5,630 matches
-
80 = 1,4 CAPITOLUL 8 Evaluarea capacității de formare a plajelor 1. Este preferabil să se folosească o gamă de diluție de virus pentru a se obține un număr optim de plaje pe placă. Diluțiile decimale de până la 10-7 în tampon fosfat salin ar trebui să fie suficiente. 2. Culturile monostrat vecine cu celulele embrionare de pui sau o linie celulară adecvată (de exemplu Madin-Darby bovine kidney) se prepară în cutii Petri cu diametrul de 5 cm. 3. Se adaugă 0
jrc1935as1992 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87085_a_87872]
-
3. Se adaugă 0,2 ml din fiecare diluție de virus în fiecare dintre cele două cutii Petri și se lasă în repaus timp de 30 de minute în vederea absorbției virusului. 4. După ce au fost spălate de trei ori în tampon fosfat salin, celulele infectate sunt acoperite cu un mediu adecvat care conține agar-agar de 1% p/v și, eventual, 0,01 mg/ml tripsină. Este important să nu se adauge nici un fel de ser în mediul de imersie. 5. După
jrc1935as1992 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87085_a_87872]
-
contracții sau sângerare, pacienta nu prezintă alte probleme vitale h. durere abdominală moderată la pacienta cu peste 20 săptămâni de sarcină i. sângerare minimă, sarcina peste 20 de săptămâni j. preeclampsie în antecedente, cefalee k. sângerare mai mare de trei tampoane/oră, altfel bine și nu prezintă semne de șoc 2. BOALĂ NEDIAGNOSTICATĂ a. febră și nivel de conștiență alterat însă nu inconștient b. febră și erupții cutanate c. episoade sincopale repetate d. amețeala cu debut brusc, slăbiciune e. pacient slăbit
EUR-Lex () [Corola-website/Law/235922_a_237251]
-
toracice sau palpitații, în revenire 16. SÂNGERAREA a. sângerare limitată necontrolată b. hematemeza, fără semn de șoc c. scaune țări, închise la culoare d. sarcina mai mare de 20 de săptămâni, sângerare minoră e. sângerare vaginala, mai mult de trei tampoane/oră, fără semne de șoc f. hemoragie nazala incontrolabila 17. DURERI TORACICE - CODUL GALBEN sau roșu se evaluează individual a. durere toracica, greață b. durere toracica, tahicardie c. durere toracica, atipica IM, în plină sănătate d. antecedente de angina, efect
EUR-Lex () [Corola-website/Law/235922_a_237251]
-
de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomate; (ii) detectarea Ralstonia solanacearum în eșantioanele de tuberculi de cartof; (iii) identificarea Ralstonia solanacearum. În apendice se oferă detalii cu privire la prepararea materialelor de testare, adică mediul de cultură, tampoanele, soluțiile, reactivii. CUPRINS: SECȚIUNEA I: Aplicarea protocolului de testare..............................................................9 1. Diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomată .......................9 2. Detectarea și identificarea Ralstonia solanacearum în eșantioanele de tuberculi de
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
Se îndepărtează scurgerea sau secțiunile de țesut decolorat din inelul vascular al tuberculului de cartof sau din căile vasculare ale tulpinii plantei de cartof sau tomată. Se pune în suspensie într-un volum mic de apă distilată sterilă sau un tampon fosfat de 50 mM. Se lasă 5 - 10 minute pe masă. 3.2. Se prepară o serie de diluții zecimale ale suspensiei, de exemplu 1/10 și 1/100 sau mai multe dacă se consideră necesar. 3.3. Se transferă
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
epinastia, cloroza, piticirea. Se izolează din plantele simptomatice după cum urmează: - se îndepărtează o secțiune de țesut din tulpină la doi cm deasupra punctului inoculării. - se mărunțește și se suspendă într-un volum mic de apă distilată sterilă sau cu un tampon fosfat de 50 mM. Se pune pe placă, se incubează și se verifică existența coloniilor tipice de Ralstonia solanacearum. SECȚIUNEA III DETECTAREA ȘI IDENTIFICAREA RALSTONIA SOLANACEARUM ÎN EȘANTIOANELE DE TUBERCULI DE CARTOF Notă: Mărimea standard a eșantionului este de 200
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
mult 24 de ore sau, la 4°C, pentru nu mai mult de 72 de ore. 1.3. Se prelucrează taloanele printr-una dintre următoarele proceduri: (i) Se transferă taloanele într-un recipient corespunzător. Se adaugă un volum suficient de tampon de macerare pentru a acoperi taloanele (apendicele 2). Taloanele se mărunțesc într-un malaxor de tip Waring Blender sau Ultra Thurrax până se atinge omogenizarea completă. Se evită omogenizarea excesivă. Se permite maceratului să absoarbă apă timp de 15 - 30
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
Waring Blender sau Ultra Thurrax până se atinge omogenizarea completă. Se evită omogenizarea excesivă. Se permite maceratului să absoarbă apă timp de 15 - 30 de minute. (ii) Se transferă taloanele într-un recipient corespunzător. Se adaugă un volum suficient de tampon de macerare pentru a acoperi taloanele. Se pune recipientul pe un agitator rotativ. Se incubează la 50 - 100 rpm timp de 4 ore la 20°C - 22°C sau timp de 16 - 24 de ore la 4°C. (iii) Se
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
