14,361 matches
-
prezentate lungimile de undă la care cele cinci baze azotate din componența moleculelor de ADN și ARN prezintă maxime de absorbție. Într-o primă aproximație, spectrul de absorbție al ADN-ului este media spectrelor celor patru baze azotate. Spectrele de absorbție, în domeniul UV, pot fi folosite pentru determinarea rapidă a concentrației și purității acizilor nucleici și proteinelor dintr-o soluție, cunoscând următoarele aspecte: cuantificarea acizilor nucleici se poate face pe baza absorbției probelor care conțin ADN sau ARN, la lungimile
BIOFIZICA ȘI BIOENERGETICA SISTEMELOR VII by Claudia Gabriela Chilom () [Corola-publishinghouse/Science/1580_a_2899]
-
media spectrelor celor patru baze azotate. Spectrele de absorbție, în domeniul UV, pot fi folosite pentru determinarea rapidă a concentrației și purității acizilor nucleici și proteinelor dintr-o soluție, cunoscând următoarele aspecte: cuantificarea acizilor nucleici se poate face pe baza absorbției probelor care conțin ADN sau ARN, la lungimile de undă de 260 nm și, respectiv, 280 nm; anumite subunități ale acizilor nucleici (bazele purinice) prezintă maxime de absorbție la lungimi de undă situate sub 260 nm, altele (bazele pirimidinice) prezintă
BIOFIZICA ȘI BIOENERGETICA SISTEMELOR VII by Claudia Gabriela Chilom () [Corola-publishinghouse/Science/1580_a_2899]
-
soluție, cunoscând următoarele aspecte: cuantificarea acizilor nucleici se poate face pe baza absorbției probelor care conțin ADN sau ARN, la lungimile de undă de 260 nm și, respectiv, 280 nm; anumite subunități ale acizilor nucleici (bazele purinice) prezintă maxime de absorbție la lungimi de undă situate sub 260 nm, altele (bazele pirimidinice) prezintă maxime de absorbție la lungimi de undă mai mari de 260 nm, astfel încât, maximul de absorbție depinde de componența în baze a speciei de ADN. Totuși, se poate
BIOFIZICA ȘI BIOENERGETICA SISTEMELOR VII by Claudia Gabriela Chilom () [Corola-publishinghouse/Science/1580_a_2899]
-
conțin ADN sau ARN, la lungimile de undă de 260 nm și, respectiv, 280 nm; anumite subunități ale acizilor nucleici (bazele purinice) prezintă maxime de absorbție la lungimi de undă situate sub 260 nm, altele (bazele pirimidinice) prezintă maxime de absorbție la lungimi de undă mai mari de 260 nm, astfel încât, maximul de absorbție depinde de componența în baze a speciei de ADN. Totuși, se poate considera că maximul de absorbție a acizilor nucleici se situează la lungimea de undă de
BIOFIZICA ȘI BIOENERGETICA SISTEMELOR VII by Claudia Gabriela Chilom () [Corola-publishinghouse/Science/1580_a_2899]
-
280 nm; anumite subunități ale acizilor nucleici (bazele purinice) prezintă maxime de absorbție la lungimi de undă situate sub 260 nm, altele (bazele pirimidinice) prezintă maxime de absorbție la lungimi de undă mai mari de 260 nm, astfel încât, maximul de absorbție depinde de componența în baze a speciei de ADN. Totuși, se poate considera că maximul de absorbție a acizilor nucleici se situează la lungimea de undă de 260 nm; proteinele prezintă două maxime de absorbție în domeniul UV: * un maxim
BIOFIZICA ȘI BIOENERGETICA SISTEMELOR VII by Claudia Gabriela Chilom () [Corola-publishinghouse/Science/1580_a_2899]
-
situate sub 260 nm, altele (bazele pirimidinice) prezintă maxime de absorbție la lungimi de undă mai mari de 260 nm, astfel încât, maximul de absorbție depinde de componența în baze a speciei de ADN. Totuși, se poate considera că maximul de absorbție a acizilor nucleici se situează la lungimea de undă de 260 nm; proteinele prezintă două maxime de absorbție în domeniul UV: * un maxim, situat între 215 nm și 230 nm, datorat absorbției legăturilor peptidice; * al doilea maxim, situat în jurul lungimii
BIOFIZICA ȘI BIOENERGETICA SISTEMELOR VII by Claudia Gabriela Chilom () [Corola-publishinghouse/Science/1580_a_2899]
-
