1,026 matches
-
10 minute la 55°C. ... b) Se scurge soluția colorantă. Se spală rapid sub jet de apă. Excesul de apă se îndepărtează cu hârtie absorbantă. ... c) Frotiul se scufundă într-o soluție apoasă de acid acetic de 8 % și se incubează un minut la temperatura ambiantă. ... d) Se spală rapid sub jet de apă. Excesul de apă se îndepărtează cu hârtie absorbantă. ... e) Se umezește cu o picătură de apă și se aplică o lamelă de acoperire. ... f) Se examinează frotiul
ORDIN nr. 586 din 13 iulie 2007 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.. In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
avea certitudinea că granulele sunt intracelulare și că morfologia celulei este tipică pentru Ralstonia solanacearum. ... Testul cu negru de Sudan a) Fiecare lamelă se scufundă într-o soluție de 0,3 % negru de Sudan B în 70 % etanol și se incubează 10 minute la temperatura ambiantă. ... b) Se scurge soluția colorantă și se spală rapid sub jet de apă. Se îndepărtează excesul de apă cu hârtie absorbantă. ... c) Lamele se trec rapid prin xilol și se usucă cu hârtie absorbantă. Atenție
ORDIN nr. 586 din 13 iulie 2007 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.. In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
1. Testul se efectuează cu ajutorul unei tehnici corespunzătoare de însămânțare cu scopul de a asigura diluarea întregii populații care formează colonii de saprofite. Se însămânțează 50-100 f2μl din fiecare probă de extract și fiecare diluție. 4.1.2. Plăcile se incubează la 28°C. Citirea plăcilor se face după 48 de ore, iar apoi zilnic pe o perioadă de până la 6 zile. Coloniile tipice de Ralstonia solanacearum în mediul nutritiv SMSA sunt de culoare alb-lăptos, plate, neregulate și fluide, iar după
ORDIN nr. 586 din 13 iulie 2007 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.. In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
anterior în tuburi sau flacoane fără urme de ADN. Pentru îmbogățirea ELISA, se pot folosi proporții mai mari de mediu nutritiv lichid (de exemplu, 100 f2μl în 1,0 ml de mediu nutritiv lichid de îmbogățire). 4.2.2. Se incubează timp de 72 de ore între 27 și 30°C într-o cultură agitată sau statică fără a închide ermetic dopul tubului, pentru a permite aerisirea. 4.2.3. Se amestecă bine înainte de a se utiliza pentru testele ELISA sau
ORDIN nr. 586 din 13 iulie 2007 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.. In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
diluțiile de anticorpi. Volumul de antiser pipetat în fiecare godeu trebuie să fie cel puțin echivalent cu volumul de extract pipetat pe lamă. Următoarea procedură ar trebui aplicată în absența instrucțiunilor specifice ale furnizorilor de anticorpi: 5.3.2. Se incubează lamele pe hârtie umedă acoperite timp de 30 de minute la temperatura ambiantă (18-25°C). 5.3.3. Se îndepărtează antiserul de pe fiecare lamă și se spală lamele cu atenție cu tamponul IF. Se spală prin imersare în soluție tampon
ORDIN nr. 586 din 13 iulie 2007 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.. In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
3.4. Lamele se așază pe hârtie umedă. Se acoperă godeurile lamelor-test cu diluții ale conjugatului FITC utilizat pentru determinarea titrului. Volumul de conjugat pipetat în godeuri trebuie să fie egal cu volumul de anticorpi pipetat. 5.3.5. Se incubează lamele pe hârtie umedă, acoperite, timp de 30 de minute la temperatura ambiantă (18-25°C). 5.3.6. Se îndepărtează conjugatul de pe lamă. Se spală în conformitate cu cele indicate anterior (pct. 5.3.3). Se îndepărtează cu grijă excesul de tampon
ORDIN nr. 586 din 13 iulie 2007 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.. In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
C timp de 10 minute. (3) Se așază tubul pe gheață timp de 5 minute. ... (4) Se adaugă 80 f2μl de soluție concentrată de lizozim (50 mg de lizozim pe ml în 10 mM Tris-HCl, pH 8,0) și se incubează la 37°C timp de 30 de minute. (5) Se adaugă 220 f2μl de soluție A de Easy DNA(r) (Invitrogen), se amestecă bine prin vortexare și se incubează la 65°C timp de 30 de minute. ... (6) Se adaugă
