman (clona PgR 636 - DAKO). A doua etapă de incubare, cu anticorp secundar, s a efectuat la temperatura camerei, timp de 10 minute, utilizând un anticorp secundar biotinilat, cu specificitate pentru anticorpii murini primari. Etapa a treia a constat în tratarea secțiunilor cu streptavidină-peroxidază (kit-ul de vizualizare LSAB - DAKO). Activitatea enzimatică a fost relevată cu substratul cromogen al peroxidazei, DAB, activat extemporaneu cu H 2 O 2 , pentru 10-12
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
pentru demascarea situsurilor antigenice. Incubarea secțiunilor cu anticorpul primari s-a efectuat la 4 0 C. A doua etapă de incubare, cu anticorp secundar, s-a efectuat la temperatura camerei, timp de 10 minute, utilizând un anticorp secundar biotinilat, cu specificitate pentru anticorpul primar. Etapa a treia a constat în tratarea secțiunilor cu streptavidină-peroxidază (kit-ul de vizualizare LSAB - DAKO). Activitatea enzimatică a fost relevată cu substratul cromogen al peroxidazei, DAB, activat extemporaneu cu H 2 O 2 , pentru 10-12 minute
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
bolnavele tinere. Evaluarea receptorilor pentru hormoni steroidici pe bază de analize electroforetice și radiochimice Protocolul de lucru constă în combinarea electroforezei pe gel de poliacrilamidă (PAGE) cu o metodă radiometrică. Procedeul utilizat permite fracționarea și caracterizarea cantitativă a afinității și specificității legării hormonilor steroidici la proteinele receptoare specifice. Separarea complexului proteină receptoare-hormon, prin electroforeză, se bazează pe proprietatea complexului format de a migra, într-un gel de poliacrilamidă și o tărie ionică joasă, mai lent decât fragmentele separate. De asemenea, metode
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
serie de avantaje: este simplă, eco-nomică, evită radioactivitatea și este destul de fiabilă. În cazuistica studiată, metoda a fost aplicată la 20 de paciente. Ganglionul santinelă a fost studiat histologic prin examen extemporaneu. Acuratețea examenului extemporaneu este apreciată astfel: fiabilitate 92%, specificitate 99%, sensibilitate 76%, rezultate fals negative 6,8%, rezultate fals pozitive 0,5%. Pentru a verifica fiabilitatea metodei, după detectarea și prelevarea ganglionului santinelă s-a completat intervenția cu disecția axilară a nivelelor I și II, indiferent de starea ganglionului
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]