260 nm, astfel încât, maximul de absorbție depinde de componența în baze a speciei de ADN. Totuși, se poate considera că maximul de absorbție a acizilor nucleici se situează la lungimea de undă de 260 nm; proteinele prezintă două maxime de absorbție în domeniul UV: * un maxim, situat între 215 nm și 230 nm, datorat absorbției legăturilor peptidice; * al doilea maxim, situat în jurul lungimii de undă de 280 nm, datorat absorbției aminoacizilor aromatici (Trp, Tyr și Phe). Trebuie amintit că proteinele, peptidele
BIOFIZICA ȘI BIOENERGETICA SISTEMELOR VII by Claudia Gabriela Chilom () [Corola-publishinghouse/Science/1580_a_2899]
-
ADN. Totuși, se poate considera că maximul de absorbție a acizilor nucleici se situează la lungimea de undă de 260 nm; proteinele prezintă două maxime de absorbție în domeniul UV: * un maxim, situat între 215 nm și 230 nm, datorat absorbției legăturilor peptidice; * al doilea maxim, situat în jurul lungimii de undă de 280 nm, datorat absorbției aminoacizilor aromatici (Trp, Tyr și Phe). Trebuie amintit că proteinele, peptidele, reactivii folosiți la extracții, sărurile și nucleotidele libere pot contamina probele de ADN, conducând
BIOFIZICA ȘI BIOENERGETICA SISTEMELOR VII by Claudia Gabriela Chilom () [Corola-publishinghouse/Science/1580_a_2899]
-
lungimea de undă de 260 nm; proteinele prezintă două maxime de absorbție în domeniul UV: * un maxim, situat între 215 nm și 230 nm, datorat absorbției legăturilor peptidice; * al doilea maxim, situat în jurul lungimii de undă de 280 nm, datorat absorbției aminoacizilor aromatici (Trp, Tyr și Phe). Trebuie amintit că proteinele, peptidele, reactivii folosiți la extracții, sărurile și nucleotidele libere pot contamina probele de ADN, conducând la alterarea spectrelor de absorbție a acestuia. Deși proteinele prezintă o mică absorbție la 260
BIOFIZICA ȘI BIOENERGETICA SISTEMELOR VII by Claudia Gabriela Chilom () [Corola-publishinghouse/Science/1580_a_2899]
-
maxim, situat în jurul lungimii de undă de 280 nm, datorat absorbției aminoacizilor aromatici (Trp, Tyr și Phe). Trebuie amintit că proteinele, peptidele, reactivii folosiți la extracții, sărurile și nucleotidele libere pot contamina probele de ADN, conducând la alterarea spectrelor de absorbție a acestuia. Deși proteinele prezintă o mică absorbție la 260 nm, atât proteinele, cât și acizii nucleici absorb puternic la 280 nm. Astfel, dacă o probă conține acizi nucleici și proteine, va apărea o suprapunere spectrală la 280 nm, datorată
BIOFIZICA ȘI BIOENERGETICA SISTEMELOR VII by Claudia Gabriela Chilom () [Corola-publishinghouse/Science/1580_a_2899]
-
nm, datorat absorbției aminoacizilor aromatici (Trp, Tyr și Phe). Trebuie amintit că proteinele, peptidele, reactivii folosiți la extracții, sărurile și nucleotidele libere pot contamina probele de ADN, conducând la alterarea spectrelor de absorbție a acestuia. Deși proteinele prezintă o mică absorbție la 260 nm, atât proteinele, cât și acizii nucleici absorb puternic la 280 nm. Astfel, dacă o probă conține acizi nucleici și proteine, va apărea o suprapunere spectrală la 280 nm, datorată prezenței acizilor nucleici și proteinelor în soluție. Sunt
BIOFIZICA ȘI BIOENERGETICA SISTEMELOR VII by Claudia Gabriela Chilom () [Corola-publishinghouse/Science/1580_a_2899]
-
atât proteinele, cât și acizii nucleici absorb puternic la 280 nm. Astfel, dacă o probă conține acizi nucleici și proteine, va apărea o suprapunere spectrală la 280 nm, datorată prezenței acizilor nucleici și proteinelor în soluție. Sunt prezentate spectrele de absorbție a ADN-ului și a albuminei serice bovine (BSA). Sunt prezentate lungimile de undă relevante pentru măsurarea absorbției acizilor nucleici și proteinelor, din domeniul UV. Determinarea concentrației acizilor nucleici și a proteinelor dintr-o soluție Determinarea concentrației acizilor nucleici și
BIOFIZICA ȘI BIOENERGETICA SISTEMELOR VII by Claudia Gabriela Chilom () [Corola-publishinghouse/Science/1580_a_2899]
-
și proteine, va apărea o suprapunere spectrală la 280 nm, datorată prezenței acizilor nucleici și proteinelor în soluție. Sunt prezentate spectrele de absorbție a ADN-ului și a albuminei serice bovine (BSA). Sunt prezentate lungimile de undă relevante pentru măsurarea absorbției acizilor nucleici și proteinelor, din domeniul UV. Determinarea concentrației acizilor nucleici și a proteinelor dintr-o soluție Determinarea concentrației acizilor nucleici și a proteinelor se face pe baza legii Lambert - Beer, utilizând soluții diluate și cunoscând coeficientul molar de extincție
