593 matches
-
s-a folosit ca matriță ARNm integral sau doar un fragment de ARNm (jumătatea 3’ a ARNm) ce poartă mesajul genetic parțial și anume acela pentru regiunea carboxil a catenei Ig. În cazul analizei ADN embrionar, marcajul radioactiv asociat prin hibridizare moleculară restrictelor BamHI ale acestui ADN, a putut fi identificat în două asemenea fragmente de ADN genomic (restricte) distincte (fig. 3.3). Astfel, marcajul pentru regiunea V a apărut într-un fragment ADN cu GM = 3,9 106, pe când marcajul
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
un număr corespunzător de introni. Fiecare exon codifică pentru un anumit domeniu structural al catenei grele imunoglobulinice. Secvențierea completă a catenelor imunoglobulinice umane a permis evidențierea unor poziții invariante în treimile N și C-terminale ale catenelor grele. Datele de hibridizare moleculară ADN-ADN și ADN-ARN atestă absența secvențelor repetitive la nivelul segmentelor genice imunoglobulinice, dar susțin implicarea fenomenului de duplicație genică. 76 Cap. 3. Informația genetică pentru imunoglobuline Experiențele de hibridizare moleculară au dovedit că în celulele embrionare, segmentele genice pentru
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
treimile N și C-terminale ale catenelor grele. Datele de hibridizare moleculară ADN-ADN și ADN-ARN atestă absența secvențelor repetitive la nivelul segmentelor genice imunoglobulinice, dar susțin implicarea fenomenului de duplicație genică. 76 Cap. 3. Informația genetică pentru imunoglobuline Experiențele de hibridizare moleculară au dovedit că în celulele embrionare, segmentele genice pentru regiunea variabilă sunt localizate la distanță mare față de segmentele genice pentru regiunea constantă a catenei imunoglobulinice. Dimpotrivă, în limfocitele mature, segmentul genic VK este localizat în același fragment de restricție
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
complet absent dintr-o linie celulară materialul genetic aflat între segmentele recombinatorii V și C. Un asemenea pattern se explică cel mai ușor admițând realizarea unor deleții independente în fiecare cromozom. Atunci când cei doi cromozomi nu prezintă un pattern de hibridizare caracteristic liniei germinale, se consideră că numai într-unul dintre ei s-a produs un rearanjament funcțional, generând o genă activă pentru catena imunoglobulinică, pe când în celălalt s-a realizat un rearanjament neproductiv de segmente genice imunoglobulinice. Un asemenea rearanjament
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
după îndepărtarea carbohidraților N-lincați, în ambele cazuri, rămâne un miez proteinic de 32 kDa. Autorii au constatat un nivel semnificativ mai înalt de expresie FcAR la eozinofilele persoanelor alergice, față de persoanele sănătoase, nu însă și în cazul neutrofilelor. Prin tehnica hibridizării moleculare in situ, Grundy și colaboratorii (1989) și apoi Le Conia și colaboratorii (1990) au cartat gena FCGR3 (CD16) în 1q23. Receptorul FcγIII este codificat de două gene separate, una pentru receptorul de pe neutrofile, desemnat și CD16 (FCGR3A) și alta
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
au demonstrat că într-o linie celulară care avea originea într-un copil afectat de leucemie limfoblastică acută cu celule T și la care a fost identificată o translocație t (11;14) (p15;q11), gena TCRA a fost fracturată. Aplicând hibridizarea cromozomală in situ și analiza moleculară de Southern blot, acești autori au putut stabili că punctul de rupere din cromozomul 14 a fost la nivelul locusului TCRA într-o regiune aflată între segmentele genice variabile și cele constante. Kagan și
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
