359 matches
-
2 000 rpm și se decantează imediat. Soluția decantată se lasă să se răcească la temperatura camerei. Se pipetează 5 ml din soluția decantată într-un balon cotat de 100 ml și se completează cu apă. Se filtrează o parte alicotă printr-o membrană microfiltrantă (3.3). Filtratul este gata pentru determinarea HPLC. 5.3. Calibrare Se pipetează 5 ml de soluție standard de vanilină (4.5.2) într-un balon cotat de 100 ml. Se adaugă 5 ml de soluție
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
de unt concentrat, (sau grăsime extrasă din unt (5.1.2)), (mg). Se transferă cantitativ într-un balon cotat de 20 ml (Vml), folosindu-se ligroină (4.2), se completează până la marcaj și se amestecă bine. Se transferă o parte alicotă într-o celulă de 1 cm și se măsoară absorbanța la 440 nm, față de o probă martor de ligroină. Concentrația de ester apo carotenic în soluție se determină conform curbei de etalonare (C μg/ml). 5.3. Curba de etalonare
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
apoi cu 250 ml de eter dietilic (4.4). Se agită puternic conducta de decantare timp de 2 minute și se lasă fazele să se separe. Se elimină faza apoasă inferioară și se spală faza eterică agitându-se 4 părți alicote succesive de 100 ml apă. Observația 2: Pentru a evita formarea unei emulsii, este neapărat necesar ca primele două spălări cu apă să se efectueze ușor (10 rotații). Pentru a treia spălare, se poate agita mai puternic timp de 30
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
1. Se transferă soluția de eter rămasă în balon într-o eprubetă de reacție de 2 ml (3.7) cu ajutorul a 2 ml de dietil eter și se elimină eterul sub flux de azot. Se spală balonul cu două părți alicote suplimentare de 2 ml de eter dietilic, transferându-se conținutul în eprubetă și eliminându-se eterul de fiecare dată sub flux de azot. 5.3.2. Se sililează proba prin adăugarea a 1 ml de TRI-SIL (4.6). Se astupă
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
rezultată în 250 mililitri de apă distilata. Se agită din când în când. După 30 de minute se adaugă 0,5-1 grame de hidroxid de aluminiu. Se agită pentru câteva minute. Se filtrează. Modul de lucru: se ia o parte alicota de acid concentrat prin evaporare, care corespunde la aproximativ 10 miligrame de K(2)O. Se diluează până la aproximativ 100 mililitri. Se adaugă încet soluția de reactiv, aproximativ 10 mililitri, echivalentul a 5 miligrame estimate de K(2)O, sub
EUR-Lex () [Corola-website/Law/166290_a_167619]
-
ml tampon concentrat (apendicele 4). Se folosesc 500 f2μl pentru a testa Ralstonia solanacearum, 500 μl pentru Clavibacter michiganensis subsp. sepedonicus și 500 f2μl pentru referință. Se adaugă glicerol steril la concentrația finală de 10-25 % (volum) la 500 f2μl de alicote de referință și la alicota de testare rămasă, se omogenizează în vortex și se depozitează la o temperatură situată între - 16 și - 24°C (săptămâni) sau între - 68 și - 86°C (luni). Alicotele de testare se păstrează în timpul testelor la
EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
Se folosesc 500 f2μl pentru a testa Ralstonia solanacearum, 500 μl pentru Clavibacter michiganensis subsp. sepedonicus și 500 f2μl pentru referință. Se adaugă glicerol steril la concentrația finală de 10-25 % (volum) la 500 f2μl de alicote de referință și la alicota de testare rămasă, se omogenizează în vortex și se depozitează la o temperatură situată între - 16 și - 24°C (săptămâni) sau între - 68 și - 86°C (luni). Alicotele de testare se păstrează în timpul testelor la o temperatură de 4-10°C.
EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
de 10-25 % (volum) la 500 f2μl de alicote de referință și la alicota de testare rămasă, se omogenizează în vortex și se depozitează la o temperatură situată între - 16 și - 24°C (săptămâni) sau între - 68 și - 86°C (luni). Alicotele de testare se păstrează în timpul testelor la o temperatură de 4-10°C. Nu se recomandă congelările și decongelările repetate. În cazul în care extractele trebuie transportate, livrarea trebuie efectuată într-o geantă frigorifică în termen de 24 de ore. 1
EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
cazul în care este posibil, ar trebui să se folosească drept control similar pe aceeași lamă țesut infectat în mod natural (conservat prin liofilizare sau congelare la o temperatură între - 16 și - 24°C). În calitate de control negativ, se pot folosi alicote de extracte de probe care au dat rezultate negative la testele anterioare de detecție a bacteriei Ralstonia solanacearum. Materialele de control pozitiv și negativ standardizate disponibile pentru acest test sunt prevăzute în apendicele 3. Se folosesc pentru microscop lame cu
EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
ADN. Următoarele controale negative ar trebui incluse în testul PCR: - extractul probei care a produs anterior rezultate negative pentru depistarea Ralstonia solanacearum; - tampoanele utilizate pentru extracția ADN din probă; - amestecul de reactivi pentru PCR. Următoarele controale pozitive ar trebui incluse: - alicote de sedimente resuspendate la care s-a adăugat Ralstonia solanacearum (preparare: vezi apendice 3 B); - suspensie de 10^6 celule pe ml dintr-un izolat virulent de Ralstonia solanacearum în apă (de exemplu, NCPPB 4156 = PD 2762 = CFBP 3857; vezi
EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
aplice procedura descrisă în continuare extractelor de probe proaspăt preparate, dar se pot folosi și extracte de probe conservate la temperaturi cuprinse între - 16°C și - 24°C sau între - 68°C și - 86° C. Drept control negativ, se folosesc alicote de extracte de probe care au dat anterior rezultate negative la testele de identificare a Ralstonia solanacearum. Drept control pozitiv, se folosesc suspensii conținând 10^5-10^6 celule pe ml de Ralstonia solanacearum biovar 2 (de exemplu, tulpina NCPPB 4156
EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
negativ standardizate, disponibile pentru utilizare în acest test, sunt enumerate în apendicele 3 A. Materialul de control se testează în același mod cu probele. Au fost validate două protocoale ELISA: a) ELISA indirect (Robinson-Smith et al., 1995) ... (1) Se folosesc alicote de 100-200 f2μl de sediment resuspendat. (Pentru a reduce rezultatele nespecifice se încălzesc timp de 4 minute la 100°C pe baie de apă sau într-un bloc de încălzire.) ... (2) Se adaugă un volum egal de tampon 2X (apendicele
EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
rezultatele nespecifice se încălzesc timp de 4 minute la 100°C pe baie de apă sau într-un bloc de încălzire.) ... (2) Se adaugă un volum egal de tampon 2X (apendicele 4) și se omogenizează prin vortexare. (3) Se pipetează alicote de 100 f2μl de extract în cel puțin două godeuri ale plăcii de microtitrare (de exemplu, Nunc-Polysorp sau echivalent) și se incubează o oră la 37°C sau peste noapte la 4°C. ... (4) Se îndepărtează extractele din godeuri. Se
EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
se omogenizează prin vortexare. Se realizează diluții zecimale în următoarele 5 microfiole. Cele 6 microfiole contaminate vor fi utilizate drept control pozitiv. Cele 4 microfiole necontaminate se vor folosi în calitate de control negativ. Se etichetează microfiolele în mod corespunzător. Se prepară alicote de 100 f2μl în microfiole sterile de 1,5 ml pentru a obține 9 replici din fiecare control. Se conservă la - 16 și - 24°C până la utilizare. Prezența și concentrația de celule de Ralstonia solanacearum în control trebuie confirmate în
EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
13.3.6.2 un test de seroneutralizare pentru depistarea arteritei virale ecvine, cu rezultat negativ la diluția de 1 la 4 sau un test de izolare a virusului pentru depistarea arteritei virale ecvine, cu rezultat negativ pe o parte alicotă din cantitatea totală de material seminal. 13.3.6.3. un test de depistare a metritei contagioase ecvine, efectuat în două reprize, la un interval de șapte zile prin izolarea Telorella equigenitalis din lichidul preejaculator sau dintr-o probă de
jrc2679as1995 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87833_a_88620]
-