rezistent de unică folosință (de exemplu, sacul Stomacher cu dimensiuni 105 mm × 150 mm, sterilizată prin radiații). Taloanele se zdrobesc cu atenție cu o unealtă corespunzătoare, de exemplu un ciocan, până la atingerea omogenizării complete. Se adaugă un volum suficient de tampon de macerare pentru a acoperi taloanele. Se permite maceratului să se așeze pentru 15 - 30 de minute. 1.4. Bacteriile se extrag din taloanele printr-una din următoarele proceduri: (i) Maceratul se decantează încet într-un tub de centrifugare lăsând
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
a deranja extractul concentrat. (ii) Se filtrează maceratul printr-un sistem de filtrare cu mărimea porilor de 40 - 100 μm. Se accelerează filtrarea utilizând o pompă de vid. Se colectează filtratul într-un tub de centrifugare. Se spală filtrul cu tamponul de macerare. Se centrifughează filtratul la 7 000 g timp de 15 minute sau la 10 000 g timp de 10 minute la o temperatură sub 10°C. Se îndepărtează supranatantul fără a deranja extractul concentrat. 1.5 Se face
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
de 15 minute sau la 10 000 g timp de 10 minute la o temperatură sub 10°C. Se îndepărtează supranatantul fără a deranja extractul concentrat. 1.5 Se face o nouă suspensie a extractului concentrat în 1 ml de tampon de concentrare (apendicele 2). Se împarte în două părți egale și se transferă fiecare parte într-o microfiolă. Una dintre microfiole se folosește pentru testare. Restul extractului se conservă pe perioada testelor la temperatura de 4°C. Se adaugă 10
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
poate fi folosit ca duplicat sau pentru un al doilea eșantion, după cum se prezintă în figura 1. (ii) pentru alte extracte concentrate: Se pregătesc diluții zecimale de 1/10, 1/100 și 1/1 000 din extractul concentrat resuspendat în tamponul de concentrare. Se pipetează un volum standard (15 μl corespund unei ferestre de 6 mm diametru - volumul se mărește pentru ferestre mai mari) din extractul concentrat resuspendat și fiecare diluție într-un șir de ferestre. Șirul rămas poate fi folosit
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
Celulele bacteriene se fixează pe lamă prin încălzire, trecere prin flacără sau cu 95% etanol. 2.3 Procedura IF (i) În conformitate cu pregătirea lamei de test de la 2.1 pct. (i): se prepară un set de diluții duble ale antiserului în tampon IF (apendicele 3): 1/4 din titru (T/4), 1/2 din titru (T/2), titru (T) și de două ori titrul (2T). (ii) În conformitate cu pregătirea lamei de test de la 2.1 pct. (ii): se prepară diluția de lucru (WD
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
1/4 din titru (T/4), 1/2 din titru (T/2), titru (T) și de două ori titrul (2T). (ii) În conformitate cu pregătirea lamei de test de la 2.1 pct. (ii): se prepară diluția de lucru (WD) a antiserului în tampon IF. Diluția de lucru este diluția antiserului cu specificitate optimă și este de obicei jumătate din titru. Figura 1 Pregătirea lamei de test în conformitate cu 2.1 pct. (i) și 2.3 pct. (i) Diluție standard a extractului concentrat resuspendat T
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
trebuie să fie echivalent cu volumul extractului aplicat. 2.3.2. Se incubează acoperit timp de 30 de minute la temperatura camerei. 2.3.3. Se scutură picăturile de antiser de pe lamă și se clătesc lamele cu atenție cu un tampon IF. Se spală timp de cinci minute în soluție tampon IF - Tween și apoi cinci minute în tampon IF (apendicele 3). Excesul de umezeală se îndepărtează cu grijă. 2.3.4. Se aranjează lamele pe hârtie absorbantă. Se acoperă ferestrele
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
2. Se incubează acoperit timp de 30 de minute la temperatura camerei. 2.3.3. Se scutură picăturile de antiser de pe lamă și se clătesc lamele cu atenție cu un tampon IF. Se spală timp de cinci minute în soluție tampon IF - Tween și apoi cinci minute în tampon IF (apendicele 3). Excesul de umezeală se îndepărtează cu grijă. 2.3.4. Se aranjează lamele pe hârtie absorbantă. Se acoperă ferestrele de test și fereastra FITC cu diluția conjugatului FITC utilizat
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
minute la temperatura camerei. 2.3.3. Se scutură picăturile de antiser de pe lamă și se clătesc lamele cu atenție cu un tampon IF. Se spală timp de cinci minute în soluție tampon IF - Tween și apoi cinci minute în tampon IF (apendicele 3). Excesul de umezeală se îndepărtează cu grijă. 2.3.4. Se aranjează lamele pe hârtie absorbantă. Se acoperă ferestrele de test și fereastra FITC cu diluția conjugatului FITC utilizat pentru determinarea titrului. Volumul conjugatului aplicat în ferestre
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
de pe placa de microtitru. 3.1. Se pipetează 100 - 200 μl din extractul concentrat resuspendat într-o microfiolă. Se încălzește timp de 4 minute la 100 șC. Se pune microfiola la gheață. 3.2. Se adaugă un volum egal de tampon de acoperire din carbonat dublu concentrat (apendicele 5). Se centrifughează. 3.3. Se aplică 100 μl alicote fiecăreia dintre minim ultimele două puțuri ale plăcii de microtitrare. Se incubează o oră la 37 șC sau peste noapte la 4 șC.