ORDIN nr. 586 din 13 iulie 2007 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.. In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
pe ml în 10 mM Tris-HCl, pH 8,0) și se incubează la 37°C timp de 30 de minute. (5) Se adaugă 220 f2μl de soluție A de Easy DNA(r) (Invitrogen), se amestecă bine prin vortexare și se incubează la 65°C timp de 30 de minute. ... (6) Se adaugă 100 f2μl de soluție B de Easy DNA(r) (Invitrogen), se omogenizează bine prin vortexare până când precipitatul circulă liber în tub, iar proba are o consistență uniform-vâscoasă. ... (7) Se
ORDIN nr. 586 din 13 iulie 2007 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.. In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
de minute la 4°C pentru a separa fazele și a forma interfaza. ... (9) Faza superioară se transferă într-un nou tub Eppendorf. (10) Se adaugă 1 ml de etanol 100 % (- 20°C), se omogenizează scurt prin vortexare și se incubează pe gheață timp de 10 minute. (11) Se centrifughează la 15.000 g timp de 20 de minute la 4°C și se îndepărtează etanolul din extractul concentrat. ... (12) Se adaugă 500 f2μl de etanol 80 % (- 20°C) și se
ORDIN nr. 586 din 13 iulie 2007 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.. In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
și se notează rezultatele. 6.3.4. Pentru noile cazuri sau constatări, se verifică autenticitatea fragmentului amplificat PCR, efectuându-se o analiză de restricție enzimatică pe o probă de ADN amplificată rămasă. În acest scop, ADN-ul amplificat rămas se incubează la o temperatură optimă și pe o perioadă optimă cu o enzimă și un tampon corespunzător (vezi apendicele 6). Fragmentele restrictate se detectează prin electroforeză în gel de agaroză și colorare cu bromură de etidiu în conformitate cu metoda descrisă anterior. Dispunerea
ORDIN nr. 586 din 13 iulie 2007 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.. In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
timp de 7 minute la 7.000 g. 7.1.3. Se îndepărtează supernatantul, iar sedimentul se resuspendă în 200 f2μl de soluție de fixare preparată cu mai puțin de 24 de ore înainte. Se omogenizează prin vortexare și se incubează timp de o oră în frigider. 7.1.4. Se centrifughează timp de 7 minute la 7.000 g, se îndepărtează supranatantul, iar sedimentul se resuspendă în 75 f2μl de PB 0,01 M (a se vedea apendicele 7). 7
ORDIN nr. 586 din 13 iulie 2007 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.. In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
Se adaugă un volum egal de tampon 2X (apendicele 4) și se omogenizează prin vortexare. (3) Se pipetează alicote de 100 f2μl de extract în cel puțin două godeuri ale plăcii de microtitrare (de exemplu, Nunc-Polysorp sau echivalent) și se incubează o oră la 37°C sau peste noapte la 4°C. ... (4) Se îndepărtează extractele din godeuri. Se spală godeurile de 3 ori cu PBS-Tween (apendicele 4), lăsând ultima soluție de spălare în godeuri cel puțin 5 minute. (5) Se
ORDIN nr. 586 din 13 iulie 2007 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.. In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
prepară diluția corespunzătoare a antiserului anti-Ralstonia solanacearum în tampon de saturație (apendicele 4). Pentru anticorpii comerciali validați, se folosesc diluțiile recomandate (de obicei, de două ori mai concentrate decât titrul). ... (6) Se pipetează 100 f2μl în fiecare godeu și se incubează o oră la 37°C. ... (7) Se îndepărtează soluția de anticorpi din godeuri și se spală în conformitate cu cele indicate anterior [pct. (4)]. ... (8) Se prepară diluția corespunzătoare de conjugat secundar de anticorpi și de fosfatază alcalină în tampon de saturație
ORDIN nr. 586 din 13 iulie 2007 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.. In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