față de o boală a gazdei receptoare, deși, pentru moment, importanța împerecherii alelelor la alți loci genici nu este clară. Odată cu izolarea și identificarea genelor HLA, a devenit posibilă utilizarea tehnicilor de analiză a ADN în tipajul HLA printre care sunt: hibridizarea probei oligonucleotidice cu specificitate de secvență (SSOPH), reacția de polimerizare în lanț (PCR), analiza polimorfismelor de lungime a fragmentelor de restricție (RFLP), primarea cu specificitate de secvență (SSP), sistemul mutațional refractar alelic (ARMS), secvențierea ADN, polimorfism conformațional cu specificitate de
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
de alele. Atunci când nu poate fi identificată o secvență unică se impune utilizarea mai multor oligonucleotide diferite în definirea unei alele specifice HLA. Acest lucru este valabil pentru tiparea alelelor DPB1 care adesea prezintă secvențe regionale comune. În reacția de hibridizare cu ADN amplificat atașat la un suport solid este utilizat un set de oligonucleotide capabile de identificare a fiecărei alele potențiale sau a unui subset de alele potențiale. Condițiile de hibridizare sunt ajustate în așa fel încât fiecare oligonucleotid se
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
care adesea prezintă secvențe regionale comune. În reacția de hibridizare cu ADN amplificat atașat la un suport solid este utilizat un set de oligonucleotide capabile de identificare a fiecărei alele potențiale sau a unui subset de alele potențiale. Condițiile de hibridizare sunt ajustate în așa fel încât fiecare oligonucleotid se va asocia doar cu alele HLA care au o secvență strict complementară probei oligonucleotidice. Oligonucleotidele sunt marcate cu radioizotopi sau cu o etichetă moleculară de detecție neradioactivă. După vizualizare, pattern-ul
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
ajustate în așa fel încât fiecare oligonucleotid se va asocia doar cu alele HLA care au o secvență strict complementară probei oligonucleotidice. Oligonucleotidele sunt marcate cu radioizotopi sau cu o etichetă moleculară de detecție neradioactivă. După vizualizare, pattern-ul de hibridizare poate fi citit în vederea determinării alelelor de interes. Metoda SSOP este adesea utilizată în situațiile în care sunt tipate multe probe, în baterii mari. Modificările de convertire a acesteia pentru procedura în care se utilizează formatul mic al unei camere
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
de primeri marcați cu biotină. ADN amplificat este apoi hibridizat cu probele imobilizate care conțin secvențe complementare secvențelor găsite în alelele potențial prezente din ADN analizat. După vizualizare cu folosirea unui sistem de de-tecție legat la avidină, pattern-ul de hibridizare este utilizat pentru determinarea alelelor prezente. Această metodă este utilă în tiparea oricărui număr de probe, existând kit-uri comerciale pentru aplicarea ei. 12.1. APLICAREA ANALIZEI RFLP Dacă două alele diferă pentru o anumită secvență de nucleotide, fragmentul ADN
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
acelea care prezintă nepotriviri, oricât de mici ar fi acestea. Modificarea condițiilor de realizare a reacției de reasociere poate să conducă la o primare nespecifică în cursul reacțiilor de sinteză din cadrul amplificării prin PCR și al secvențierii ADN, precum și la hibridizarea nespecifică a probelor (Gao și colab., 1990; Molkentin și colab., 1991; Allen și colab, 1994). Specificitatea poate fi însă monitorizată prin utilizarea unui ADN de referință care poartă alele HLA bine definite. Un aspect deosebit de important în realizarea tipajului HLA
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
că în mod normal locusul genic pentru catena globinică α este un locus duplicat, astfel că un individ normal poartă patru gene α, două în cromozomul matern și două în cromozomul patern. Numărul de gene α poate fi stabilit prin hibridizarea ADN radioactiv la ADN celular izolat de la indivizi normali și de la pacienți cu diferite tipuri de deleții ale genei Hbα. Proba radioactivă de ADN se obține prin utilizarea ca matriță de către reverstranscriptază, a unui ARNm normal, purtător al mesajului genetic
