942 matches
-
diluții (10θ, 10κ, 10â) în apă distilată (figura 1). 5.2.2. Din fiecare diluție a depozitului său din fiecare suspensie de C.m. spp. sepedonicus (aproximativ 10^6 celule/ml), se pipetează un volum standard măsurat, suficient pentru a acoperi godeul (aproximativ 25 мl), în godeurile unei lame cu spoturi multiple după cum se prezintă în figura 1. 5.2.3. Se lasă la uscat la o temperatură de aproximativ 37°C și se fixează cu soluție de etanol 95% sau prin
EUR-Lex () [Corola-website/Law/154541_a_155870]
-
apă distilată (figura 1). 5.2.2. Din fiecare diluție a depozitului său din fiecare suspensie de C.m. spp. sepedonicus (aproximativ 10^6 celule/ml), se pipetează un volum standard măsurat, suficient pentru a acoperi godeul (aproximativ 25 мl), în godeurile unei lame cu spoturi multiple după cum se prezintă în figura 1. 5.2.3. Se lasă la uscat la o temperatură de aproximativ 37°C și se fixează cu soluție de etanol 95% sau prin flambare. 5.2.4. Se
EUR-Lex () [Corola-website/Law/154541_a_155870]
-
lame cu spoturi multiple după cum se prezintă în figura 1. 5.2.3. Se lasă la uscat la o temperatură de aproximativ 37°C și se fixează cu soluție de etanol 95% sau prin flambare. 5.2.4. Se acoperă godeurile respective cu antiser pentru C.m. spp. sepedonicus la diluțiile recomandate, TFS de 0.01, pH 7.2, conform figurii 1. (Se utilizează TFS pentru controlul ITCF). Diluția de lucru a antiserului trebuie să fie egală cu aproximativ jumătate din titrul
EUR-Lex () [Corola-website/Law/154541_a_155870]
-
timp de 5 minute în trei reprize cu TFS 0,01 M și pH 7,2, schimbându-se de fiecare dată soluția de spălare. 5.2.7. Se elimină cu grijă excesul de umezeală. 5.2.8. Se acoperă fiecare godeu cu conjugat ITCF în aceeași diluție utilizată pentru determinarea titrului și se incubează într-o cameră umedă întunecoasă, la temperatura ambiantă, timp de 30 de minute. 5.2.9. Se clătește și se spală ca mai înainte. 5.2.10
EUR-Lex () [Corola-website/Law/154541_a_155870]
-
ITCF în aceeași diluție utilizată pentru determinarea titrului și se incubează într-o cameră umedă întunecoasă, la temperatura ambiantă, timp de 30 de minute. 5.2.9. Se clătește și se spală ca mai înainte. 5.2.10. În fiecare godeu, se pun 5 până la 10 мl de glicerină tamponată cu fosfat 0.1 M, cu pH 7,6 (sau o valoare similară cu un pH de minimum 7,6) și se acoperă cu o lamelă (apendice 2). 5.2.11
EUR-Lex () [Corola-website/Law/154541_a_155870]
-
lamelă (apendice 2). 5.2.11. Se examinează cu un microscop prevăzut cu o sursă de lumină epifluorescentă și filtre adecvate pentru ITCF. Se recomandă folosirea unui obiectiv cu o putere de mărire de 400x până la 1000x. Se scanează fiecare godeu replicat de-a lungul a două diametre perpendiculare și de-a lungul perimetrului acestuia. Se observă celulele fluorescente din controalele pozitive și se determină titrul acestora. Se observă celulele fluorescente din godeul de control ITCF/TFS și, dacă acestea sunt
EUR-Lex () [Corola-website/Law/154541_a_155870]
-
mărire de 400x până la 1000x. Se scanează fiecare godeu replicat de-a lungul a două diametre perpendiculare și de-a lungul perimetrului acestuia. Se observă celulele fluorescente din controalele pozitive și se determină titrul acestora. Se observă celulele fluorescente din godeul de control ITCF/TFS și, dacă acestea sunt absente, atunci se continuă cu godeurile de test. Se determină, în minimum 10 câmpuri microscopice, numărul mediu de celule fluorescente tipice morfologic per câmp și se calculează populația de celule pe mililitru
EUR-Lex () [Corola-website/Law/154541_a_155870]
-
două diametre perpendiculare și de-a lungul perimetrului acestuia. Se observă celulele fluorescente din controalele pozitive și se determină titrul acestora. Se observă celulele fluorescente din godeul de control ITCF/TFS și, dacă acestea sunt absente, atunci se continuă cu godeurile de test. Se determină, în minimum 10 câmpuri microscopice, numărul mediu de celule fluorescente tipice morfologic per câmp și se calculează populația de celule pe mililitru de depozit nediluat (apendice 4). În timpul testului de imunofluorescență, pot apărea mai multe probleme