de anticorpi din godeuri și se spală în conformitate cu cele indicate anterior [pct. (4)]. ... (8) Se prepară diluția corespunzătoare de conjugat secundar de anticorpi și de fosfatază alcalină în tampon de saturație Se pipetează 100 f2μl în fiecare godeu și se incubează o oră la 37°C. ... (9) Se îndepărtează conjugatul de anticorpi din godeuri și se spală în conformitate cu cele indicate anterior [pct. (4)]. ... (10) Se pipetează 100 f2μl de soluție de substrat de fosfatază alcalină (apendicele 4) în fiecare godeu. Se
ORDIN nr. 586 din 13 iulie 2007 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.. In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
o oră la 37°C. ... (9) Se îndepărtează conjugatul de anticorpi din godeuri și se spală în conformitate cu cele indicate anterior [pct. (4)]. ... (10) Se pipetează 100 f2μl de soluție de substrat de fosfatază alcalină (apendicele 4) în fiecare godeu. Se incubează în întuneric la temperatura ambiantă și se măsoară absorbanța la 405 nm la intervale regulate în termen de 90 de minute. ... b) DAS-ELISA ... (1) Se prepară diluția corespunzătoare de imunoglobuline policlonale anti-Ralstonia solanacearum în tampon concentrat cu pH 9,6
ORDIN nr. 586 din 13 iulie 2007 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.. In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
405 nm la intervale regulate în termen de 90 de minute. ... b) DAS-ELISA ... (1) Se prepară diluția corespunzătoare de imunoglobuline policlonale anti-Ralstonia solanacearum în tampon concentrat cu pH 9,6 (apendicele 4). Se adaugă 200 f2μl în fiecare godeu. Se incubează timp de 4-5 ore la 37°C sau timp de 16 ore la 4°C. ... (2) Se spală godeurile de 3 ori cu PBS-Tween (apendicele 4). ... Se adaugă 190 f2μl de extract de probă în cel puțin două godeuri. De
ORDIN nr. 586 din 13 iulie 2007 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.. In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
2) Se spală godeurile de 3 ori cu PBS-Tween (apendicele 4). ... Se adaugă 190 f2μl de extract de probă în cel puțin două godeuri. De asemenea, se adaugă controlul pozitiv și negativ în câte două godeuri pe fiecare placă. Se incubează timp de 16 ore la 4°C. (3) Se spală godeurile de 3 ori cu PBS-Tween (apendicele 4). ... (4) Se prepară o diluție corespunzătoare de anticorpi monoclonali specifici Ralstonia solanacearum în PBS (apendicele 4) conținând, de asemenea, 0,5 % seralbumină
ORDIN nr. 586 din 13 iulie 2007 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.. In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
de 3 ori cu PBS-Tween (apendicele 4). ... (4) Se prepară o diluție corespunzătoare de anticorpi monoclonali specifici Ralstonia solanacearum în PBS (apendicele 4) conținând, de asemenea, 0,5 % seralbumină bovină (BSA) și se pipetează 190 f2μl în fiecare godeu. Se incubează două ore la 37°C. ... (5) Se spală godeurile de 3 ori cu PBS-Tween (apendicele 4). ... (6) Se prepară o diluție corespunzătoare de imunoglobuline antișoarece conjugate cu fosfatază alcalină în PBS. Se adaugă 190 f2μl în fiecare godeu. Se incubează
ORDIN nr. 586 din 13 iulie 2007 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.. In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
incubează două ore la 37°C. ... (5) Se spală godeurile de 3 ori cu PBS-Tween (apendicele 4). ... (6) Se prepară o diluție corespunzătoare de imunoglobuline antișoarece conjugate cu fosfatază alcalină în PBS. Se adaugă 190 f2μl în fiecare godeu. Se incubează două ore la 37°C. ... (7) Se spală godeurile de 3 ori cu PBS-Tween (apendicele 4). ... (8) Se prepară o soluție de substrat de fosfatază alcalină conținând 1 mg de p-nitrofenil fosfat pe ml de soluție tampon (apendicele 4). Se
ORDIN nr. 586 din 13 iulie 2007 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.. In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
