3,495 matches
-
Se așează balonul în baia de apă sau în incubator (4.1.) și se lasă acolo timp de 48 de ore. Se agită după 8, 24 și 32 de ore. După 48 de ore, se adaugă 15 ml de acid clorhidric (3.1.), se răcește la 20ș C, se completează volumul cu apă și se filtrează. 5.2. Digestia Se iau 250 ml din filtrat și se așează în balonul aparatului de distilare (4.2.). Se adaugă reactivii necesari pentru digestia
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
să fie mai întâi degresate cu eter de petrol (B.P. 40 - 60ș C). 4. ESTIMAREA ACTIVITĂȚII PEPSINEI 1. Obiectiv și domeniu de aplicare Această metodă face posibilă stabilirea activității pepsinei folosite în determinarea proteinelor brute dizolvate de pepsină și acid clorhidric. 2. Principiu Hemoglobina se tratează cu pepsină într-un mediu de acid clorhidric în condiții definite. Fracția ne-hidrolizată din proteină se precipită în acid tricloroacetic. Hidroxidul de sodiu și reactivul Folin-Ciocalteu se adaugă filtratului. Densitatea optică a acestei soluții
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
4. ESTIMAREA ACTIVITĂȚII PEPSINEI 1. Obiectiv și domeniu de aplicare Această metodă face posibilă stabilirea activității pepsinei folosite în determinarea proteinelor brute dizolvate de pepsină și acid clorhidric. 2. Principiu Hemoglobina se tratează cu pepsină într-un mediu de acid clorhidric în condiții definite. Fracția ne-hidrolizată din proteină se precipită în acid tricloroacetic. Hidroxidul de sodiu și reactivul Folin-Ciocalteu se adaugă filtratului. Densitatea optică a acestei soluții se măsoară la 750 nm și cantitatea corespunzătoare de tirozină este citită dintr-
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
care, în condițiile metodei, eliberează per minut o cantitate de grupuri de hidroxiaril care, când este colorată cu reactivul Folin-Ciocalteu, are o densitate optică corespunzătoare celei a unui μmol de tirozină colorat în același mod. 3. Reactivi 3.1. Acid clorhidric 0,2 N. 3.2. Acid clorhidric 0,06 N. 3.3. Acid clorhidric 0,025 N. 3.4. Soluție 5 % (g / v) de acid tricloroacetic. 3.5. Soluție de hidroxid de sodiu 0,5 N. 3.6. Reactivul Folin-Ciocalteu
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
o cantitate de grupuri de hidroxiaril care, când este colorată cu reactivul Folin-Ciocalteu, are o densitate optică corespunzătoare celei a unui μmol de tirozină colorat în același mod. 3. Reactivi 3.1. Acid clorhidric 0,2 N. 3.2. Acid clorhidric 0,06 N. 3.3. Acid clorhidric 0,025 N. 3.4. Soluție 5 % (g / v) de acid tricloroacetic. 3.5. Soluție de hidroxid de sodiu 0,5 N. 3.6. Reactivul Folin-Ciocalteu. Se plasează 100 g de wolframat de
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
când este colorată cu reactivul Folin-Ciocalteu, are o densitate optică corespunzătoare celei a unui μmol de tirozină colorat în același mod. 3. Reactivi 3.1. Acid clorhidric 0,2 N. 3.2. Acid clorhidric 0,06 N. 3.3. Acid clorhidric 0,025 N. 3.4. Soluție 5 % (g / v) de acid tricloroacetic. 3.5. Soluție de hidroxid de sodiu 0,5 N. 3.6. Reactivul Folin-Ciocalteu. Se plasează 100 g de wolframat de sodiu (Na2WO4·2H2O), 25 g de molibdat
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
sodiu (Na2MoO4·2H2O) și 700 ml de apă într-un balon de 2 litri cu fundul rotund prevăzut cu o îmbinare cu sticlă șlefuită standard. Se adaugă 50 ml de acid fosforic (d: 1,71) și 100 ml de acid clorhidric concentrat (d: 1,19), se conectează un condensator cu reflux la balon, se aduce la punctul de fierbere și se păstrează soluția fierbând încet timp de 10 ore. Se lasă să se răcească, se detașează condensatorul cu reflux, se adaugă
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
aprox. 2 g de substrat de proteine determinat conform Anson) care să corespundă la 354 mg azot1 și se așeazăă într-un balon de 200 ml prevăzut cu o îmbinare cu sticlă șlefuită standard. Se adaugă câțiva ml din acidul clorhidric (3.2.), se conectează balonul la pompa de vid și se agită până când hemoglobina s-a dizolvat complet. Se deconectează de la pompă și, în timpul agitării, se adaugă acid clorhidric (3.2.) pentru a completa până la 100 ml. Se prepară imediat
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
