946 matches
-
un eșantion ce conține antibiotice, inclusiv sulfamide (pct. 2.1), adiționat cu penicilinază (betalactamază) nu produce o zonă limpede sau dacă diametrul zonei limpezi produse este mai mic decât cel apărut în absența penicilinazei, substanța inhibantă este fie penicilină, fie penicilină asociată cu un alt antibiotic, inclusiv sulfamidă. 2.3. Dacă zona nu este inactivată de penicilinază (pct. 2.2), substanța inhibantă prezentă în eșantionul de lapte nu este penicilină, dar poate fi alt reziduu [vezi Directiva 85/397/CEE, anexa
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
cel apărut în absența penicilinazei, substanța inhibantă este fie penicilină, fie penicilină asociată cu un alt antibiotic, inclusiv sulfamidă. 2.3. Dacă zona nu este inactivată de penicilinază (pct. 2.2), substanța inhibantă prezentă în eșantionul de lapte nu este penicilină, dar poate fi alt reziduu [vezi Directiva 85/397/CEE, anexa A, capitolul IV lit. A pct. 1 lit. f) și pct. 2 lit. b)]. 3. Principiu Se așază un disc de hârtie absorbantă îmbibat cu lapte pentru analiză pe
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
de trimetoprim sau de tetroxoprim, se ajustează valoarea pH-ului în așa fel încât, după sterilizare, acesta să fie 8,0 ± 0,1 la 25oC. Se sterilizează mediul timp de 15 minute la 121 ± 1oC. 5.2. Soluții etalon de penicilină în lapte Vezi lit. A pct. 5.2. Pentru cuantificarea substanțelor inhibante (pct. 8), se pregătesc soluții etalon de penicilină în lapte fără substanțe inhibante (lit. A pct. 5.3), la concentrațiile următoare: a) 0,004 g/ml (0,0067
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
0 ± 0,1 la 25oC. Se sterilizează mediul timp de 15 minute la 121 ± 1oC. 5.2. Soluții etalon de penicilină în lapte Vezi lit. A pct. 5.2. Pentru cuantificarea substanțelor inhibante (pct. 8), se pregătesc soluții etalon de penicilină în lapte fără substanțe inhibante (lit. A pct. 5.3), la concentrațiile următoare: a) 0,004 g/ml (0,0067 UL/ ml); b) 0,006 g/ml (0,01UL/ ml); c) 0,03 g/ml (0,05UL/ ml); d) 0
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
fi păstrată la 0-5oC, timp de cel mult patru săptămâni. Notă Penicilinaza nu a fost supusă unei standardizări internaționale. În prezenta metodă, se presupune că zece unități de penicilinază sunt suficiente pentru a activa 0,6 μg (= 1 UL) de penicilină. Dacă nu se cunoaște concentrația unei penicilinaze date, va trebui să se verifice dacă presupunerea enunțată mai sus este corectă. Dacă e necesar, se ajustează concentrația soluției de penicilinază după caz. 5.3.2. În locul soluției de penicilinază, se pot
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
Mod de operare 6.1. Pregătirea eșantionului 6.1.1. Eșantioanele cu rezultate pozitive sau nesigure obținute prin "metoda A" (lit. A pct. 7.1 și lit. A pct. 7.2) trebuie supuse unei noi analize pentru identificarea și cuantificarea penicilinei. 6.1.2. În prealabil, se încălzesc eșantioanele de lapte la 80 ± 1oC timp de 10 minute, pentru a se evita influența substanțelor inhibante termolabile nespecifice. 6.1.3. Se omogenizează cu grijă, apoi se transferă aproximativ 10 ml din
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
cel puțin 20 mm unele de altele și la o distanță de cel puțin 10 mm de marginea plăcii. 6.2.3. Pentru a verifica finețea metodei, se dispun niște discuri (pct. 4.3) îmbibate cu o soluție etalon de penicilină [pct. 5.2 lit. a)] la întâmplare, printre discurile îmbibate cu eșantionul de lapte, în număr de cel puțin 2% din numărul discurilor îmbibate cu eșantionul de lapte; se vor utiliza cel puțin cinci discuri etalon la fiecare test. 6
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
de 2 1/2 până la 5 ore. 6.2.5. După incubare, se examinează cutiile Petri la lumină corespunzătoare, pentru a observa zonele limpezi de inhibare din jurul discului de hârtie. Se măsoară zonele limpezi. 6.2.6. Soluția etalon de penicilină (pct. 6.2.3) trebuie să formeze zone de cel puțin 2 mm în jurul discurilor. 6.2.7. Prezența zonelor limpezi în jurul discurilor îmbibate cu eșantionul de lapte de dimensiuni echivalente sau mai mari decât cea descrisă la pct. 6
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
eșantionul de lapte un disc îmbibat cu penicilinază (pct. 5.3.2), care se așază apoi pe placa de probă. 6.3.2. Se efectuează operația de la pct. 6.2.1 de două ori pentru fiecare din soluțiile etalon de penicilină descrise la pct. 5.2. lit. a)-d). 6.3.3. Se calculează media diametrelor zonelor limpezi de inhibare corespunzătoare eșantionului de lapte, eșantionului de lapte adiționat cu penicilinază și soluțiilor etalon de penicilină. 7. Interpretarea rezultatelor (vezi pct. 2
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
