3,192 matches
-
și tranzitorie. Urmează stadiul de replicare de menținere care asigură dublarea numărului de copii ADN HPV per celulă și segregarea în celulele fiice infectate care se divid și se diferențiază în același timp. După diferențiere începe a doua rundă de amplificare, numărul de copii ADN HPV per celulă ajungând de ordinul sutelor sau miilor. A doua amplificare se finalizează cu eliberarea virionilor maturi progeni care transmit infecția. Modelul trifazic al replicării este foarte probabil, dar nu acceptat de toți autorii. Modelul
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
per celulă și segregarea în celulele fiice infectate care se divid și se diferențiază în același timp. După diferențiere începe a doua rundă de amplificare, numărul de copii ADN HPV per celulă ajungând de ordinul sutelor sau miilor. A doua amplificare se finalizează cu eliberarea virionilor maturi progeni care transmit infecția. Modelul trifazic al replicării este foarte probabil, dar nu acceptat de toți autorii. Modelul trifazic implică două moduri de replicare: de amplificare și de menținere. Replicarea de menținere asigură un
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
ajungând de ordinul sutelor sau miilor. A doua amplificare se finalizează cu eliberarea virionilor maturi progeni care transmit infecția. Modelul trifazic al replicării este foarte probabil, dar nu acceptat de toți autorii. Modelul trifazic implică două moduri de replicare: de amplificare și de menținere. Replicarea de menținere asigură un număr stabil de copii ADN HPV per celulă în epiteliul bazal. Replicarea de menținere se realizeaza în două moduri: ordonat, similar cu diviziunea ADN celular, cu dublarea numărului de copii ADN HPV
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
infecția HPV poate evolua către: vindecare (clearence-ul ADN HPV), persistență (peste 2 ani), recurență, latență sau integrare. Obișnuit, prima infecție HPV este tranzitorie, ADN HPV devenind nedectabil după 12-24 luni. Probabil că replicarea virusului în stratul bazal nu asigură o amplificare suficientă a încărcării virale. ADN HPV se replică odată cu diviziunea celulelor bazale care transmit infecția celulelor fiice în curs de diferențiere în keratinocite. Infecția nu rămâne cantonată în celulele bazale germinale încât să constituie un rezervor permanent de virus. Foarte
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
infecției persistente de cea tranzitorie. Infecția persistentă este semnificativ corelată cu cancerul invaziv și cu leziunile precanceroase. Durata persistenței peste 2 ani înseamnă persistență pe viață și un risc cancerigen puternic. Tehnicile frecvent utilizate sunt calitative: hibridizarea (Hybrid Capture) sau amplificarea genică prin PCR. În ambele cazuri genotiparea este dependentă de operații subsecvente executate manual. Rapid real-time PCR distinge genotipurile într-un singur timp, prin analiza computerizată a kineticii curbelor de topire ale diferitelor specii ADN HPV. Pe baza argumentelor indubitabile
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
calității diagnosticului, să aibă un sistem intern de control de calitate și să fie verificate periodic de controale externe de calitate. Pentru aceste deziderate, laboratoarele trebuie să funcționeze cu îndeplinirea următoarelor condiții: Infrastructură (spații separate) și aparatură corespunzătoare pentru extracția, amplificarea și detecția ADN viral; Acreditare pentru proceduri de biologie moleculară, protocoale (SOP - standard operation procedures) și aplicarea cerințelor GLP (good laboratory practice); Sistem de monitorizare a performanțelor prin evaluări periodice cu paneluri de probe, disponibile la nivel național. În practică
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
de standardizare și de control de calitate, - acceptabilitate, - concordanță cu alte metode de diagnostic folosite pentru evaluarea vaccinării, - ușurința de integrare în programele de screening deja operante. Dintre testele existente cele mai utilizate sunt testele de hibridizare (HC) și de amplificare prin reacția PCR. Tabelul următor sintetizează avantajele și limitele principalelor metode propuse. NIVELUL ANTICORPILOR PROTECTORI LA VACCINAȚI Este surprinzător că, spre deosebire de alte vaccinări, eficiența vaccinării HPV nu poate fi urmărită prin testarea seroconversiei. Deși detecția anticorpilor anti-L1 a fost utilizată
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
