3,415 matches
-
laptelui de bivoliță prin focalizarea izoelectrică a cazeinelor tratate cu plasmină. Reactivi pentru colorarea proteinelor 4.9. Fixativ Se dizolvă în apă 150 g acid tricloroacetic și se completează cu apă până la 1000 ml. 4.10. Soluție pentru decolorare Se diluează în apă distilată până la 2000 ml 500 ml metanol și 200 ml acid acetic cristalizabil. Observație: Se prepară zilnic o soluție proaspătă de decolorare; soluția poate fi preparată prin amestecarea de volume egale de soluții "stock" metanol 50% (v/v
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
decolorarea se efectuează la 20 °C. A nu se folosi temperaturi ridicate. Observația 2: Dacă se preferă colorarea mai sensibilă cu argint (de exemplu Silver Staining Kit, Protein, Pharmacia Biotech, cod nr. 17-1150-01), probele de cazeină tratate cu plasmină trebuie diluate la 5 mg/ml. 7. Evaluare Evaluarea este efectuată prin compararea benzilor de proteine ale probei necunoscute cu probele de referință efectuate pe același gel. Detectarea laptelui de vacă în brânzeturile din lapte de oaie, lapte de capră și lapte
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
1) pentru a dizolva complet carbonatul. Se lasă în baia de apă până CaCl2 se usucă pentru a se elimina HCl care nu a reacționat. Se transferă împreună cu apa distilată într-un vas de măsurat de 100 ml și se diluează până la marcaj. Se măsoară valoarea pH-ului, care nu trebuie să fie mai mică de 4,0. Soluția se păstrează în refrigerator. 4.3. Hidroxid de sodiu 0,1 N. 4.4. Acid clorhidric 0,1 N. 4.5. Cheag
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
este utilizat de laboratorul regional de referință pentru pesta cabalină africană din Pirbright, Marea Britanie. 1.1. Descrierea testului 1.1.1. Pregătirea plăcilor 1.1.1.1. Se așează pe plăci ELISA antigenul VPCA extras din culturi de celule infectate, diluat într-un tampon carbonat-bicarbonat cu pH 9,6. Se incubează plăcile ELISA timp de o noapte la 4șC. 1.1.1.2. Se spală plăcile de trei ori prin clătire și se golesc godeurile cu o soluție salină tamponată cu
jrc5495as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90665_a_91452]
-
în 2 din fiecare eșantion de testat (de la 1/5 la 1/640) într-un tampon de blocare în opt godeuri în fiecare dintre coloanele de la 3 la 12. apoi 1.1.5. Se adaugă 50 µl antiser de cobai, diluat în prealabil într-un tampon de blocare, în toate godeurile, cu excepția godeurilor de CONTROL CU BLANC din placa ELISA (toate godeurile conțin în prezent un volum final de 100 µl). 1.1.5.1. Se incubează timp de 1 oră
jrc5495as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90665_a_91452]
-
un agitator rotativ. 1.1.5.2. Se spală plăcile de trei ori și se usucă în modul menționat anterior. 1.1.5.3. Se adaugă în fiecare godeu 50 µl ser de iepure anticobai conjugat cu peroxidază de hrean, diluat în prealabil într-un tampon de blocare. 1.1.5.4. Se incubează timp de 1 oră la 37șC într-un agitator rotativ. 1.1.5.5. Se spală plăcile de trei ori și se usucă în modul menționat anterior
jrc5495as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90665_a_91452]
-
foarte specifică. Această proteină prezintă, de asemenea, avantajul de a fi stabilă și neinfecțioasă. 2.1. Descrierea testului 2.1.1. Faza solidă 2.1.1.1. Plăcile ELISA se sensibilizează cu proteina recombinantă VP7 a VPCA de serotip 4, diluată într-un tampon carbonat/bicarbonat cu pH 9,6. Se incubează plăcile timp de o noapte la 4°C. 2.1.1.2. Se clătesc plăcile de cinci ori cu apă distilată cu conținut de 0,01% (v/v) Tween-20
jrc5495as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90665_a_91452]
-
la 37°C. 2.1.1.4. Se înlătură soluția de saturare și se scutură ușor plăcile pe un material absorbant. 2.1.2. Eșantioane 2.1.2.1. Serurile de testat și serurile pozitive și negative de control se diluează la 1/25 într-o SSTF +5% (m/v) de lapte praf degresat + 0,05% (v/v) Tween -20; se aplică apoi 100 µl în fiecare godeu. Se incubează timp de 1 oră la 37°C. Pentru titrare, se realizează
jrc5495as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90665_a_91452]
-
37°C. 2.1.2.2. Se clătesc plăcile conform descrierii din etapa 2.1.1.2. 2.1.3. Conjugat 2.1.3.1. Se depun 100 µl/ godeu de anticorpi antical conjugați cu peroxidază de hrean; anticorpii se diluează într-o SSTF + 5% lapte degresat + 0,05% Tween-20 cu pH 7,2. Se incubează timp de 1 oră la 37°C. 2.1.3.2. Se clătesc plăcile conform descrierii din etapa 2.1.1.2. 2.1.4