pentru fiecare din soluțiile etalon de penicilină descrise la pct. 5.2. lit. a)-d). 6.3.3. Se calculează media diametrelor zonelor limpezi de inhibare corespunzătoare eșantionului de lapte, eșantionului de lapte adiționat cu penicilinază și soluțiilor etalon de penicilină. 7. Interpretarea rezultatelor (vezi pct. 2) 7.1. Dacă nu apare nici o zonă limpede în jurul discului îmbibat cu lapte adiționat cu penicilinază, dar apare în schimb o zonă limpede în jurul discului îmbibat cu lapte, zonă mai mare sau egală cu
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
1. Dacă nu apare nici o zonă limpede în jurul discului îmbibat cu lapte adiționat cu penicilinază, dar apare în schimb o zonă limpede în jurul discului îmbibat cu lapte, zonă mai mare sau egală cu zona din jurul discului îmbibat cu soluția de penicilină etalon [pct. 5.2. lit. a)], substanța inhibantă prezentă în eșantionul de lapte corespunde unei concentrații de benzilpenicilinat de sodiu (sau de potasiu) mai mare sau egală cu 0,004 g/ml. 7.2. Dacă diametrul mediu al zonei limpezi
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
zonei limpezi din jurul discului îmbibat cu lapte adiționat cu penicilinază este mai mic decât diametrul mediu al zonei limpezi din jurul discului îmbibat cu eșantionul de lapte, încălzit conform dispozițiilor de la pct. 6.1.2, atunci eșantionul de lapte conține și penicilină și antibiotice (inclusiv sulfamide), și penicilină sau penicilină semisintetică (substanță care nu poate fi identificată la concentrația de penicilinază folosită în prezenta metodă). Penicilinele sintetice, precum cloxacilina sodică, pot să nu fie inactivate de penicilinază în condițiile descrise și pot
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
lapte adiționat cu penicilinază este mai mic decât diametrul mediu al zonei limpezi din jurul discului îmbibat cu eșantionul de lapte, încălzit conform dispozițiilor de la pct. 6.1.2, atunci eșantionul de lapte conține și penicilină și antibiotice (inclusiv sulfamide), și penicilină sau penicilină semisintetică (substanță care nu poate fi identificată la concentrația de penicilinază folosită în prezenta metodă). Penicilinele sintetice, precum cloxacilina sodică, pot să nu fie inactivate de penicilinază în condițiile descrise și pot astfel să fie clasate drept substanțe
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
cu penicilinază este mai mic decât diametrul mediu al zonei limpezi din jurul discului îmbibat cu eșantionul de lapte, încălzit conform dispozițiilor de la pct. 6.1.2, atunci eșantionul de lapte conține și penicilină și antibiotice (inclusiv sulfamide), și penicilină sau penicilină semisintetică (substanță care nu poate fi identificată la concentrația de penicilinază folosită în prezenta metodă). Penicilinele sintetice, precum cloxacilina sodică, pot să nu fie inactivate de penicilinază în condițiile descrise și pot astfel să fie clasate drept substanțe inhibante diferite
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
de lapte, încălzit conform dispozițiilor de la pct. 6.1.2, atunci eșantionul de lapte conține și penicilină și antibiotice (inclusiv sulfamide), și penicilină sau penicilină semisintetică (substanță care nu poate fi identificată la concentrația de penicilinază folosită în prezenta metodă). Penicilinele sintetice, precum cloxacilina sodică, pot să nu fie inactivate de penicilinază în condițiile descrise și pot astfel să fie clasate drept substanțe inhibante diferite de penicilină. Notă Substanțele inhibante diferite de penicilină pot fi identificate, dacă este nevoie, prin procedee
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
substanță care nu poate fi identificată la concentrația de penicilinază folosită în prezenta metodă). Penicilinele sintetice, precum cloxacilina sodică, pot să nu fie inactivate de penicilinază în condițiile descrise și pot astfel să fie clasate drept substanțe inhibante diferite de penicilină. Notă Substanțele inhibante diferite de penicilină pot fi identificate, dacă este nevoie, prin procedee specifice. 8. Determinarea concentrației de penicilină 8.1. Concentrația de penicilină se poate determina fie după stabilirea unei curbe de etalonare, fie prin calcule bazate pe
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
la concentrația de penicilinază folosită în prezenta metodă). Penicilinele sintetice, precum cloxacilina sodică, pot să nu fie inactivate de penicilinază în condițiile descrise și pot astfel să fie clasate drept substanțe inhibante diferite de penicilină. Notă Substanțele inhibante diferite de penicilină pot fi identificate, dacă este nevoie, prin procedee specifice. 8. Determinarea concentrației de penicilină 8.1. Concentrația de penicilină se poate determina fie după stabilirea unei curbe de etalonare, fie prin calcule bazate pe dimensiunile zonelor obținute cu soluțiile de