diagnostic se face prin raportare la rezultatele detecției ADN HPV hr prin tehnici moleculare, singurele care se corelează satisfăcător cu prezența leziunilor precanceroase cu potențial evolutiv. Testele moleculare se bazează pe unul din cele două principii de detecție ADN HPV: - amplificarea țintei - tehnici de tip PCR; - amplificarea semnalului - tehnici de hibridizare - HC2. PCR este tehnica cea mai sensibilă și permite atât detecția cât și genotiparea. Cele mai multe perechi de primeri vizează porțiuni din genom care codifică proteina capsidară L1. Sensibilitatea testelor PCR
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
rezultatele detecției ADN HPV hr prin tehnici moleculare, singurele care se corelează satisfăcător cu prezența leziunilor precanceroase cu potențial evolutiv. Testele moleculare se bazează pe unul din cele două principii de detecție ADN HPV: - amplificarea țintei - tehnici de tip PCR; - amplificarea semnalului - tehnici de hibridizare - HC2. PCR este tehnica cea mai sensibilă și permite atât detecția cât și genotiparea. Cele mai multe perechi de primeri vizează porțiuni din genom care codifică proteina capsidară L1. Sensibilitatea testelor PCR este superioară celor de tip hibridizare
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
și LA este de 84%, iar între HC2 și AMP între 84,4-85,9% (Stevens M.P. și colab., 2007). Automatizarea cu ajutorul unei platforme BeeBlot™ a demonstrat fiabilitatea kit-urilor Roche crescând viteza și reproductibilitatea determinărilor (Stevens M.P., și colab., 2008). Amplificarea ADN viral se realizează în cicluri multiple de denaturare-amorsare-elongare în cunoscutele mașini numite termocycleri. Noile mașini LightCycler™ combină amplificarea simultană a mai multor specii de ADN viral cu analiza datelor de kinetică. LightCycler™ utilizează aerul ca mediu pentru controlul temperaturii
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
Automatizarea cu ajutorul unei platforme BeeBlot™ a demonstrat fiabilitatea kit-urilor Roche crescând viteza și reproductibilitatea determinărilor (Stevens M.P., și colab., 2008). Amplificarea ADN viral se realizează în cicluri multiple de denaturare-amorsare-elongare în cunoscutele mașini numite termocycleri. Noile mașini LightCycler™ combină amplificarea simultană a mai multor specii de ADN viral cu analiza datelor de kinetică. LightCycler™ utilizează aerul ca mediu pentru controlul temperaturii reducând semnificativ timpul de testare (obișnuit, 40 cicluri în 25 minute). Folosirea unor capilare fine de borosilicat ca vase
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
temperaturii reducând semnificativ timpul de testare (obișnuit, 40 cicluri în 25 minute). Folosirea unor capilare fine de borosilicat ca vase de reacție permite transferul eficient al căldurii. Modificările ciclice ale temperaturii acționează ca un ghid ondulatoriu facilitând fluorimetria și eficientizând amplificarea. Amestecul de amplificare conține un colorant fluorescent (exemplu, SYBR Green™) care se leagă de șanțul minor al dublului helix ADN și emite lumină la excitație. Pe măsură ce produsul amplificat se acumulează, crește fluorescența. La denaturare, colorantul se eliberează din dublul helix
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
timpul de testare (obișnuit, 40 cicluri în 25 minute). Folosirea unor capilare fine de borosilicat ca vase de reacție permite transferul eficient al căldurii. Modificările ciclice ale temperaturii acționează ca un ghid ondulatoriu facilitând fluorimetria și eficientizând amplificarea. Amestecul de amplificare conține un colorant fluorescent (exemplu, SYBR Green™) care se leagă de șanțul minor al dublului helix ADN și emite lumină la excitație. Pe măsură ce produsul amplificat se acumulează, crește fluorescența. La denaturare, colorantul se eliberează din dublul helix ADN și fluorescența
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
La denaturare, colorantul se eliberează din dublul helix ADN și fluorescența scade. Curba de denaturare (de topire ADN) este dependentă de secvență, de lungimea lanțului, de conținutul GC și diferă între genotipuri. Determinarea punctului de topire se poate face după amplificare, pentru fiecare probă, fără a mai deschide vasele de reacție. Aparatele moderne sunt robotizate. Primerii GP5+/GP6+ sunt primeri cu spectru larg, primerii TS sunt specifici pentru tipurile HPV 16 sau 18. Rezultatele diagnosticului cu AMP™ indică o perioadă medie
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
în a detecta concentrații joase de ADN HPV datorită competiției între diferitele genotipuri în infecțiile mixte. Pentru a crește sensibilitatea se întrebuințează primeri cu spectru larg și specifici de tip (TS), ultimii țintind HPV 16 și 18. Un protocol menționează amplificarea inițială cu primeri cu spectru larg SPF(10) și, ulterior cu primerii TS-HPV-16- și TS-HPV-18 PCR. Astfel a fost descoperit un număr adițional de probe pozitive, noul algoritm reprezentând un progres în analiza infecției HPV (Perrons C. și colab., 2005
