11,250 matches
-
el este înlocuit: fie cu un antiser absorbit prin afinitate; fie cu un alt anticorp, irelevant; fie cu un ser de la un animal neimunizat, din aceeași specie cu animalul de la care a fost obținut anticorpul primar. Absorbția prin afinitate a anticorpului primar cu un antigen înalt purificat este o manieră ideală de a obține un control negativ, valid pentru diferențierea colorării specifice de cea nespecifică. Problema este că antigenul purificat este greu de obținut și de aceea extrem de costisitor, ceea ce face
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
că antigenul purificat este greu de obținut și de aceea extrem de costisitor, ceea ce face ca laboratoarele de histopatologie clinică să îl folosească rar. De aceea, cele mai multe laboratoare utilizează seruri non-imune, de la animale din aceeași specie cu animalul imunizat, sursă a anticorpului primar, sau antiseruri cu specificități irelevante. Dacă anticorpul primar este monoclonal, probabil cel mai bun control negativ este alt anticorp irelevant. Obiectivul principal în alegerea unui bun control este acela de a imita anticorpul primar sub toate aspectele, mai puțin
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
de aceea extrem de costisitor, ceea ce face ca laboratoarele de histopatologie clinică să îl folosească rar. De aceea, cele mai multe laboratoare utilizează seruri non-imune, de la animale din aceeași specie cu animalul imunizat, sursă a anticorpului primar, sau antiseruri cu specificități irelevante. Dacă anticorpul primar este monoclonal, probabil cel mai bun control negativ este alt anticorp irelevant. Obiectivul principal în alegerea unui bun control este acela de a imita anticorpul primar sub toate aspectele, mai puțin specificitatea antigenică. Anticorpul și substituentul trebuie să conțină
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
îl folosească rar. De aceea, cele mai multe laboratoare utilizează seruri non-imune, de la animale din aceeași specie cu animalul imunizat, sursă a anticorpului primar, sau antiseruri cu specificități irelevante. Dacă anticorpul primar este monoclonal, probabil cel mai bun control negativ este alt anticorp irelevant. Obiectivul principal în alegerea unui bun control este acela de a imita anticorpul primar sub toate aspectele, mai puțin specificitatea antigenică. Anticorpul și substituentul trebuie să conțină concentrații proteice aproximativ identice, să aibă vechime (±1 an) și, astfel, să
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
specie cu animalul imunizat, sursă a anticorpului primar, sau antiseruri cu specificități irelevante. Dacă anticorpul primar este monoclonal, probabil cel mai bun control negativ este alt anticorp irelevant. Obiectivul principal în alegerea unui bun control este acela de a imita anticorpul primar sub toate aspectele, mai puțin specificitatea antigenică. Anticorpul și substituentul trebuie să conțină concentrații proteice aproximativ identice, să aibă vechime (±1 an) și, astfel, să conțină cantități similare de agregate proteice, care ar putea contribui la colorare nespecifică (DAKO
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
antiseruri cu specificități irelevante. Dacă anticorpul primar este monoclonal, probabil cel mai bun control negativ este alt anticorp irelevant. Obiectivul principal în alegerea unui bun control este acela de a imita anticorpul primar sub toate aspectele, mai puțin specificitatea antigenică. Anticorpul și substituentul trebuie să conțină concentrații proteice aproximativ identice, să aibă vechime (±1 an) și, astfel, să conțină cantități similare de agregate proteice, care ar putea contribui la colorare nespecifică (DAKO Corporation). B. Controale tisulare Pot fi de tipuri diferite
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
și colorare. Practic, proba și controlul există pe aceeași secțiune, fără a mai fi necesare controale pozitive separate. Pentru a identifica și pentru a localiza mai precis în celulă pro-teina luată în studiu, examinarea celulor se face la microscopul electronic. Anticorpul specific poate fi cuplat cu particule mici de aur care apar electron dense, marcând poziția proteinei la care se leagă anticorpul. Principalul dezavantaj al metodelor prezentate mai sus constă în faptul că specimenele examinate nu sunt celule vii, acest lucru
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
și pentru a localiza mai precis în celulă pro-teina luată în studiu, examinarea celulor se face la microscopul electronic. Anticorpul specific poate fi cuplat cu particule mici de aur care apar electron dense, marcând poziția proteinei la care se leagă anticorpul. Principalul dezavantaj al metodelor prezentate mai sus constă în faptul că specimenele examinate nu sunt celule vii, acest lucru împiedicând examinarea în dinamică a proteinei luate în studiu. Capitolul 6 FACTORII DE CREȘTERE Creșterea tumorală, reflectată în mărimea tumorii și
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
