3,282 matches
-
acest sens, plecând de la prediluții (1:2,5), se prelevă 0,025 ml din fiecare ser și se transferă pe o placă ce conține 0,025 ml de diluant. Astfel, prima diluție se aduce la valoarea de 1:5, iar diluțiile următoare se efectuează prin dublare; c) adăugare de antigen: se adaugă în fiecare capsulă ce conține diferitele diluții de ser supus examinării câte 0,025 ml de antigen. După agitare timp de 30 de secunde, fiecare placă este închisă cu
jrc3321as1997 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88478_a_89265]
-
transferă pe o placă ce conține 0,025 ml de diluant. Astfel, prima diluție se aduce la valoarea de 1:5, iar diluțiile următoare se efectuează prin dublare; c) adăugare de antigen: se adaugă în fiecare capsulă ce conține diferitele diluții de ser supus examinării câte 0,025 ml de antigen. După agitare timp de 30 de secunde, fiecare placă este închisă cu capacul său și este ținută la 37oC timp de douăzeci-douăzeci și patru de ore în atmosferă umedă; d
jrc3321as1997 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88478_a_89265]
-
examinate, prepararea reactivilor și spălare; i) un sistem de citire corespunzător substratului utilizat. 2. Testul de standardizare și sensibilitate: 1) Eșantioanele colective de lapte sunt declarate negative dacă dau o reacție mai mică de 50% din cea dată de o diluție de 1 la 10 000 a celui de-al doilea ser internațional standard de bruceloză, obținut la un lapte negativ. 2) Eșantioanele individuale de ser sunt declarate negative dacă dau o reacție mai mică de 10% din cea dată de
jrc3321as1997 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88478_a_89265]
-
1 la 10 000 a celui de-al doilea ser internațional standard de bruceloză, obținut la un lapte negativ. 2) Eșantioanele individuale de ser sunt declarate negative dacă dau o reacție mai mică de 10% din cea dată de o diluție de 1 la 200 a celui de-al doilea ser internațional standard de bruceloză, obținut într-o soluție salină sau orice altă diluție recunoscută, conform procedurii prevăzute în art. 17, după avizul Comitetului științific veterinar. Standardele ELISA pentru bruceloză sunt
jrc3321as1997 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88478_a_89265]
-
ser sunt declarate negative dacă dau o reacție mai mică de 10% din cea dată de o diluție de 1 la 200 a celui de-al doilea ser internațional standard de bruceloză, obținut într-o soluție salină sau orice altă diluție recunoscută, conform procedurii prevăzute în art. 17, după avizul Comitetului științific veterinar. Standardele ELISA pentru bruceloză sunt specificate în pct. A 1 și 2 (trebuie utilizate pentru diluțiile care figurează pe etichetă). 3. Condițiile de utilizare a testului ELISA pentru
jrc3321as1997 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88478_a_89265]
-
internațional standard de bruceloză, obținut într-o soluție salină sau orice altă diluție recunoscută, conform procedurii prevăzute în art. 17, după avizul Comitetului științific veterinar. Standardele ELISA pentru bruceloză sunt specificate în pct. A 1 și 2 (trebuie utilizate pentru diluțiile care figurează pe etichetă). 3. Condițiile de utilizare a testului ELISA pentru studiul brucelozei bovine Metoda ELISA poate fi utilizată pentru un eșantion de lapte sau de zer de lapte colectat dintr-o exploatație care deține în proporție de cel
jrc3321as1997 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88478_a_89265]
-
cavitatea B = antigen care trebuie testat diluat la 1/2, cavitatea C = antigen care trebuie testat diluate la 1/4, cavitatea D = antigen care trebuie testat diluat la 1/8. Instrucțiuni complementare 1. Experimentul trebuie efectuat cu două grade de diluție a serului (1:5 și 1:10) pentru a obține precipitarea optimă. 2. Dacă diametrul de precipitare este prea mic pentru fiecare din cele două grade de diluție, serul va face obiectul unei diluții suplimentare. 3. Dacă diametrul de precipitare
jrc3321as1997 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88478_a_89265]
-
1/8. Instrucțiuni complementare 1. Experimentul trebuie efectuat cu două grade de diluție a serului (1:5 și 1:10) pentru a obține precipitarea optimă. 2. Dacă diametrul de precipitare este prea mic pentru fiecare din cele două grade de diluție, serul va face obiectul unei diluții suplimentare. 3. Dacă diametrul de precipitare este prea mare pentru cele două grade de diluție și dacă precipitatul dispare, trebuie ales un grad de diluție mai scăzut pentru ser. 4. Concentrația finală a gelozei
jrc3321as1997 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88478_a_89265]
-
