1,957 matches
-
typhimurium TA1537 sau TA97 sau TA97a și − S. typhimurium TA98 și − S. typhimurium TA100 și − E. coli WP2 uvrA sau E. coli WP2 uvrA (pKM101) sau S. typhimurium TA102. Pentru detectarea agenților mutageni de reticulare s-ar putea prefera includerea sușei TA102 sau adăugarea unei sușe de E. coli capabile de regenerarea ADN [de ex. E. coli WP2 sau E. coli WP2 (pKM101)]. Ar trebui să se utilizeze procedurile stabilite pentru prepararea culturilor de rezervă, verificarea markerilor și pentru păstrare. Pentru
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
TA97a și − S. typhimurium TA98 și − S. typhimurium TA100 și − E. coli WP2 uvrA sau E. coli WP2 uvrA (pKM101) sau S. typhimurium TA102. Pentru detectarea agenților mutageni de reticulare s-ar putea prefera includerea sușei TA102 sau adăugarea unei sușe de E. coli capabile de regenerarea ADN [de ex. E. coli WP2 sau E. coli WP2 (pKM101)]. Ar trebui să se utilizeze procedurile stabilite pentru prepararea culturilor de rezervă, verificarea markerilor și pentru păstrare. Pentru fiecare preparat de cultură de
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
pKM101)]. Ar trebui să se utilizeze procedurile stabilite pentru prepararea culturilor de rezervă, verificarea markerilor și pentru păstrare. Pentru fiecare preparat de cultură de rezervă congelată, ar trebui să se demonstreze necesitatea prezenței unui aminoacid pentru dezvoltarea culturii (histidină pentru sușele S. typhimurium și triptofan pentru sușele E. coli). Ar trebui să se verifice și alte caracteristici ale fenotipului, de ex.: prezența sau absența plasmidelor factorului R (rezistență), dacă este cazul [adică rezistența la ampicilină a sușelor TA98, TA100, TA97a sau
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
procedurile stabilite pentru prepararea culturilor de rezervă, verificarea markerilor și pentru păstrare. Pentru fiecare preparat de cultură de rezervă congelată, ar trebui să se demonstreze necesitatea prezenței unui aminoacid pentru dezvoltarea culturii (histidină pentru sușele S. typhimurium și triptofan pentru sușele E. coli). Ar trebui să se verifice și alte caracteristici ale fenotipului, de ex.: prezența sau absența plasmidelor factorului R (rezistență), dacă este cazul [adică rezistența la ampicilină a sușelor TA98, TA100, TA97a sau TA97, WP2 uvrA și WP2 uvrA
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
dezvoltarea culturii (histidină pentru sușele S. typhimurium și triptofan pentru sușele E. coli). Ar trebui să se verifice și alte caracteristici ale fenotipului, de ex.: prezența sau absența plasmidelor factorului R (rezistență), dacă este cazul [adică rezistența la ampicilină a sușelor TA98, TA100, TA97a sau TA97, WP2 uvrA și WP2 uvrA (pKM101) și rezistența la ampicilină + tetraciclină a sușei TA102]; prezența mutațiilor caracteristice (adică mutația rfa în S. typhimurium prin sensibilizare la cristal violet și mutația uvrA în E. coli sau
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
și alte caracteristici ale fenotipului, de ex.: prezența sau absența plasmidelor factorului R (rezistență), dacă este cazul [adică rezistența la ampicilină a sușelor TA98, TA100, TA97a sau TA97, WP2 uvrA și WP2 uvrA (pKM101) și rezistența la ampicilină + tetraciclină a sușei TA102]; prezența mutațiilor caracteristice (adică mutația rfa în S. typhimurium prin sensibilizare la cristal violet și mutația uvrA în E. coli sau mutația uvrB în S.typhimurium prin sensibilizare la lumina ultravioletă) (2) (3). De asemenea, sușele ar trebui să
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