corespunzător). Dacă, dintr-un motiv oarecare, congelarea începe înainte sau după intervalul de temperatură indicat, se oprește analiza și se reîncepe cu o altă probă de lapte. Dacă și noua probă se congelează înainte de temperatura indicată, se încălzește o fracțiune alicotă din laptele supus analizei la 45șC și se menține la această temperatură timp de cinci minute, pentru a permite topirea substanței grase cristaline. Se răcește apoi până la temperatura de testare și se trece imediat la o nouă analiză. Temperatura laptelui
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
exact 10 minute. Se omogenizează și se filtrează printr-un filtru uscat. Se urmărește procedura indicată la pct. 5.3. 5.5. Curba de calibrare Se așează 1,0, 2,0, 3,0, 4,0 și 5,0 ml părți alicote ale soluției de tirozină standard (3.8.), corespunzând respectiv la 0,2, 0,4, 0,6, 0,8 și 1,0 μmoli de tirozină în baloane Erlenmayer de 50 ml. Se completează seria cu o soluție de referință fără tirozină
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
rpm. 4.2. Spectrofotometru. 5. Procedură 5.1. Proba de testare Cantitatea de probă de testare folosită depinde de conținutul presupus de gossypol al probei. Este de preferat să se lucreze cu o probă de testare mică și o parte alicotă destul de mare de filtrat, pentru a obține suficient gossypol pentru ca să fie posibilă măsurarea fotometrică precisă. Pentru determinarea gossypolului liber în semințe de bumbac, făină din semințe de bumbac și turta de semințe de bumbac, proba de testare nu ar trebui
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
determinarea gossypolului liber în semințe de bumbac, făină din semințe de bumbac și turta de semințe de bumbac, proba de testare nu ar trebui să depășească 1 g, iar pentru furajele compuse, ar putea fi de 5 g. O parte alicotă de 10 ml de filtrat este potrivită în majoritatea cazurilor; ar trebui să conțină între 50 și 100 μg de gossypol. Pentru determinarea gossypolului total, proba de testare ar trebui să fie între 0,5 și 5 g, astfel o
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
10 ml de filtrat este potrivită în majoritatea cazurilor; ar trebui să conțină între 50 și 100 μg de gossypol. Pentru determinarea gossypolului total, proba de testare ar trebui să fie între 0,5 și 5 g, astfel o parte alicotă a filtratului conține între 40 și 200 μg de gossypol. Analiza ar trebui făcută la o temperatură a camerei de aproximativ 20ș C. 5.2. Determinarea gossypolului liber Se plasează proba test într-un balon cu gât din sticlă șlefuită
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
amestecă pentru o oră în mixer. Se filtrează printr-un filtru uscat și se colectează filtratul într-un balon mic cu gât din sticlă șlefuită. În timpul filtrării, se acoperă balonul cu o sticlă de ceasornic. Se pun cu pipeta părți alicote identice de filtrat conținând 50 - 100 μg de gossypol în fiecare din cele două baloane gradate de 25 ml (A și B). Dacă este necesar, se completează volumul până la 10 ml cu solvent A (3.2). Apoi se completează conținutul
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
următoarele: gossypol liber: gossypol total: Conținutul de gossypol liber sau gossypol total al probei este calculat folosind următoarea formulă: % gossypol = unde: E = densitatea optică corectă, determinată cum este indicat la pct. 5.2; p = proba test în g; a = partea alicotă a filtratului în ml. 6.2. Din curba de calibrare 6.2.1. Gossypolul liber Se prepară 2 serii a câte cinci baloane gradate de 25 ml. Se pun cu pipeta părți alicote de 2,0, 4,0, 6,0
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
p = proba test în g; a = partea alicotă a filtratului în ml. 6.2. Din curba de calibrare 6.2.1. Gossypolul liber Se prepară 2 serii a câte cinci baloane gradate de 25 ml. Se pun cu pipeta părți alicote de 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 și 10,0 ml de soluție de gossypol standard A (3.5) în fiecare serie de baloane. Se completează volumele până la 10 ml cu solventul A. Se completează fiecare serie cu
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
amestec (4.9). Se agită 30 minute pe o platformă de agitare. pH-ul trebuie să rămână sub 3 în timpul extracției; dacă este necesar, se reajustează la pH 3 (folosind 10 % acid acetic pentru compușii minerali). Se ia o parte alicotă a extrasului și se ajustează pH-ul la 5,5 folosind soluția tampon de fosfat, pH 8 (4.4) în prezența verdelui de bromocrezol (care se transformă din galben în albastru). Se diluează, folosind soluția tampon de fosfat, pH 5
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
o probă de testat de 2 - 10 g, în funcție de conținutul de oleandomicină presupus al probei, se adaugă 100 ml din soluție (4.7) și se agită 30 de minute pe o platformă de agitare. Se centrifughează, se ia o parte alicotă din extract și se diluează cu soluția (4.6) pentru a obține o concentrație presupusă de oleandomicină de 0,1 μg pe ml (= U2). Apoi se prepară concentrațiile U4, U2 și U1, prin diluări (1 + 1) folosind soluția (4.6
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]