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
Monocatena radioactivă ADN este un cADN care, trecut în stare bicatenară, reprezintă gena pentru catena α a hemoglobinei. Monocatena poate fi utilizată pentru a forma un hibrid dublu-catenar cu secvența corespunzătoare a ADN celular ce reprezintă gena α-globinei, utilizând tehnica hibridizării moleculare „in situ” sau hibridare in vitro cu restricte ADN fixate ca monocatene pe un filtru de nitroceluloză. Dacă gena α-globinei va fi deletată sau absentă din ADN celular, hibridizarea moleculară nu va avea loc. Pe această cale se poate
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
corespunzătoare a ADN celular ce reprezintă gena α-globinei, utilizând tehnica hibridizării moleculare „in situ” sau hibridare in vitro cu restricte ADN fixate ca monocatene pe un filtru de nitroceluloză. Dacă gena α-globinei va fi deletată sau absentă din ADN celular, hibridizarea moleculară nu va avea loc. Pe această cale se poate determina numărul de gene Hbα deletate. Sunt descrise fenotipuri distincte simptomatologic determinate de deleția uneia, a două, a trei și a tuturor celor patru gene Hbα. Absența unei singure copii
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
de subunități ale celor patru catene γ (Hbγ4 sau Hb Barts). HbH se formează din cauza deficienței catenelor Hbα, dar sinteza catenei Hbβ este normală. Talasemia α poate fi ocazional asociată cu un număr intact de gene Hbα, după cum rezultă din hibridizarea moleculară. Mecanismele genetice ar putea fi similare cu cele din β-talasemii care nu sunt asociate cu deleția genică. Mutanta de terminare a genei Hbα care apare în cazul sintezei hemoglobinei Constant Spring (HbCoSp) determină o blocare semnificativă a sintezei hemoglobinei
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
la nivelul unui singur restrict. Se va deduce astfel că genele pentru globine sunt prezente în toate celulele organismului uman, dar sunt active (transcrise și traduse) doar în precursorii eritrocitari. Pentru localizarea cromozomală a genelor pentru globine se utilizează tehnica hibridizării „in situ”. Preparatele cu cromozomi metafazici sunt introduse într-un mediu de incubare, pentru denaturarea termică a dublului helix ADN, de la nivelul fiecărei cromatide. După denaturarea termică, se adaugă proba radioactivă, fie sub formă de ADNc monocatenar revers-transcris și marcat
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
este discret, se ferește să se demaște, refuză intimitatea confesiunii. El are o imaginație sănătoasă și se baricadează în spatele ei. Autorul spune pe jumătate (tradiție deschisă de Henry James), lectorul ghicește ce poate, și opera lasă gustul amar-dulce al neîncheierii. Hibridizarea Amestecul de genuri literare a fost născocirea Fluxului conștiinței, la începutul secolului XX, marea inovație a lui James Joyce, Virginia Woolf și T.S. Eliot, împreună cu textul livresc. Autorul Desperado merge pe drumul deschis de moderniști: el scrie roman poematic și
Literatura contemporană britanică: literatura Desperado by LIDIA VIANU [Corola-publishinghouse/Science/982_a_2490]
-
tipar, acela al cronologiei, al cuplului care trăiește (ne)fericit până la adânci bătrâneți. Cuplul și finalul cert sunt două convenții demodate și tocite. Iată cum ajung autorii Desperado să sfideze ficțiunea tradițională din temelie. Sfidarea lor e mai profundă decât hibridizarea genurilor literare practicată de Fluxul conștiinței. Joyce, Woolf, Eliot au jonglat cu convențiile, păstrându-le intacte. Era epoca literaturii ca joc. Autorii Desperado iau acest joc și îl fac fărâme. Ei declară că vor adevărul și nu doar un joc
Literatura contemporană britanică: literatura Desperado by LIDIA VIANU [Corola-publishinghouse/Science/982_a_2490]
-