ampicilină + tetraciclină a sușei TA102]; prezența mutațiilor caracteristice (adică mutația rfa în S. typhimurium prin sensibilizare la cristal violet și mutația uvrA în E. coli sau mutația uvrB în S.typhimurium prin sensibilizare la lumina ultravioletă) (2) (3). De asemenea, sușele ar trebui să producă un număr de colonii spontane de reversie pe fiecare placă, între limitele de frecvență estimate pe baza datelor de laborator anterioare și, de preferință, între limitele semnalate în literatura de specialitate. 1.5.1.2. Mediul
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
Se recomandă ca, ori de câte ori este posibil, să se prefere utilizarea unui solvent/vehicul apos. Când se testează substanțe instabile în apă, solventul organic utilizat ar trebui să nu conțină apă. 1.5.2. Condițiile de testare 1.5.2.1. Sușele experimentale (vezi 1.5.1.1) 1.5.2.2. Concentrația de expunere Printre criteriile care trebuie luate în considerație la determinarea cantității maxime de substanță de testat ce urmează se utilizeze sunt citotoxicitatea și solubilitatea în amestecul final de
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
se evaluează substanțe cu un conținut substanțial de posibile impurități mutagene, s-ar putea avea în vedere testarea la concentrații mai mari de 5 mg/placă sau 5μl/placă. 1.5.2.3. Martorii negativi și pozitivi Martorii pozitivi specifici sușei și martorii negativi (solvent sau vehicul) utilizați în paralel, ar trebui să se includă în fiecare test, atât în prezența, cât și în absența activării metabolice. Pentru martorii pozitivi, ar trebui să fie selectate acele concentrații care permit să se
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
ar trebui să fie selectate acele concentrații care permit să se demonstreze eficiența testului realizat. Pentru testele care utilizează un sistem de activare metabolică, selectarea substanței sau substanțelor de referință pentru martorii pozitivi ar trebui să se realizeze în funcție de tipul sușelor bacteriene utilizate. În tabelul următor sunt prezentate exemple de substanțe care se pot utiliza ca martori pozitivi pentru testele cu activare metabolică: Substanța Nr. CAS Nr. IESCE 9,10-dimetilantracen 781-43-1 212-308-4 7,12-dimetilbenz[a]antracen 57-97-6 200-359-5 benzo[a]piren
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
ar trebui să fie, de asemenea, caracterizat cu un mutagen care necesită o activare metabolică de către enzimele microzomiale, de ex. benzo[a]pirenul, dimetilbenzantracenul. În tabelul următor sunt prezentate exemple de substanțe care se pot utiliza ca martori pozitivi specifici sușei pentru testele realizate fără un sistem de activare metabolică exogenă: Substanța Nr. CAS Nr. IESCE Sușa azidă de sodiu 26628-22-8 247-852-1 TA 1535 și TA 100 2-nitrofluoren 607-57-8 210-138-5 TA 98 9-aminoacridină 90-45-9 201-995-6 TA 1537, TA 97 și TA
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
enzimele microzomiale, de ex. benzo[a]pirenul, dimetilbenzantracenul. În tabelul următor sunt prezentate exemple de substanțe care se pot utiliza ca martori pozitivi specifici sușei pentru testele realizate fără un sistem de activare metabolică exogenă: Substanța Nr. CAS Nr. IESCE Sușa azidă de sodiu 26628-22-8 247-852-1 TA 1535 și TA 100 2-nitrofluoren 607-57-8 210-138-5 TA 98 9-aminoacridină 90-45-9 201-995-6 TA 1537, TA 97 și TA 97a ICR 191 17070-45-0 241-129-4 TA 1537, TA 97 și TA 97a hidroperoxid de cumenă 80-15-9
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
și TA 97a hidroperoxid de cumenă 80-15-9 201-254-7 TA 102 mitomicin C 50-07-7 200-008-6 WP2 uvrA și TA 102 N-etil-N-nitro-N-nitrozoguanidină 70-25-7 200-730-1 WP2, WP2 uvrA și WP2uvrA(pKM101) 4-nitrochinolină-1-oxid 56-57-5 200-281-1 WP2, WP2 uvrA și WP2uvrA(pKM101) furilfuramidă (AF2) 3688-53-7 Sușe cu conținut de plasmid Se pot utiliza și alte substanțe de referință ca martori pozitivi corespunzători. Ar trebui să se aibă în vedere utilizarea unor martori pozitivi din aceeași clasă chimică, dacă sunt disponibili. Ar trebui să se utilizeze martori