Secțiunile au fost inițial deparafinate, tratate pentru demascarea situsurilor antigenice cu soluție de demascare (DAKO Target Retrieval Solution), la 98 0 C, timp de 20 de minute. Prima etapă a tehnicii de incubarea probelor, la 4 0 C, cu un anticorp primar de iepure, anti-neu uman. Etapa a doua a constat în incubarea cu anticorpul secundar, antiiepure, biotinilat, 10 minute, la temperatura camerei. În a treia etapă secțiunile au fost incubate cu complexul enzimatic streptavidină-peroxidază (LSAB - DAKO), 10 minute, la temperatura
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
DAKO Target Retrieval Solution), la 98 0 C, timp de 20 de minute. Prima etapă a tehnicii de incubarea probelor, la 4 0 C, cu un anticorp primar de iepure, anti-neu uman. Etapa a doua a constat în incubarea cu anticorpul secundar, antiiepure, biotinilat, 10 minute, la temperatura camerei. În a treia etapă secțiunile au fost incubate cu complexul enzimatic streptavidină-peroxidază (LSAB - DAKO), 10 minute, la temperatura camerei. Evidențierea activității enzimatice s-a realizat cu DAB/H 2 O 2 , 10-15
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
utilizată și pentru detectarea mutațiilor punctiforme ale unei gene, direct sau indirect, prin studiul polimorfismului conformației catenelor unice de ADN (single strand conformational polymorphism - SSCP). Transferul proteinelor (Western blotting) a fost introdus inițial pentru a identifica antigenele proteice care leagă anticorpi specifici. Un amestec complex de proteine este separat prin electroforeză, după care proteinele sunt transferate și legate la o membrană care poate fi analizată cu ajutorul unui anticorp marcat radioactiv. Studiile histologice clasice nu pot furniza detalii asupra localizării tisulare și
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
Western blotting) a fost introdus inițial pentru a identifica antigenele proteice care leagă anticorpi specifici. Un amestec complex de proteine este separat prin electroforeză, după care proteinele sunt transferate și legate la o membrană care poate fi analizată cu ajutorul unui anticorp marcat radioactiv. Studiile histologice clasice nu pot furniza detalii asupra localizării tisulare și celulare a proteinelor. Întrucât localizarea celulară a proteinelor poate furniza detalii despre rolurile lor fiziologice, iar modificarea poziției unor proteine poate duce la elucidarea unor mecanisme patologice
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
bolii și cu răspunsul la tratament. Este descoperit în 30-50 % din toate cazurile, în formele avansate de boală, fiind evidențiat în 70% din cazuri. Susceptibilitatea unei paciente de a avea boală metastatică crește odată cu creșterea valorilor serice ale CEA. Utilizând anticorpi monoclonali, s-a constatat că asocierea CEA-ER poate fi un predictor important pentru o anumită categorie de paciente cu prognostic favorabil (CEA negativ, ER pozitivi) [307]. CA 15-3 Este un biomarker de natură mucinică, recunoscut de 2 tipuri de anticorpi
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
anticorpi monoclonali, s-a constatat că asocierea CEA-ER poate fi un predictor important pentru o anumită categorie de paciente cu prognostic favorabil (CEA negativ, ER pozitivi) [307]. CA 15-3 Este un biomarker de natură mucinică, recunoscut de 2 tipuri de anticorpi monoclonali. Valorile crescute ale CA 15-3 sunt frecvent asociate metastazelor osoase sau diseminărilor multiple. Există diferențe individuale remarcabile la diferite paciente. Utilitatea sa în diagnosticarea tumorii primare este redusă; poate fi utilizat pentru monitorizarea tratamentului și a evoluției clinice. Creșteri
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
moartea celulelor provenind din diferite tipuri de țesuturi. Exemplele pot include moartea celulelor cu durată de viață scurtă (neutrofilele), involuția celulelor private de factorii de creștere necesari, moartea celulelor ce servesc drept țintă pentru mecanismele citotoxice mediate celular, dependente de anticorp, tumori în regresie [131]. Adesea semnalul declanșator provine din mediul ce înconjoară celula, așa cum se întâmplă în cazul expunerii sau privării de un hormon sau factor de creștere. Căile de acțiune a apoptozei diferă de la un tip celular la altul
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
funcției normale a proteinei [53,82,100,122,123,124,192]. În celulele care exprimă această proteină, ea pare a fi esențială pentru creșterea și diviziunea celulară, de vreme ce pierderea acută de p53 prin introducerea de mARN antisens sau microinjecții cu anticorpi împiedică răspunsul celular față de factorii de creștere serici, manifestat prin sinteză de ADN. Concluzia ar fi că p53 joacă un rol esențial în creștera și diviziunea celulară normală, dar că în cursul dezvoltării unei tumori, celulele se pot adapta și
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
cărei produs este o proteină membranară, membru al unei superfamilii din care TNF-R și NGF-R reprezintă molecule de referință [286,441]. La nivelul unei celule care exprimă Fas, fie în mod natural, fie în urma unei transfecții, legarea încrucișată a unui anticorp anti-Fas induce apoptoza [286]. Aceasta a fost doar o prezentare sumară a unor gene ce participă la procesul de moarte celulară progrmată. Pentru ca aceste gene să fie desemnate „ucigașe” trebuie ca produșii lor să îndeplinească două condiții: să poată induce