BIOFIZICA ȘI BIOENERGETICA SISTEMELOR VII by Claudia Gabriela Chilom () [Corola-publishinghouse/Science/1580_a_2899]
-
mL proteină. De exemplu, o soluție de 1 mg/mL de BSA prezintă o extincție, la 280 nm, de 0,7. Această regulă este, însă, empirică, neținând cont de numărul și tipul aminoacizilor aromatici. Estimarea purității acizilor nucleici Spectrofotometria de absorbție, în domeniul spectral UV, poate furniza informații despre puritatea soluțiilor de acizi nucleici. Astfel, se măsoară absorbția probelor la lungimile de undă de 260 nm și 280 nm, după care se calculează raportul A260/A280. pentru ARN pur, A260/A280
BIOFIZICA ȘI BIOENERGETICA SISTEMELOR VII by Claudia Gabriela Chilom () [Corola-publishinghouse/Science/1580_a_2899]
-
nm, de 0,7. Această regulă este, însă, empirică, neținând cont de numărul și tipul aminoacizilor aromatici. Estimarea purității acizilor nucleici Spectrofotometria de absorbție, în domeniul spectral UV, poate furniza informații despre puritatea soluțiilor de acizi nucleici. Astfel, se măsoară absorbția probelor la lungimile de undă de 260 nm și 280 nm, după care se calculează raportul A260/A280. pentru ARN pur, A260/A280 = 2,0 pentru ADN pur, A260/A280 = 1,8 pentru proteină pură, A260/A280 ~ 0,6. Agitația
BIOFIZICA ȘI BIOENERGETICA SISTEMELOR VII by Claudia Gabriela Chilom () [Corola-publishinghouse/Science/1580_a_2899]
-
lungimile de undă de 260 nm și 280 nm, după care se calculează raportul A260/A280. pentru ARN pur, A260/A280 = 2,0 pentru ADN pur, A260/A280 = 1,8 pentru proteină pură, A260/A280 ~ 0,6. Agitația termică sporește absorbția probei, conducând la determinări incorecte. Deoarece nici proteinele, nici acizii nucleici nu absorb la 320 nm, aici se va face o corectare a liniei de bază. Astfel, dacă o probă absoarbe la 320 nm, aceasta se datorează agitației termice și
BIOFIZICA ȘI BIOENERGETICA SISTEMELOR VII by Claudia Gabriela Chilom () [Corola-publishinghouse/Science/1580_a_2899]
-
ADN și ARN. De asemenea, un raport A260/A280 < 1,7 indică o contaminare a soluției de acizi nucleici cu proteine sau cu fenol. 1. Modul de lucru Pentru prepararea probelor, sunt puse la dispoziție diferite substanțe. Pentru măsurătorile de absorbție, în domeniul spectral UV, se vor folosi cuve de cuarț (care nu absorb în domeniul UV). Acestea trebuie manevrate cu foarte mare atenție! 1) Se vor seta parametrii spectrali, folosind spectrofotometrul de absorbție Perkin Elmer Lambda 2, pentru înregistrarea unui
BIOFIZICA ȘI BIOENERGETICA SISTEMELOR VII by Claudia Gabriela Chilom () [Corola-publishinghouse/Science/1580_a_2899]
-
la dispoziție diferite substanțe. Pentru măsurătorile de absorbție, în domeniul spectral UV, se vor folosi cuve de cuarț (care nu absorb în domeniul UV). Acestea trebuie manevrate cu foarte mare atenție! 1) Se vor seta parametrii spectrali, folosind spectrofotometrul de absorbție Perkin Elmer Lambda 2, pentru înregistrarea unui spectru de absorbție în domeniul spectral, 220 nm 330 nm; 2) Se vor măsuara A260 nm și A280 nm pentru fiecare probă (ADN, ARN, proteină, amestec de acizi nucleici și proteină). 2. Obținerea
BIOFIZICA ȘI BIOENERGETICA SISTEMELOR VII by Claudia Gabriela Chilom () [Corola-publishinghouse/Science/1580_a_2899]
-
spectral UV, se vor folosi cuve de cuarț (care nu absorb în domeniul UV). Acestea trebuie manevrate cu foarte mare atenție! 1) Se vor seta parametrii spectrali, folosind spectrofotometrul de absorbție Perkin Elmer Lambda 2, pentru înregistrarea unui spectru de absorbție în domeniul spectral, 220 nm 330 nm; 2) Se vor măsuara A260 nm și A280 nm pentru fiecare probă (ADN, ARN, proteină, amestec de acizi nucleici și proteină). 2. Obținerea și interpretarea rezultatelor 1) Se va calcula raportul A260/A280
BIOFIZICA ȘI BIOENERGETICA SISTEMELOR VII by Claudia Gabriela Chilom () [Corola-publishinghouse/Science/1580_a_2899]
-