îmbinare cu sticlă șlefuită standard. Se adaugă câțiva ml din acidul clorhidric (3.2.), se conectează balonul la pompa de vid și se agită până când hemoglobina s-a dizolvat complet. Se deconectează de la pompă și, în timpul agitării, se adaugă acid clorhidric (3.2.) pentru a completa până la 100 ml. Se prepară imediat înainte de folosire. 3.8. Soluția standard de tirozină: Se dizolvă 181,2 mg de tirozină în acidul clorhidric (3.1.) și se completează până la 1 litru cu același acid
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
complet. Se deconectează de la pompă și, în timpul agitării, se adaugă acid clorhidric (3.2.) pentru a completa până la 100 ml. Se prepară imediat înainte de folosire. 3.8. Soluția standard de tirozină: Se dizolvă 181,2 mg de tirozină în acidul clorhidric (3.1.) și se completează până la 1 litru cu același acid (soluție-mamă). Se iau 20,0 ml și se diluează până la 100 ml cu acid clorhidric (3.1.). 1 ml din această soluție conține 0,2 μmoli de tirozină. 4
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
8. Soluția standard de tirozină: Se dizolvă 181,2 mg de tirozină în acidul clorhidric (3.1.) și se completează până la 1 litru cu același acid (soluție-mamă). Se iau 20,0 ml și se diluează până la 100 ml cu acid clorhidric (3.1.). 1 ml din această soluție conține 0,2 μmoli de tirozină. 4. Aparate 4.1. Baie de apă fixată la 25ș C ± 0,1ș C prin ultratermostat. 4.2. Spectrofotometru. 4.3. Cronometru, precizie: 1 secundă. 4.4
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
C prin ultratermostat. 4.2. Spectrofotometru. 4.3. Cronometru, precizie: 1 secundă. 4.4. Aparat de măsurat pH-ul. 5. Procedura 5.1. Prepararea soluției (vezi observația 7.1.) Se dizolvă 150 mg de pepsină în 100 ml de acid clorhidric (3.2.). Se pun cu pipeta 2 ml de soluție într-un balon gradat de 50 ml și se completează volumul cu acid clorhidric (3.3.). pH-ul, verificat cu aparatul respectiv, trebuie să fie 1,6 ± 0,1. Se
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
soluției (vezi observația 7.1.) Se dizolvă 150 mg de pepsină în 100 ml de acid clorhidric (3.2.). Se pun cu pipeta 2 ml de soluție într-un balon gradat de 50 ml și se completează volumul cu acid clorhidric (3.3.). pH-ul, verificat cu aparatul respectiv, trebuie să fie 1,6 ± 0,1. Se scufundă balonul în baia de apă (4.1.). 5.2. Hidroliza Se pun cu pipeta 5,0 ml de soluție de hemoglobină (3.7
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
la 0,2, 0,4, 0,6, 0,8 și 1,0 μmoli de tirozină în baloane Erlenmayer de 50 ml. Se completează seria cu o soluție de referință fără tirozină. Se completează volumele până la 5,0 ml cu acid clorhidric (3.1.). Se adaugă 10,0 ml de soluție de hidroxid de sodiu (3.5.) și, agitând constant, 3,0 ml din reactivul Folin-Ciocalteu diluat (3.6.). Se măsoară densitatea optică după cum este indicat la pct. 5.3. ultima propoziție
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
de aplicare Această metodă face posibilă detectarea și identificarea antibioticelor din grupul tetracicline în furajele conținând cel puțin 0,1 ppm de antibiotice, în concentrații și în amestecuri. 2. Principiu Proba este extrasă cu un amestec de metanol și acid clorhidric. Extrasul și soluțiile de referință pentru comparație sunt supuse cromatografiei ascendente pe hârtie. Antibioticele sunt detectate și identificate prin comparația valorilor Rf cu acelea ale substanțelor standard, fie prin fluorescență în lumină UV (conținut ridicat de antibiotice) sau prin bioautografie
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
2-propanol: 20/10/1,5 per volum. Se prepară imediat înaintea folosirii. 3.4 Solvent II: Amestec de nitrometan pur / cloroform pur / 2-picolină: 20/10/3 per volum. Se prepară imediat înaintea folosirii. 3.5 Amestec de metanol pur / acid clorhidric (d: 1,19): 98/2 per volum. 3.6 Acid clorhidric 0,1 N. 3.7 Amoniac, d: 0,91. 3.8 Substanțe standard: Clorotetracicline, oxitetracicline, tetracicline, a căror activitate este exprimată în condiții de clorură acidă. 3.9 Microorganisme
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
folosirii. 3.4 Solvent II: Amestec de nitrometan pur / cloroform pur / 2-picolină: 20/10/3 per volum. Se prepară imediat înaintea folosirii. 3.5 Amestec de metanol pur / acid clorhidric (d: 1,19): 98/2 per volum. 3.6 Acid clorhidric 0,1 N. 3.7 Amoniac, d: 0,91. 3.8 Substanțe standard: Clorotetracicline, oxitetracicline, tetracicline, a căror activitate este exprimată în condiții de clorură acidă. 3.9 Microorganisme: B cereus ATTC nr. 11.778 Menținerea sușei părinte, prepararea suspensiei