EUR-Lex () [Corola-website/Law/154541_a_155870]
-
secunde. 9. Se spală cu apă de la robinet și se usucă cu un absorbant. Colorația bacteriilor Gram pozitive este violet-albastră; bacteriile Gram negative au o colorație roz-roșie. Apendicele 4 DETERMINAREA POPULAȚIEI DE CELULE POZITIVE LA TESTUL IF piD² Aria (S) godeului lamelei multispot = ──── (1) 4 Unde D = diametrul ferestrei. pid² Aria (s) câmpului obiectivului = ──── (2) 4 unde d = diametrul crmpului. Se calculează d prin măsurare directă sau prin formulele următoare: pi●i² s = (3) G²K²x4 unde i = coeficientul crmpului (depinde de
EUR-Lex () [Corola-website/Law/154541_a_155870]
-
40 x, etc.) a obiectivului ┌───── din (2), se obține d = │4s/pi \│ ┌───────── │ pi●i² │4x ────── \ │ G²K²x4 i din (3), se obține d = \ │───────── = ── (4) \│ pi GK Se numără celulele fluorescente tipice pe câmp (c). Se calculează numărul celulelor fluorescente tipice pe godeu (C). S C = c ● ─ s Se calculează numărul celulelor fluorescente tipice pe ml de depozit (N). 1000 N = Cx ──── x F y unde y = volumul depozitului pe godeu, unde F = factorul de diluție a depozitului. Apendicele 5 CULTURA VINETELOR Se
EUR-Lex () [Corola-website/Law/154541_a_155870]
-
fluorescente tipice pe câmp (c). Se calculează numărul celulelor fluorescente tipice pe godeu (C). S C = c ● ─ s Se calculează numărul celulelor fluorescente tipice pe ml de depozit (N). 1000 N = Cx ──── x F y unde y = volumul depozitului pe godeu, unde F = factorul de diluție a depozitului. Apendicele 5 CULTURA VINETELOR Se însămânțează semințe de vânătă (Solanum melongena cv. Black Beauty) într-un compost pasteurizat pentru semințe. Se plantează plantulele cu cotiledoane complet dezvoltate (10-14 zile) într-un compost pasteurizat
EUR-Lex () [Corola-website/Law/154541_a_155870]
-
culturile celulare infectate și diluat în soluție tampon carbonată/bicarbonată, la un pH de 9,6. Plăcile de ELISA se incubează peste noapte la 4°C. 1.1.1.2. Se spală plăcile de trei ori prin inundarea și golirea godeurilor cu soluție salină fosfată tamponată (SSFT), cu pH de la 7,2 la 7,4, și se usucă pe hârtie adsorbantă. 1.1.2. Godeuri de control 1.1.2.1. Se titrează serul pozitiv de control într-o serie de
EUR-Lex () [Corola-website/Law/220362_a_221691]
-
4°C. 1.1.1.2. Se spală plăcile de trei ori prin inundarea și golirea godeurilor cu soluție salină fosfată tamponată (SSFT), cu pH de la 7,2 la 7,4, și se usucă pe hârtie adsorbantă. 1.1.2. Godeuri de control 1.1.2.1. Se titrează serul pozitiv de control într-o serie de diluție dublă, de la 1/5 ia 1/640, de-a lungul coloanei 1 în soluția tampon de blocare (SFT care conține 0,05 % (v
EUR-Lex () [Corola-website/Law/220362_a_221691]
-
tampon de blocare (SFT care conține 0,05 % (v/v) Tween-20, 5,0 % (w/v) lapte praf smântânit (Cadbury's Marvel^TM)și 1,0 % (v/v) ser de la bovine adulte) pentru a reieși un volum total de 50 f2æl/godeu. 1.1.2.2. Se adaugă 50 f2æl din serul negativ de control, la o diluție de 1/5 (10 f2æl de ser + 40 æl de soluție tampon de blocare) în godeurile A și B ale coloanei 2. 1.1
EUR-Lex () [Corola-website/Law/220362_a_221691]
-
a reieși un volum total de 50 f2æl/godeu. 1.1.2.2. Se adaugă 50 f2æl din serul negativ de control, la o diluție de 1/5 (10 f2æl de ser + 40 æl de soluție tampon de blocare) în godeurile A și B ale coloanei 2. 1.1.2.3. Se adaugă 100 f2æl/godeu din soluția tampon de blocare, în godeurile C și D ale coloanei 2 (goale). 1.1.2.4. Se adaugă 50 f2æl din soluția tampon
EUR-Lex () [Corola-website/Law/220362_a_221691]
-
50 f2æl din serul negativ de control, la o diluție de 1/5 (10 f2æl de ser + 40 æl de soluție tampon de blocare) în godeurile A și B ale coloanei 2. 1.1.2.3. Se adaugă 100 f2æl/godeu din soluția tampon de blocare, în godeurile C și D ale coloanei 2 (goale). 1.1.2.4. Se adaugă 50 f2æl din soluția tampon de blocare în godeurile E, F, G și H ale coloanei 2 (cu ser de