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
până la secționarea cu un criomicrotom. Secțiunile sunt plasate pe lame de microscop care pot fi tratate cu polilizină sau alți agenți, pentru a favoriza atașarea. Secțiunile de țesut sunt apoi incubate (timp de 4 16h, la 4 o C) cu anticorpi specifici proteinelor care trebuie studiate (anticorpi primari). Etapa ulterioară constă în incubarea țesutului (după spălarea anticorpului primar nelegat) cu un alt anticorp, secundar, direcționat împotriva imunoglobulinelor speciei în care a fost produs anticorpul primar. Anticorpul secundar este conjugat cu o
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
sunt plasate pe lame de microscop care pot fi tratate cu polilizină sau alți agenți, pentru a favoriza atașarea. Secțiunile de țesut sunt apoi incubate (timp de 4 16h, la 4 o C) cu anticorpi specifici proteinelor care trebuie studiate (anticorpi primari). Etapa ulterioară constă în incubarea țesutului (după spălarea anticorpului primar nelegat) cu un alt anticorp, secundar, direcționat împotriva imunoglobulinelor speciei în care a fost produs anticorpul primar. Anticorpul secundar este conjugat cu o substanță fluorescentă, făcând posibilă vizualizarea proteinei
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
cu polilizină sau alți agenți, pentru a favoriza atașarea. Secțiunile de țesut sunt apoi incubate (timp de 4 16h, la 4 o C) cu anticorpi specifici proteinelor care trebuie studiate (anticorpi primari). Etapa ulterioară constă în incubarea țesutului (după spălarea anticorpului primar nelegat) cu un alt anticorp, secundar, direcționat împotriva imunoglobulinelor speciei în care a fost produs anticorpul primar. Anticorpul secundar este conjugat cu o substanță fluorescentă, făcând posibilă vizualizarea proteinei luate în studiu, cu ajutorul unui microscop. Două sau trei proteine
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
a favoriza atașarea. Secțiunile de țesut sunt apoi incubate (timp de 4 16h, la 4 o C) cu anticorpi specifici proteinelor care trebuie studiate (anticorpi primari). Etapa ulterioară constă în incubarea țesutului (după spălarea anticorpului primar nelegat) cu un alt anticorp, secundar, direcționat împotriva imunoglobulinelor speciei în care a fost produs anticorpul primar. Anticorpul secundar este conjugat cu o substanță fluorescentă, făcând posibilă vizualizarea proteinei luate în studiu, cu ajutorul unui microscop. Două sau trei proteine diferite pot fi vizualizate simultan dacă
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
4 16h, la 4 o C) cu anticorpi specifici proteinelor care trebuie studiate (anticorpi primari). Etapa ulterioară constă în incubarea țesutului (după spălarea anticorpului primar nelegat) cu un alt anticorp, secundar, direcționat împotriva imunoglobulinelor speciei în care a fost produs anticorpul primar. Anticorpul secundar este conjugat cu o substanță fluorescentă, făcând posibilă vizualizarea proteinei luate în studiu, cu ajutorul unui microscop. Două sau trei proteine diferite pot fi vizualizate simultan dacă se folosesc anticorpi primari produși în specii diferite și anticorpi secundari
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
la 4 o C) cu anticorpi specifici proteinelor care trebuie studiate (anticorpi primari). Etapa ulterioară constă în incubarea țesutului (după spălarea anticorpului primar nelegat) cu un alt anticorp, secundar, direcționat împotriva imunoglobulinelor speciei în care a fost produs anticorpul primar. Anticorpul secundar este conjugat cu o substanță fluorescentă, făcând posibilă vizualizarea proteinei luate în studiu, cu ajutorul unui microscop. Două sau trei proteine diferite pot fi vizualizate simultan dacă se folosesc anticorpi primari produși în specii diferite și anticorpi secundari, marcați cu
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
împotriva imunoglobulinelor speciei în care a fost produs anticorpul primar. Anticorpul secundar este conjugat cu o substanță fluorescentă, făcând posibilă vizualizarea proteinei luate în studiu, cu ajutorul unui microscop. Două sau trei proteine diferite pot fi vizualizate simultan dacă se folosesc anticorpi primari produși în specii diferite și anticorpi secundari, marcați cu substanțe cu spectre de excitație și emisie diferite. Se poate stabili astfel poziția relativă a proteinei luate în studiu față de alte proteine, a căror localizare în celulă este deja cunoscută
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
produs anticorpul primar. Anticorpul secundar este conjugat cu o substanță fluorescentă, făcând posibilă vizualizarea proteinei luate în studiu, cu ajutorul unui microscop. Două sau trei proteine diferite pot fi vizualizate simultan dacă se folosesc anticorpi primari produși în specii diferite și anticorpi secundari, marcați cu substanțe cu spectre de excitație și emisie diferite. Se poate stabili astfel poziția relativă a proteinei luate în studiu față de alte proteine, a căror localizare în celulă este deja cunoscută. Colocalizarea a două proteine poate semnifica existența
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]