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
toarnă pe suprafața unui mediu minimal de geloză depus pe placă. Geloza de acoperire se lasă să se solidifice înainte de incubare. Pentru metoda de preincubare (2) (3) (5) (6), substanța de testat/soluția de testat se supune la preincubare împreună cu sușa experimentală (ce conține aproximativ 108 celule viabile) și cu tamponul steril sau sistemul de activare metabolică (0,5 ml) de obicei timp de 20 de minute sau mai mult, la 30-37oC, înainte de a fi amestecată cu geloza de acoperire și
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
REZULTATELOR Există câteva criterii pentru determinarea unui rezultat pozitiv, precum creșterea în funcție de concentrație peste intervalul testat și/sau o creștere reproductibilă a uneia sau mai multor concentrații ale numărului de colonii care provoacă reversia per placă, la cel puțin o sușă cu sau fără sistem de activare metabolică (23). În primul rând ar trebui să se aibă în vedere relevanța biologică a rezultatelor. Pentru evaluarea rezultatelor testelor se poate recurge și la ajutorul unor metode statistice (24). Semnificația statistică nu ar
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
în condiții experimentale, substanța de testat nu este mutagenă pentru speciile testate. 3. RAPORTAREA RAPORTUL TESTULUI Raportul testului trebuie să conțină următoarele informații: Solventul/vehiculul: - justificarea alegerii vehiculului, - solubilitatea și stabilitatea substanței de testat în solvent/vehicul, dacă se cunoaște. Sușele: - sușele utilizate, - numărul de celule per cultură, - caracteristicile sușei, Condițiile de testare: - cantitatea de substanță de testat per placă (mg/placă sau μl/placă) cu justificarea alegerii dozei și numărului de plăci per concentrație, - mediile utilizate, - tipul și compoziția sistemului
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
condiții experimentale, substanța de testat nu este mutagenă pentru speciile testate. 3. RAPORTAREA RAPORTUL TESTULUI Raportul testului trebuie să conțină următoarele informații: Solventul/vehiculul: - justificarea alegerii vehiculului, - solubilitatea și stabilitatea substanței de testat în solvent/vehicul, dacă se cunoaște. Sușele: - sușele utilizate, - numărul de celule per cultură, - caracteristicile sușei, Condițiile de testare: - cantitatea de substanță de testat per placă (mg/placă sau μl/placă) cu justificarea alegerii dozei și numărului de plăci per concentrație, - mediile utilizate, - tipul și compoziția sistemului de
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
pentru speciile testate. 3. RAPORTAREA RAPORTUL TESTULUI Raportul testului trebuie să conțină următoarele informații: Solventul/vehiculul: - justificarea alegerii vehiculului, - solubilitatea și stabilitatea substanței de testat în solvent/vehicul, dacă se cunoaște. Sușele: - sușele utilizate, - numărul de celule per cultură, - caracteristicile sușei, Condițiile de testare: - cantitatea de substanță de testat per placă (mg/placă sau μl/placă) cu justificarea alegerii dozei și numărului de plăci per concentrație, - mediile utilizate, - tipul și compoziția sistemului de activare metabolică, inclusiv criteriile de acceptabilitate, - procedurile de
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
genetice (de ex. deleții importante) care nu sunt detectate în locusul HPRT la cromozomii X (2) (3) (4) (5) (6). În testul in vitro de mutație genică pe celule de mamifere, se pot utiliza culturi de linii celulare stabilite sau sușe celulare. Celule utilizate se selectează în funcție de capacitatea de creștere în cultură și de stabilitatea frecvenței de mutație spontană. Testele realizate in vitro necesită, în general, utilizarea unei surse exogene de activare metabolică. Sistemul de activare metabolică de acest tip nu