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
să nu fie inactivate de penicilinază în condițiile descrise și pot astfel să fie clasate drept substanțe inhibante diferite de penicilină. Notă Substanțele inhibante diferite de penicilină pot fi identificate, dacă este nevoie, prin procedee specifice. 8. Determinarea concentrației de penicilină 8.1. Concentrația de penicilină se poate determina fie după stabilirea unei curbe de etalonare, fie prin calcule bazate pe dimensiunile zonelor obținute cu soluțiile de penicilină etalon în lapte [pct. 5.2. lit. a)-d)]. 8.2. Trasarea curbei
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
penicilinază în condițiile descrise și pot astfel să fie clasate drept substanțe inhibante diferite de penicilină. Notă Substanțele inhibante diferite de penicilină pot fi identificate, dacă este nevoie, prin procedee specifice. 8. Determinarea concentrației de penicilină 8.1. Concentrația de penicilină se poate determina fie după stabilirea unei curbe de etalonare, fie prin calcule bazate pe dimensiunile zonelor obținute cu soluțiile de penicilină etalon în lapte [pct. 5.2. lit. a)-d)]. 8.2. Trasarea curbei de etalonare Dat fiind faptul
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
pot fi identificate, dacă este nevoie, prin procedee specifice. 8. Determinarea concentrației de penicilină 8.1. Concentrația de penicilină se poate determina fie după stabilirea unei curbe de etalonare, fie prin calcule bazate pe dimensiunile zonelor obținute cu soluțiile de penicilină etalon în lapte [pct. 5.2. lit. a)-d)]. 8.2. Trasarea curbei de etalonare Dat fiind faptul că există o corelație între log10 din concentrația de penicilină și diametrul zonelor de inhibare, curba de etalonare poate fi trasată pe
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
etalonare, fie prin calcule bazate pe dimensiunile zonelor obținute cu soluțiile de penicilină etalon în lapte [pct. 5.2. lit. a)-d)]. 8.2. Trasarea curbei de etalonare Dat fiind faptul că există o corelație între log10 din concentrația de penicilină și diametrul zonelor de inhibare, curba de etalonare poate fi trasată pe hârtie semilogaritmică, cu concentrațiile de penicilină pe ordonată, iar diametrul zonelor de inhibare pe abscisă. Calculul diametrului zonelor de inhibare se obține din media probelor efectuate de două
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
2. lit. a)-d)]. 8.2. Trasarea curbei de etalonare Dat fiind faptul că există o corelație între log10 din concentrația de penicilină și diametrul zonelor de inhibare, curba de etalonare poate fi trasată pe hârtie semilogaritmică, cu concentrațiile de penicilină pe ordonată, iar diametrul zonelor de inhibare pe abscisă. Calculul diametrului zonelor de inhibare se obține din media probelor efectuate de două ori. Se desenează un grafic al diametrelor zonelor de inhibare în funcție de concentrațiile soluțiilor etalon de penicilină și, astfel
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
concentrațiile de penicilină pe ordonată, iar diametrul zonelor de inhibare pe abscisă. Calculul diametrului zonelor de inhibare se obține din media probelor efectuate de două ori. Se desenează un grafic al diametrelor zonelor de inhibare în funcție de concentrațiile soluțiilor etalon de penicilină și, astfel, curba de etalonare este trasată. 8.3. Calculul Concentrațiile de penicilină ale unui eșantion de lapte se pot calcula din diametrul zonelor cu ajutorul ecuației de regresie sau al curbei de etalonare. Pentru un dozaj precis, raza zonelor de
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
diametrului zonelor de inhibare se obține din media probelor efectuate de două ori. Se desenează un grafic al diametrelor zonelor de inhibare în funcție de concentrațiile soluțiilor etalon de penicilină și, astfel, curba de etalonare este trasată. 8.3. Calculul Concentrațiile de penicilină ale unui eșantion de lapte se pot calcula din diametrul zonelor cu ajutorul ecuației de regresie sau al curbei de etalonare. Pentru un dozaj precis, raza zonelor de inhibare trebuie să fie de cel puțin două ori, și de cel mult
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
de etalonare. Pentru un dozaj precis, raza zonelor de inhibare trebuie să fie de cel puțin două ori, și de cel mult cinci ori, egală cu cea a discurilor. 9. Exprimarea rezultatelor 9.1. Rezultatele se exprimă în concentrație de penicilină mai mare sau egală cu 0,004 g/ml (sau se indică concentrația determinată) și, pentru substanțele inhibante diferite de penicilină, în concentrație echivalentă de penicilină. 9.2. Repetabilitatea (r) și reproductibilitatea (R) Deoarece s-a folosit un etalon pentru
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]