trebuie efectuat cu două grade de diluție a serului (1:5 și 1:10) pentru a obține precipitarea optimă. 2. Dacă diametrul de precipitare este prea mic pentru fiecare din cele două grade de diluție, serul va face obiectul unei diluții suplimentare. 3. Dacă diametrul de precipitare este prea mare pentru cele două grade de diluție și dacă precipitatul dispare, trebuie ales un grad de diluție mai scăzut pentru ser. 4. Concentrația finală a gelozei trebuie să fie de 0,8
jrc3321as1997 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88478_a_89265]
-
a obține precipitarea optimă. 2. Dacă diametrul de precipitare este prea mic pentru fiecare din cele două grade de diluție, serul va face obiectul unei diluții suplimentare. 3. Dacă diametrul de precipitare este prea mare pentru cele două grade de diluție și dacă precipitatul dispare, trebuie ales un grad de diluție mai scăzut pentru ser. 4. Concentrația finală a gelozei trebuie să fie de 0,8%, iar cea a serului de 5%, respectiv 10%. 5. Se notează diametrele măsurate în sistemul
jrc3321as1997 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88478_a_89265]
-
prea mic pentru fiecare din cele două grade de diluție, serul va face obiectul unei diluții suplimentare. 3. Dacă diametrul de precipitare este prea mare pentru cele două grade de diluție și dacă precipitatul dispare, trebuie ales un grad de diluție mai scăzut pentru ser. 4. Concentrația finală a gelozei trebuie să fie de 0,8%, iar cea a serului de 5%, respectiv 10%. 5. Se notează diametrele măsurate în sistemul de coordonate următor. Diluția de lucru este cea în care
jrc3321as1997 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88478_a_89265]
-
dispare, trebuie ales un grad de diluție mai scăzut pentru ser. 4. Concentrația finală a gelozei trebuie să fie de 0,8%, iar cea a serului de 5%, respectiv 10%. 5. Se notează diametrele măsurate în sistemul de coordonate următor. Diluția de lucru este cea în care se înregistrează același diametru pentru antigenul care trebuie testat și pentru antigenul de referință. C. Teste de imunoadsorbție cu anticorpi marcați enzimatic (ELISA) pentru studiul leucozei bovine enzootice 1. Se utilizează următoarele materiale și
jrc3321as1997 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88478_a_89265]
-
testului Sensibilitatea testului ELISA trebuie să fie la un astfel de nivel încât serul E4 să prezinte o reacție pozitivă când este diluat de 10 ori (eșantioane de ser) sau de 250 de ori (eșantioane de lapte) mai mult decât diluția obținută de la eșantioane puse în comun. La testele în care probele (seruri și lapte) sunt examinate individual, serul E4 diluat la 1:10 (ser negativ) sau la 1:250 (lapte negativ) trebuie să prezinte o reacție pozitivă când este examinat
jrc3321as1997 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88478_a_89265]
-
eșantioane puse în comun. La testele în care probele (seruri și lapte) sunt examinate individual, serul E4 diluat la 1:10 (ser negativ) sau la 1:250 (lapte negativ) trebuie să prezinte o reacție pozitivă când este examinat în aceeași diluție de testare ca cea utilizată pentru testele individuale. Institutele oficiale indicate la pct. A.2. vor fi responsabile de controlul calității metodei ELISA, în special pentru a determina, pentru fiecare lot de producție, numărul de eșantioane de pus în comun
jrc3321as1997 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88478_a_89265]
-
se realizează prin înclinare și prin observarea prezenței sau absenței dârelor în formă de sfârc la același nivel ca și în cazul godeurilor martor care conțin numai RBCs (0,025 ml) și PBS (0,05 ml). (i) Titrul IH reprezintă diluția cea mai mare a antiserului care produce inhibarea completă a patru sau opt unități de virus (este necesar să se includă în fiecare test o titrare HA pentru confirmarea prezenței HAU). (j) Valabilitatea rezultatelor depinde de obținerea unui titru mai
jrc2401as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87555_a_88342]
-
fiecare test o titrare HA pentru confirmarea prezenței HAU). (j) Valabilitatea rezultatelor depinde de obținerea unui titru mai mic de 2³ pentru patru HAU sau 2² pentru opt HAU cu serul martor negativ și un titru cuprins într-o singură diluție a titrului cunoscut al serului martor pozitiv. 3. Interpretarea testelor Antigenul utilizat va influența nivelul la care un ser este considerat pozitiv: - pentru patru HAU un ser pozitiv este orice ser care prezintă un titru de 2² sau mai mare
jrc2401as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87555_a_88342]
-
LIMBII ALBASTRE PRIN FOLOSIREA ANTICORPULUI MONOCLONAL 3-17-A3 Testul depistează anticorpii formați pentru toate serotipurile cunoscute ale virusului bolii limbii albastre (VBLA). Principiul testului constă în întreruperea reacției între antigenul VBLA și un anticorp monoclonal specific de grup (3-17-A3) prin adăugarea diluțiilor serului de testare. Anticorpii VBLA prezenți în serul de testare blochează reacția anticorpului monoclonal (ACM) și determină reducerea dezvoltării scontate a culorii la adăugarea substratului enzimatic. MATERIALE ȘI REACTIVI 1. Plăci de microtitrare cu fundul plat. 2. Antigenul: se prepară