spală godeurile de 3 ori cu PBS-Tween (apendicele 4). ... (8) Se prepară o soluție de substrat de fosfatază alcalină conținând 1 mg de p-nitrofenil fosfat pe ml de soluție tampon (apendicele 4). Se adaugă 200 f2μl în fiecare godeu. Se incubează la întuneric la temperatura ambiantă și se măsoară absorbanța la 40 nm la intervale regulate în termen de 90 de minute. ... Interpretarea rezultatelor testelor ELISA Testul ELISA este negativ atunci când densitatea optică (DO) medie a godeurilor probei duplicate este mai
ORDIN nr. 586 din 13 iulie 2007 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.. In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
până la 4 săptămâni la temperatura de 25-30°C și umiditate relativ mare, stropindu-le în mod corespunzător pentru a preveni o suprasaturare hidrică sau ofilirea din lipsă de apă. Pentru a se evita contaminarea, plantele control pozitiv și negativ se incubează separat în standuri separate în mod corespunzător într-o seră ori cameră de cultivare sau, în cazul în care spațiul este limitat, se asigură o separare strictă între metodele de tratare. Atunci când plantele aparținând unor probe diferite trebuie incubate în
ORDIN nr. 586 din 13 iulie 2007 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.. In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
se incubează separat în standuri separate în mod corespunzător într-o seră ori cameră de cultivare sau, în cazul în care spațiul este limitat, se asigură o separare strictă între metodele de tratare. Atunci când plantele aparținând unor probe diferite trebuie incubate în apropiere unele de celelalte, trebuie prevăzute între ele ecrane de separare corespunzătoare. În timpul fertilizării, stropirii, controlului sau oricărei alte manipulări, trebuie luate toate măsurile de precauție pentru a se evita o contaminare încrucișată. Este esențial ca în serele și
ORDIN nr. 586 din 13 iulie 2007 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.. In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
pozitiv de Ralstonia solanacearum (de exemplu, NCPPB 4156 = PD 2762 = CFBP 3857; vezi apendicele 3). ... (2) Se inoculează 5-10 plantule de tomate sau vinete sensibile, în stadiul celei de a treia frunze adevărate (vezi lit. A pct. 9). ... (3) Se incubează până la două săptămâni la 25-28°C și umiditate relativă crescută, asigurând o stropire corespunzătoare pentru a preveni suprasaturarea hidrică sau stresul de deshidratare. În cazul culturilor pure, în 15 zile ar trebui să intervină ofilirea. În absența simptomelor la sfârșitul
ORDIN nr. 586 din 13 iulie 2007 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.. In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
cm deasupra punctului de inoculare. Se mărunțește și se suspendă într-un volum mic de apă distilată sterilă sau tampon fosfat de 50 mM (apendice 4). Se însămânțează suspensia pe un mediu adecvat, de preferință mediu selectiv (apendice 2), se incubează timp de 48-72 de ore la 28°C și se observă formarea coloniilor tipice de Ralstonia solanacearum. ... Apendicele 1 Laboratoarele care efectuează optimizarea și validarea protocoalelor 1) Experți de contact: vezi http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home
ORDIN nr. 586 din 13 iulie 2007 privind controlul bacteriei Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi et al.. In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
proporțional cu logaritmul concentrației de antibiotic, pește gamă concentrațiilor de antibiotic utilizate. 3. Microorganism: Bacillus subtilis atcc 6633 (ncib 8054) 3.1. Întreținerea culturii stoc Se însămânțează mediul de cultură în tuburi înclinate (4.1) cu Bacillus subtilis și se incubează peste noapte la 30°C. Cultură se păstrează la frigider la 4°C. Se reinsamanteaza lunar. 3.2. Prepararea suspensiei de spori(1) Se recoltează o cultură crescută pe agar înclinat preparat recent, (3.1) cu 2-3 ml soluție apă
NORMĂ VETERINARA din 10 iunie 2004 ce stabileste metode naţionale de analiza pentru controlul oficial al furajelor cu referire la conţinutul în avoparcina şi monenzin de sodiu*). In: EUR-Lex () [Corola-website/Law/165046_a_166375]