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
1.1. Selectarea speciilor de animale Se utilizează, de obicei, hamsteri chinezești și șoareci de sex masculin. Cu toate acestea, se pot utiliza masculi din orice altă specie de mamifere adecvată. Se recomandă utilizarea unor animale adulte tinere sănătoase, din sușe utilizate în mod curent în laborator. La începutul studiului, greutatea animalelor ar trebui să prezinte o variație minimă, ce nu trebuie să depășească ±20% din greutatea medie. 1.4.1.2. Condițiile de adăpost și hrană Se aplică condițiile generale
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
3-5 ore; pentru hamsterii chinezești intervalul este de 4-5 ore. 1.5.3. Dozele Dacă, în lipsa datelor corespunzătoare, se realizează un studiu pentru stabilirea dozelor, acesta ar trebui să se realizeze în același laborator și să utilizeze aceeași specie, aceeași sușă de animale și același regim de tratare ca în studiul principal ce urmează (7). În caz de toxicitate, se utilizează trei doze diferite pentru prima prelevare. Aceste trei doze ar trebui să acopere un domeniu de toxicități de la toxicitatea maximă
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
sau metaboliții acesteia să ajungă la țesutul țintă. 3. RAPORTAREA RAPORTUL TESTULUI Raportul testului trebuie să conțină următoarele informații: Solventul/vehiculul: - justificarea alegerii vehiculului, - solubilitatea și stabilitatea substanței de testat în solvent/vehicul, dacă se cunoaște. Animalele de laborator: - specia/sușa utilizată, - numărul și vârsta animalelor, - sursa, condițiile de adăpost și hrană etc., - greutatea fiecărui animal la începutul testului, inclusiv intervalul de greutate, greutatea medie și deviația standard pentru fiecare grupă. Condițiile de testare: - datele din studiul pentru stabilirea dozelor, dacă
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
scintilație lichidă. 1.4. DESCRIEREA METODEI 1.4.1. Preparatele 1.4.1.1. Selectarea speciei de animale Se utilizează, de obicei, șobolani, deși se poate utiliza orice specie de mamifere. Se recomandă utilizarea unor animale adulte tinere sănătoase din sușe folosite în mod curent în laborator. La începutul studiului, greutatea animalelor ar trebui să prezinte variații minime, ce nu trebuie să depășească ±20% din greutatea medie a fiecărui sex. 1.4.1.2. Condițiile de adăpost și hrană Se aplică
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
criteriile de stabilire a dozelor și ar trebui evaluate pentru fiecare caz în parte. Dacă, în lipsa datelor corespunzătoare, se realizează un studiu pentru stabilirea dozelor, acesta ar trebui să se realizeze în același laborator și să utilizeze aceeași specie, aceeași sușă de animale de același sex și regimul de tratare să fie același ca cel ce urmează să fie utilizat în studiul principal. Doza maximă se mai poate defini ca doza care produce anumite semne de toxicitate în ficat (de ex.
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
sau la țesutul țintă (de ex. toxicitatea sistemică). 3. RAPORTAREA RAPORTUL TESTULUI Raportul testului trebuie să conțină următoarele informații: Solventul/vehiculul: - justificarea alegerii vehiculului, - solubilitatea și stabilitatea substanței de testat în solvent/vehicul, dacă se cunoaște. Animalele de laborator: - specia/sușa utilizată, - numărul, vârsta și sexul animalelor, - sursa, condițiile de adăpost, regimul alimentar etc., - greutatea fiecărui animal la începutul testului, inclusiv intervalul de greutate, greutatea medie și deviația standard pentru fiecare grupă. Condițiile de testare: - martorii pozitivi și negativi vehicul/solvent
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]