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
constă din antigenul VBLA, anticorpul monoclonal și conjugatul. Acesta reprezintă un martor negativ. Media citirilor densității optice de pe acest rând martor reprezintă valoarea de inhibare 0%. Martor pozitiv Rândul 3 A- H este martorul pozitiv. Acesta constă din antigen VBLA, diluții de antiser pozitiv VBLA, ACM și conjugat. Este inclus ca indicator pentru funcționarea corespunzătoare a testului și, de la un test la altul, ar trebui să se obțină niveluri similare de inhibiție. Serurile de testare În formatul de testare prezentat mai
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
indicator pentru funcționarea corespunzătoare a testului și, de la un test la altul, ar trebui să se obțină niveluri similare de inhibiție. Serurile de testare În formatul de testare prezentat mai sus pot fi testate 18 seruri, la o rată de diluție de 1/2, 1/4, 1/8 și 1/16. Aceasta oferă unele indicii asupra titrului anticorpului din serurile de testare. Plaja de diluare ar putea fi extinsă ulterior pentru obținerea de titruri de punct final de diluție serică. Alternativ
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
rată de diluție de 1/2, 1/4, 1/8 și 1/16. Aceasta oferă unele indicii asupra titrului anticorpului din serurile de testare. Plaja de diluare ar putea fi extinsă ulterior pentru obținerea de titruri de punct final de diluție serică. Alternativ, pentru studiile serologice pe scară largă, serurile pot fi testate la o singură diluție (1/4) sau la două diluții (1/2 și 1/4) ca test de screening rapid. PROCEDURA 1. Diluați antigenul VBLA la concentrația pre-titrată
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
indicii asupra titrului anticorpului din serurile de testare. Plaja de diluare ar putea fi extinsă ulterior pentru obținerea de titruri de punct final de diluție serică. Alternativ, pentru studiile serologice pe scară largă, serurile pot fi testate la o singură diluție (1/4) sau la două diluții (1/2 și 1/4) ca test de screening rapid. PROCEDURA 1. Diluați antigenul VBLA la concentrația pre-titrată în PBS, sonicați scurt pentru dispersarea virusului agregat (dacă nu aveți sonicator, pipetați cu putere) și
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
de testare. Plaja de diluare ar putea fi extinsă ulterior pentru obținerea de titruri de punct final de diluție serică. Alternativ, pentru studiile serologice pe scară largă, serurile pot fi testate la o singură diluție (1/4) sau la două diluții (1/2 și 1/4) ca test de screening rapid. PROCEDURA 1. Diluați antigenul VBLA la concentrația pre-titrată în PBS, sonicați scurt pentru dispersarea virusului agregat (dacă nu aveți sonicator, pipetați cu putere) și adăugați 50 μl în toate godeurile
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
și serul pozitiv în godeurile corespunzătoare și diluați de-a lungul plăcii utilizând o pipetă multi-canal. Nu adăugați ser la martorul orb sau la martorul ACM. 4. Imediat după adăugarea serurilor de testare, diluați ACM în tamponul de blocare (la diluția pre-titrată) și adăugați 50 μl în toate godeurile plăcii, cu excepția martorului orb. 5. Incubați la 37ș C timp de 60 de minute pe un agitator orbital. Spălați de trei ori cu PBS și uscați. 6. Diluați concentratul de globulină de
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
Calculați media citirii OD din martorii AMC. Aceasta reprezintă valoarea de inhibiție 0%. Citirea densităților optice din serurile de testare se exprimă ca valoare de inhibiție procentuală, utilizându-se următoarea formulă: Valorile de inhibiție mai mari de 40% la o diluție a serului de 1/4 sunt considerate pozitive. Citirea vizuală este posibilă deoarece o inhibiție de 40% este valoarea cea mai scăzută perceptibilă cu ochiul. PREPARAREA ANTIGENULUI ELISA VBLA 1. Spălați 10 șiruri de celule confluente BHK-21 de trei ori
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
un rotor SW 28. 11. Aruncați supernatantul, scurgeți tuburile minuțios și resuspendați peleta în PBS prin sonicare. Stocați antigenul în alicoți la -70ș C. TITRAREA ANTIGENULUI ELISA VBLA Antigenul Elisa la boala limbii albastre se titrează cu testul Elisa indirect. Diluții duble de antigen se titrează față de o diluție constantă (1/50) cu anticorp monoclonal 3-17-A3. Protocolul este următorul: PROCEDURA 1. Diluați antigen VBLA în PBS pe placa de microtitrare într-o serie de diluție dublă (50 μl/godeu) utilizând o
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]