trecut, fiindcă intertextualitatea e un bun câștigat și nu ești singurul care se agață de ea. * Nu te neliniști când vezi cum genurile literare "sângerează" din unul într-altul (Martin Amis), fii un bun chirurg al romanului și folosește bisturiul hibridizării cu sânge rece, fiindcă, dacă te agiți la ideea de invenție (cum a făcut Fluxul conștiinței), riști să fii condamnat la carceră pentru obscuritate. * Din cea mai abstractă idee literară, din texte scrise pornind de la ori despre alte texte, stoarce
Literatura contemporană britanică: literatura Desperado by LIDIA VIANU [Corola-publishinghouse/Science/982_a_2490]
-
evadării din convenția narativă pe baza căreia funcționau operele de la Homer până la James. Joyce și Eliot sunt importanți nu neapărat ca reprezentanți ai Fluxului conștiinței, cât ca promotori ai refuzului. Primul pas al acestui refuz a fost ceea ce știm drept hibridizarea genurilor literare. Autorii spun "nu" separării pe genuri și amestecă tot ce le trece prin minte, de la roman la poezie, dramă, critică literară, psihologie, în aceeași operă. Așa se nasc romanele poetice ale Virginiei Woolf, care însă nu sunt cel
Literatura contemporană britanică: literatura Desperado by LIDIA VIANU [Corola-publishinghouse/Science/982_a_2490]
-
puzzle recompus de lectură, dar e vorba neîndoielnic de un proiect al scriitorului, pe care cititorul trebuie să-l afle în final. Fără descifrare, textele Fluxului conștiinței nu trăiesc. Inovațiile moștenite de romanul britanic contemporan sunt așadar inovațiile Fluxului conștiinței: hibridizarea, livrescul, interiorizarea, răsturnarea cronologiei, refuzul intrigii și al unui deznodământ eliberator, refuzul sentimentalismelor (îndrăgostiții fericiți până la adânci bătrânețe), personajul mozaicat și, nu în ultimul rând, revoluționarea/reorientarea lecturii. Am discutat până acum hibridizarea, livrescul, interiorizarea. Răsturnarea cronologiei înseamnă de fapt
Literatura contemporană britanică: literatura Desperado by LIDIA VIANU [Corola-publishinghouse/Science/982_a_2490]
-
britanic contemporan sunt așadar inovațiile Fluxului conștiinței: hibridizarea, livrescul, interiorizarea, răsturnarea cronologiei, refuzul intrigii și al unui deznodământ eliberator, refuzul sentimentalismelor (îndrăgostiții fericiți până la adânci bătrânețe), personajul mozaicat și, nu în ultimul rând, revoluționarea/reorientarea lecturii. Am discutat până acum hibridizarea, livrescul, interiorizarea. Răsturnarea cronologiei înseamnă de fapt contrazicerea cronologiei. Tecutul nu mai e cauza prezentului și nici prezentul cauza viitorului. Prezentul se hrănește din trecut și viitor și le risipește. Știm viitorul de la prima pagină (cine vrea să sară peste
Literatura contemporană britanică: literatura Desperado by LIDIA VIANU [Corola-publishinghouse/Science/982_a_2490]
-
pe fundalul unei demonstrații de stânga, cu lozinci, manifeste și discursuri. E vorba de tineri, care merg la marș de bună voie, și se bucură din plin de petrecerea tovărășească de după el. Romanul este scris ca narațiune, fără pretenții de hibridizarea genurilor, fără imixtiunea lirismului ori încercări gen Desperado de a șoca lectura în toate chipurile posibile. E o povestire simplă, tradițională, cu urme clare de flux al conștiinței în modul cum sunt analizate perosnajele din interior, chiar dacă totul e relatat
Literatura contemporană britanică: literatura Desperado by LIDIA VIANU [Corola-publishinghouse/Science/982_a_2490]
-
înțelegerea criticii și a lecturii s-a bătătorit, au urcat și s-au spart valuri de enervare și prozelitism, Eliot e același și e foarte prezent. El este cel care aduce Fluxul conștiinței în poezie. El este cel care aduce hibridizarea genurilor literare, deopotrivă cu Joyce. The Waste Land amestecă lirismul, narațiunea, drama, eseul, chiar și critica literară, într-un gen fără nume, cum aveau să facă aproape toate cărțile scrise după al Doilea Război Mondial. The Waste Land nu este
Literatura contemporană britanică: literatura Desperado by LIDIA VIANU [Corola-publishinghouse/Science/982_a_2490]