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
sau echivalenți. 4.2 Centrifugă. 4.3 Incubator setat la 30ș C. 4.4 Lumină UV pentru detectarea fluorescenței. 4.5 Talere de sticlă de aproximativ 20 x 30 cm pentru bioautografie. 5. Soluții standard 5.1 Soluții-mamă Folosind acidul clorhidric (3.6), se prepară din substanțele standard (3.8) soluții cu concentrații corespunzătoare la 500 μg per ml de Clorotetraciclină-HCl, de oxitetraciclină-HCl și de tetraciclină-HCl. 5.2 Soluții de referință pentru detectarea cu lumina UV Se diluează soluțiile (5.1
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
fi estimate prin interpolare grafică. 2. Principiu Pentru un conținut de 50 ppm sau mai mic, proba este extrasă cu formamidă diluată. Pentru un conținut mai mare de 50 ppm, se extrage cu un amestec de acetonă, apă și acid clorhidric, pentru determinarea CTC, și cu un amestec de metanol și acid clorhidric pentru determinarea OTC și a TC. Extrasele sunt apoi diluate și activitatea antibioticele lor este determinată prin măsurarea difuziei CTC, OTC sau TC pe un mediu de geloză
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
ppm sau mai mic, proba este extrasă cu formamidă diluată. Pentru un conținut mai mare de 50 ppm, se extrage cu un amestec de acetonă, apă și acid clorhidric, pentru determinarea CTC, și cu un amestec de metanol și acid clorhidric pentru determinarea OTC și a TC. Extrasele sunt apoi diluate și activitatea antibioticele lor este determinată prin măsurarea difuziei CTC, OTC sau TC pe un mediu de geloză însămânțat cu B cereus. Difuzia este evidențiată prin formarea zonele de inhibiție
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
5 Monofosfat de potasiu KH2PO4 A.R. 1,407 g Difosfat de sodiu Na2HPO4 · 2H2O A.R. 57,539 g Apă distilată la 1 000 ml 4.5 Salină sterilă fiziologică. 4.6 20 % (v / v) etanol. 4.7 Acid clorhidric 0,1 N. 4.8 70 % (v / v) formamidă: se prepară proaspătă înainte de folosire și se ajustează pH-ul la 4,5 folosind acid sulfuric aproximativ 2 N. 4.9 Un amestec de acetonă pură / apă / acid clorhidric(d: 1
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
7 Acid clorhidric 0,1 N. 4.8 70 % (v / v) formamidă: se prepară proaspătă înainte de folosire și se ajustează pH-ul la 4,5 folosind acid sulfuric aproximativ 2 N. 4.9 Un amestec de acetonă pură / apă / acid clorhidric(d: 1,19): 65/33/2 per volum. 4.10 Un amestec de metanol pur / acid clorhidric (d: 1,19): 98/2 per volum. 4.11 Substanțele standard: CTC, OTC, TC, activitatea cărora este exprimată sub formă de hidrocloride. 5
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
și se ajustează pH-ul la 4,5 folosind acid sulfuric aproximativ 2 N. 4.9 Un amestec de acetonă pură / apă / acid clorhidric(d: 1,19): 65/33/2 per volum. 4.10 Un amestec de metanol pur / acid clorhidric (d: 1,19): 98/2 per volum. 4.11 Substanțele standard: CTC, OTC, TC, activitatea cărora este exprimată sub formă de hidrocloride. 5. Soluții standard 5.1 Clorotetraciclină Folosind acidul clorhidric (4.7), se prepară din soluția standard (4.11
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
volum. 4.10 Un amestec de metanol pur / acid clorhidric (d: 1,19): 98/2 per volum. 4.11 Substanțele standard: CTC, OTC, TC, activitatea cărora este exprimată sub formă de hidrocloride. 5. Soluții standard 5.1 Clorotetraciclină Folosind acidul clorhidric (4.7), se prepară din soluția standard (4.11) o soluție-mamă cu o concentrație corespunzând la 500 μg pe ml de Clorotetraciclină-HCl. Această soluție se păstrează o săptămână în frigider. Din această soluție-mamă, se prepară o soluție de lucru standard
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
per kg, presupunând că nu sunt interferențe de alte substanțe care să facă neclar extractul. Această metodă este mai rapidă decât difuzia în geloză. 2. Principiu Pentru determinarea CTC, proba este extrasă cu un amestec de acetonă, apă și acid clorhidric, și cu un amestec de metanol și acid clorhidric pentru determinarea OTC și TC. Extractele sunt apoi diluate și efectele antibioticelor sunt determinate prin măsurarea transmisiei luminii a unui mediu de cultură care a fost însămânțat cu Staphylococus aureus și
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]