EUR-Lex () [Corola-website/Law/220362_a_221691]
-
la o diluție de 1/5 (10 f2æl de ser + 40 æl de soluție tampon de blocare) în godeurile A și B ale coloanei 2. 1.1.2.3. Se adaugă 100 f2æl/godeu din soluția tampon de blocare, în godeurile C și D ale coloanei 2 (goale). 1.1.2.4. Se adaugă 50 f2æl din soluția tampon de blocare în godeurile E, F, G și H ale coloanei 2 (cu ser de cobai de control). 1.1.3. Metoda
EUR-Lex () [Corola-website/Law/220362_a_221691]
-
ale coloanei 2. 1.1.2.3. Se adaugă 100 f2æl/godeu din soluția tampon de blocare, în godeurile C și D ale coloanei 2 (goale). 1.1.2.4. Se adaugă 50 f2æl din soluția tampon de blocare în godeurile E, F, G și H ale coloanei 2 (cu ser de cobai de control). 1.1.3. Metoda testului punctual 1.1.3.1. Se adaugă câte o diluție 1/5 din fiecare ser de testat în soluția tampon de
EUR-Lex () [Corola-website/Law/220362_a_221691]
-
G și H ale coloanei 2 (cu ser de cobai de control). 1.1.3. Metoda testului punctual 1.1.3.1. Se adaugă câte o diluție 1/5 din fiecare ser de testat în soluția tampon de blocare, în godeurile corespunzătoare din coloanele de la 3 la 12 (10/f2æl ser + 40 æl de soluție tampon de blocare); sau 1.1.4. Metoda de titrare a serului 1.1.4.1. Se prepară o serie dublă de diluție pentru fiecare probă
EUR-Lex () [Corola-website/Law/220362_a_221691]
-
de blocare); sau 1.1.4. Metoda de titrare a serului 1.1.4.1. Se prepară o serie dublă de diluție pentru fiecare probă de testat (de la 1/5 la 1/640) în soluție tampon de blocare, în 8 godeuri ale coloanelor solitare de la 3 la 12. apoi 1.1.5. Se adaugă 50 f2æl de antiser de cobai, prediluat în soluție tampon de blocare, în toate godeurile plăcii pentru ELISA, exceptându-le pe cele goale (toate godeurile conțin acum
EUR-Lex () [Corola-website/Law/220362_a_221691]
-
1/5 la 1/640) în soluție tampon de blocare, în 8 godeuri ale coloanelor solitare de la 3 la 12. apoi 1.1.5. Se adaugă 50 f2æl de antiser de cobai, prediluat în soluție tampon de blocare, în toate godeurile plăcii pentru ELISA, exceptându-le pe cele goale (toate godeurile conțin acum un volum final de 100 f2æl). 1.1.5.1. Se incubează timp de o oră la 37 °C pe un agitator orbital. 1.1.5.2. Plăcile
EUR-Lex () [Corola-website/Law/220362_a_221691]
-
în 8 godeuri ale coloanelor solitare de la 3 la 12. apoi 1.1.5. Se adaugă 50 f2æl de antiser de cobai, prediluat în soluție tampon de blocare, în toate godeurile plăcii pentru ELISA, exceptându-le pe cele goale (toate godeurile conțin acum un volum final de 100 f2æl). 1.1.5.1. Se incubează timp de o oră la 37 °C pe un agitator orbital. 1.1.5.2. Plăcile se spală de trei ori și se usucă ca mai
EUR-Lex () [Corola-website/Law/220362_a_221691]
-
Plăcile se spală de trei ori și se usucă ca mai sus. 1.1.5.3. Se adaugă 50 f2æl de ser de iepure anti-cobai conjugat cu peroxidază din hrean, diluat în prealabil în soluție tampon de blocare, în fiecare godeu. 1.1.5.4. Se incubează timp de o oră la 37 °C pe un agitator orbital. 1.1.5.5. Plăcile se spală de trei ori și se usucă ca mai sus. 1.1.6. Cromogen Se prepară soluția
EUR-Lex () [Corola-website/Law/220362_a_221691]
-
substratul [peroxid de hidrogen H(2)O(2)] pentru a rezultă o concentrație finală de 0,05% (v/v) (1/2.000 dintr-o soluție de H(2)O(2) 30%). Se adaugă 50 f2æl de soluție OFD în fiecare godeu și se lasă plăcile pe bancă timp de 10 minute la temperatura camerei. Se oprește reacția prin adăugarea de 50 f2æl/godeu de acid sulfuric [H(2)SO(4)] 1 M. --------- Pct. 1.1.6. al anexei 4 a fost
EUR-Lex () [Corola-website/Law/220362_a_221691]
-
dintr-o soluție de H(2)O(2) 30%). Se adaugă 50 f2æl de soluție OFD în fiecare godeu și se lasă plăcile pe bancă timp de 10 minute la temperatura camerei. Se oprește reacția prin adăugarea de 50 f2æl/godeu de acid sulfuric [H(2)SO(4)] 1 M. --------- Pct. 1.1.6. al anexei 4 a fost modificat de pct. 22 al art. II din ORDINUL nr. 43 din 22 februarie 2007 , publicat în MONITORUL OFICIAL nr. 155 din
EUR-Lex () [Corola-website/Law/220362_a_221691]