jrc5495as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90665_a_91452]
-
utilizat de laboratorul comunitar de referință pentru pesta cabalină africană din Algete, Spania. 3.1. Descrierea testului 3.1.1. Plăcile ELISA 3.1.1.1. Se depune pe plăci ELISA antigenul VPCA de serotip 4 cu proteina recombinantă VP7, diluată într-un tampon carbonat/bicarbonat cu pH 9,6 și se incubează timp de o noapte la 4șC. 3.1.1.2. Se spală plăcile de 5 ori cu o soluție salină tamponată cu fosfat (SSTF) cu conținut de 0
jrc5495as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90665_a_91452]
-
Se stabilizează placa prin tratare cu ajutorul unei soluții de stabilizare (pentru a permite păstrarea pe termen lung la 4șC fără pierdere de activitate) și se usucă pe sugativă. 3.1.2. Eșantioane și controale 3.1.2.1. Cernere: se diluează serurile de testat și serurile de control în proporție de 1 la 10 direct pe placă în SSTF pentru obținerea unui volum final de 100 µl în fiecare godeu. Se incubează timp de o oră la 37șC. 3.1.2
jrc5495as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90665_a_91452]
-
control pozitive (100 µl în fiecare godeu) de la 1/10 la 1/1280 care se depun în opt godeuri. Controlul negativ este testat la o diluție de 1/10. 3.1.3. Conjugat Se adaugă 50 µl de anticorp monoclonal diluat în prealabil (anticorp monoclonal conjugat cu peroxidază de hrean) în fiecare godeu și se amestecă ușor pentru a garanta omogeneitatea. Se incubează timp de 30 de minute la 37șC. 3.1.4. Se spală plăcile de 5 ori cu SSTF
jrc5495as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90665_a_91452]
-
prealabil uscată la 100°C și se introduce substanța într-un balon conic de 500 ml. Se adaugă 3 ml hidroxid de sodiu și 200 ml apă. Se agită până la dizolvare. Se neutralizează licoarea arsenică cu 15 ml acid sulfuric diluat la 10% (w/w) și se adaugă apă de brom saturată (calitate AR) până la stabilizarea culorii galbene a bromului liber (teoretic 7 ml). Se aduce la punctul de fierbere pentru a se elimina bromul în exces, se transferă într-un
jrc4756as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89922_a_90709]
-
atenție. Se adaugă 2 g de catalizator de mineralizare și 15 ml acid sulfuric pur. Se încălzește direct pe flacără, menținând gâtul balonului înclinat, până ce soluția devine incoloră și pe marginea balonului nu mai există substanțe carbonizate. După răcire, se diluează cu 50 ml apă și se continuă răcirea; se pune acest lichid în barbotorul B prin filtrul E; apoi se adaugă 40 - 50 ml sodă de hidroxid de sodiu 30% pentru a se obține alcalinizarea totală a lichidului și pentru
jrc4756as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89922_a_90709]
-
să fie de 30% sau mai mare. A. Reactivi: 1. Soluție de hidroxid de sodiu 0,1 N. 2. Soluție de acid salicilic 0,1 N. (13,81 g de acid salicilic se dizolvă în 500 ml metanol și se diluează într-un litru de apă) B. Procedura 1. Se cântăresc 2 până la 3 grame de PVPP într-un vas Erlenmeyer de 250 ml și se notează greutatea, W, cu o precizie de 0,001 g. 2. Se calculează extractul sec
jrc4756as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89922_a_90709]
-
magneziu 0,200 g Apă până la completarea volumului 1 000 ml pH 4,8 Mediu C Glucoză 5 g Triptonă difco 2 g Peptonă difco 5 g Extract de ficat 1 g Tween 80 0,05 g Suc de roșii diluat de 4,2 ori filtrat cu Whatman nr. 1 1 000 ml pH 5,5 ANEXA IX Determinarea pierderilor de materie organică din rășini schimbătoare de ioni (Art. 12 din prezentul regulament) 1. SCOPUL ȘI DOMENIUL DE APLICARE Metoda determină
jrc4756as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89922_a_90709]
-
Părți alicote din mediu (lichid de suprafață) provenind de la toate culturile/cupulele care constituie cultura primară se reunesc, în funcție de cultura de celule, la șapte sau zece zile de la inoculare. Amestecurile respective sunt apoi inoculate în culturile celulare omoloage, nediluate și diluate la 1:10 (dând diluții finale ale lichidului de suprafață de respectiv 1:10 și 1:100), după descrierea din partea I III 2. Se pot de asemenea inocula părți alicote de 10% din mediul care constituie cultura primară direct într-
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