astfel: a. A260 și A280, pentru fiecare probă; b. A260/A280, pentru fiecare probă; c. [ADN], [ARN], [proteină] din probe; 4) Se va amesteca o proteină cu una dintre probele de ADN sau ARN, pentru a vedea cum se modifică absorbția amestecului. 5) Se va completa un tabel. Întrebări și discuții: a) Care sunt concentrațiile de ADN, ARN și de proteină din probe, estimate pe baza absorbției la 260 nm? b) Comparați aceste valori cu cele așteptate pe baza modului de
BIOFIZICA ȘI BIOENERGETICA SISTEMELOR VII by Claudia Gabriela Chilom () [Corola-publishinghouse/Science/1580_a_2899]
-
cu una dintre probele de ADN sau ARN, pentru a vedea cum se modifică absorbția amestecului. 5) Se va completa un tabel. Întrebări și discuții: a) Care sunt concentrațiile de ADN, ARN și de proteină din probe, estimate pe baza absorbției la 260 nm? b) Comparați aceste valori cu cele așteptate pe baza modului de preparare a probelor. Sunt aceleași? Dacă nu, presupuneți că valoarea determinată spectrofotometric este cea corectă și calculați eroarea (în procente). c) Care sunt avantajele, dezavantajele și
BIOFIZICA ȘI BIOENERGETICA SISTEMELOR VII by Claudia Gabriela Chilom () [Corola-publishinghouse/Science/1580_a_2899]
-
metoda spectroscopiei de fluorescență Considerații teoretice Metodele de fluorescență sunt utilizate în cercetarea biochimică, biofizică, medicală și chimică, datorită sensibilității tehnicii de fluorescență și a scalei de timp a acestui fenomen. Emisia fluorescentă are loc în aproximativ 10-8 s, după absorbția luminii. Pe parcursul acestei perioade de timp, pot exista foarte multe procese, care pot afecta caracteristicile spectrale ale compusului fluorescent. Combinația dintre sensibilitate și scala de timp favorabilă permite metodelor de fluorescență să fie utilizate în studiul structurii proteinelor (împachetare a
BIOFIZICA ȘI BIOENERGETICA SISTEMELOR VII by Claudia Gabriela Chilom () [Corola-publishinghouse/Science/1580_a_2899]
-
diferite medii, denaturare și renaturare a proteinelor sub acțiunea unor factori), dar și al interacțiunilor acestora cu alte molecule de interes biologic. Fluorescența este un fenomen fizic, care are două faze distincte: a) excitarea moleculelor pe niveluri electronice superioare, în urma absorbției de radiație și b) emisia de radiație de pe primul nivel singlet excitat. Cromoforii fluorescenți (denumiți și fluorofori) absorb fotoni, rămân în stare excitată câteva nanosecunde, după care emit, de regulă, fotoni de energie mai mică. Dacă emisia fotonică apare între
BIOFIZICA ȘI BIOENERGETICA SISTEMELOR VII by Claudia Gabriela Chilom () [Corola-publishinghouse/Science/1580_a_2899]
-
ovalbumina). Studiul spectrofotofluorimetric al interacțiunii proteinelor cu liganzi specifici Considerații teoretice Diagrama Jablonski, prezentată în lucrarea Evidențierea procesului de denaturare termică a proteinelor, folosind metoda spectroscopiei de fluorescență, prezintă nivelurile energetice și schimbul de energie, radiativ și neradiativ, dintre acestea: absorbția unor fotoni, de pe starea electronică fundamentală, pe stări electronice excitate; emisia fluorescentă a unor fotoni, de pe starea electronică excitată singlet, S1, pe starea electronică fundamentală; emisia fosforescentă a unor fotoni, de pe o stare triplet, T, excitată, pe starea fundamentală; transferul
BIOFIZICA ȘI BIOENERGETICA SISTEMELOR VII by Claudia Gabriela Chilom () [Corola-publishinghouse/Science/1580_a_2899]
-
Există anumite procese, precum denaturarea proteinelor (care se produce sub acțiunea anumitor factori fizico chimici), care au ca efect, în general, creșterea emisiei tirozinei. Acest fenomen se produce datorită transferului de energie de la Trp la Tyr. Sunt prezentate caracteristicile de absorbție și de fluorescență ale celor trei fluorofori naturali ai proteinelor, în apă. Poziționarea maximului de emisie a proteinelor față de cel al Trp liber furnizează o serie de informații legate de structura împachetată a proteinei, ca urmare a influenței mediului în
BIOFIZICA ȘI BIOENERGETICA SISTEMELOR VII by Claudia Gabriela Chilom () [Corola-publishinghouse/Science/1580_a_2899]