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
4. Se scot extractele din puțuri. Se spală puțurile de trei ori cu PBS - Tween (apendicele 5), lăsând ultima soluție de spălare cel puțin cinci minute în puțuri. 3.5. Se prepară diluția corespunzătoare a antiserului de Ralstonia solanacearum în tampon de blocare (apendicele 5). Se aplică 100 μl de diluție de antiser în puțuri. Se incubează o oră la 37 șC. 3.6. Se scoate antiserul din puțuri. Se spală ca mai înainte (3.4). 3.7. Se prepară diluția
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
μl de diluție de antiser în puțuri. Se incubează o oră la 37 șC. 3.6. Se scoate antiserul din puțuri. Se spală ca mai înainte (3.4). 3.7. Se prepară diluția corespunzătoare de conjugat de fosfatază alcalină în tampon de blocare. Se aplică 100 μl de diluție conjugată în puțuri. Se incubează o oră la 37 șC. 3.8. Se scoate conjugatul din puțuri. Puțurile se spală ca mai înainte (3.4 și 3.6). 3.9. Se prepară
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
amestecul de reacție PCR (apendicele 6) într-o fiolă sterilă, prin adăugarea următoarelor componente în ordinea următoare: Pentru un volum de reacție de 50 μl: Component Cantitate Concentrație finală Apă distilată sterilă sau AUP 30,8 μl - 33,8 μl Tampon PCR × 10 5,0 μl 1× d-ATP 1,0 μl 0,2 mM d-CTP 1,0 μl 0,2 mM d-GTP 1,0 μl 0,2 mM d-TTP 1,0 μl 0,2 mM Amorsă OLI-
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
o durată mai mare. 4.6. Analiza produsului PCR Fragmentele PCR se detectează prin electroforeză în gel de agar și colorare cu bromură de etidiu. 4.6.1. Se prepară un mediu agarizat corespunzător aducând încet la fierbere agaroza în tampon de electroforeză tri-acetată (ETA). 4.6.2 Se răcește agaroza topită la 50 - 60 °C, se toarnă în cuva electroforezei și se introduce pieptenul. Soluția se lasă să se solidifice. 4.6.3 Se îndepărtează pieptenul. Gelul se introduce în
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
agaroza topită la 50 - 60 °C, se toarnă în cuva electroforezei și se introduce pieptenul. Soluția se lasă să se solidifice. 4.6.3 Se îndepărtează pieptenul. Gelul se introduce în ETA astfel încât să fie acoperit 2 - 3 mm de tampon. 4.6.4 Se pun 3 μl de picături de tampon de încărcare pe parafilm. Se adaugă 12 μl din produsul PCR din eșantion, din controlul pozitiv sau din controlul de apă și de amestecă prin aspirarea ușoară în conul
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
și se introduce pieptenul. Soluția se lasă să se solidifice. 4.6.3 Se îndepărtează pieptenul. Gelul se introduce în ETA astfel încât să fie acoperit 2 - 3 mm de tampon. 4.6.4 Se pun 3 μl de picături de tampon de încărcare pe parafilm. Se adaugă 12 μl din produsul PCR din eșantion, din controlul pozitiv sau din controlul de apă și de amestecă prin aspirarea ușoară în conul pipetei înainte de încărcare. Volumele date pot fi modificate pentru a corespunde
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]