fi identificat imediat. 2. Neutralizare Se elimină celulele din lichidul de suprafață colectat prin centrifugare (2000-4000 xg) sau prin filtrare cu un filtru cu membrană (0,45 μm) cu o membrană cu grad scăzut de absorbție a proteinelor, apoi se diluează lichidul de suprafață la 1/100 și 1:10 000 într-un mediu de cultură celulară. Se amestecă părți alicote din cele două diluții ale lichidului de suprafață și se incubează separat timp de 60 de minute la 15°C
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
acoperă cupulele din plăcile de microtitrare timp de o noapte cu diluțiile recomandate din fracțiuni de imunoglobuline purificate provenind din seruri de referință de calitate. Se clătesc cupulele cu un tampon PBS-Tween-20, se adaugă virusul ce urmează să fie identificat, diluat din doi în doi sau din patru în patru, și se lasă să reacționeze cu anticorpul captator timp de 60 de minute la 37°C. După clătirea cu tamponul PBS-Tween-20, se adaugă anticorpii biotinilați, al căror specific corespunde cu cel
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
printr-un filtru cu membrană (0,45 μg) (membrană cu grad redus de absorbție a proteinelor). II.3. Tratamentul lichidului de suprafață cu antiseruri de diagnostic Suspensia de organe tratată cu antibiotice sau trecută printr-un filtru cu membrană este diluată la 1:10 și la 1:1 000 într-un mediu de cultură celulară iar părți alicote se amestecă și se incubează timp de 60 de minute la 15°C cu părți egale din reactivii enumerați în partea I IV
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
pentru metabolismul substanței de testat). 1.4.1.5. Substanța de testat/prepararea Substanțele de testat în stare solidă ar trebui să se preparare sub formă de soluții sau suspensii în solvenții sau vehiculele corespunzătoare, care, dacă este cazul, se diluează înaintea tratamentului celulelor. Substanțele de testat lichide se pot adăuga direct în sistemele experimentale și/sau se diluează înainte de utilizare în tratamentul celulelor. Se recomandă utilizarea preparatelor proaspete de substanță de testat, cu excepția cazului în care există date care să
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
solidă ar trebui să se preparare sub formă de soluții sau suspensii în solvenții sau vehiculele corespunzătoare, care, dacă este cazul, se diluează înaintea tratamentului celulelor. Substanțele de testat lichide se pot adăuga direct în sistemele experimentale și/sau se diluează înainte de utilizare în tratamentul celulelor. Se recomandă utilizarea preparatelor proaspete de substanță de testat, cu excepția cazului în care există date care să demonstreze stabilitatea acestora în caz de păstrare. 1.4.2. Condițiile de testare 1.4.2.1. Solventul
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
la condițiile de laborator timp de minimum cinci zile. 1.4.1.4. Prepararea dozelor Substanțele de testat în stare solidă ar trebui să se preparare sub formă de soluții sau suspensii în solvenții sau vehiculele corespunzătoare și să se dilueze, dacă este cazul, înainte de a fi administrate animalelor. Substanțele de testat lichide se pot administra direct sau dilua înainte de administrare. Se recomandă utilizarea preparatelor proaspete de substanță de testat, cu excepția cazului în care există date care să demonstreze stabilitatea acestora
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
în stare solidă ar trebui să se preparare sub formă de soluții sau suspensii în solvenții sau vehiculele corespunzătoare și să se dilueze, dacă este cazul, înainte de a fi administrate animalelor. Substanțele de testat lichide se pot administra direct sau dilua înainte de administrare. Se recomandă utilizarea preparatelor proaspete de substanță de testat, cu excepția cazului în care există date care să demonstreze stabilitatea acestora în caz de păstrare. 1.4.2. Condițiile de testare 1.4.2.1. Solventul/vehiculul Solventul/vehiculul
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
efecte datorate amplasării acestora să fie reduse la minim. 1.4.1.4. Prepararea dozelor Substanțele de testat în stare solidă ar trebui să se preparare sub formă de soluții sau suspensii în solvenții sau vehiculele corespunzătoare și să se dilueze, dacă este cazul, înainte de a fi administrate animalelor. Substanțele de testat lichide se pot administra direct sau dilua înainte de administrare. Se recomandă utilizarea preparatelor proaspete de substanță de testat, cu excepția cazului în care există date care să demonstreze stabilitatea acestora
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]