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
Virionii HPV, icosaedrici, neanvelopați au dimensii mici (55 nm) și sunt termorezistenți. Genomul este ADN ds, circular și conține 8 cadre de citire. Receptorul HPV este integrina alfa 6. Situl de transcriere este în nucleu. Replicarea este trifazică: a) prima amplificare (în stratul bazal), b) replicarea de menținere și c) a 2-a replicare de amplificare în epiteliul diferențiat. Externalizarea progenilor are loc după exfolierea epiteliului scuamos. Controlul replicării implică peste 20 factori de transcriere celulari și este condiționat de diferențierea
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
ds, circular și conține 8 cadre de citire. Receptorul HPV este integrina alfa 6. Situl de transcriere este în nucleu. Replicarea este trifazică: a) prima amplificare (în stratul bazal), b) replicarea de menținere și c) a 2-a replicare de amplificare în epiteliul diferențiat. Externalizarea progenilor are loc după exfolierea epiteliului scuamos. Controlul replicării implică peste 20 factori de transcriere celulari și este condiționat de diferențierea stratului bazal către keratinocite. Boli determinate de infecția HPV: Mai multe forme de cancere umane
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
invaziv. REPLICAREA HPV Sediul replicării este epiteliul stratificat de la nivelul mucoaselor sau pielii. Inițierea infecției are loc la nivelul stratului bazal. Imediat după infecție numărul de copii se amplifică moderat în nucleul celulelor bazale (50-400 copii ADN HPV per celulă). Amplificarea inițială este rapidă și tranzitorie. Urmează stadiul de replicare de menținere care asigură dublarea numărului de copii ADN HPV per celulă și segregarea în celulele fiice infectate care se divid și se diferențiază în același timp. După diferențiere începe a
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
și tranzitorie. Urmează stadiul de replicare de menținere care asigură dublarea numărului de copii ADN HPV per celulă și segregarea în celulele fiice infectate care se divid și se diferențiază în același timp. După diferențiere începe a doua rundă de amplificare, numărul de copii ADN HPV per celulă ajungând de ordinul sutelor sau miilor. A doua amplificare se finalizează cu eliberarea virionilor maturi progeni care transmit infecția. Modelul trifazic al replicării este foarte probabil, dar nu acceptat de toți autorii. Modelul
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
per celulă și segregarea în celulele fiice infectate care se divid și se diferențiază în același timp. După diferențiere începe a doua rundă de amplificare, numărul de copii ADN HPV per celulă ajungând de ordinul sutelor sau miilor. A doua amplificare se finalizează cu eliberarea virionilor maturi progeni care transmit infecția. Modelul trifazic al replicării este foarte probabil, dar nu acceptat de toți autorii. Modelul trifazic implică două moduri de replicare: de amplificare și de menținere. Replicarea de menținere asigură un
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
ajungând de ordinul sutelor sau miilor. A doua amplificare se finalizează cu eliberarea virionilor maturi progeni care transmit infecția. Modelul trifazic al replicării este foarte probabil, dar nu acceptat de toți autorii. Modelul trifazic implică două moduri de replicare: de amplificare și de menținere. Replicarea de menținere asigură un număr stabil de copii ADN HPV per celulă în epiteliul bazal. Replicarea de menținere se realizeaza în două moduri: ordonat, similar cu diviziunea ADN celular, cu dublarea numărului de copii ADN HPV
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
infecția HPV poate evolua către: vindecare (clearence-ul ADN HPV), persistență (peste 2 ani), recurență, latență sau integrare. Obișnuit, prima infecție HPV este tranzitorie, ADN HPV devenind nedectabil după 12-24 luni. Probabil că replicarea virusului în stratul bazal nu asigură o amplificare suficientă a încărcării virale. ADN HPV se replică odată cu diviziunea celulelor bazale care transmit infecția celulelor fiice în curs de diferențiere în keratinocite. Infecția nu rămâne cantonată în celulele bazale germinale încât să constituie un rezervor permanent de virus. Foarte
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
infecției persistente de cea tranzitorie. Infecția persistentă este semnificativ corelată cu cancerul invaziv și cu leziunile precanceroase. Durata persistenței peste 2 ani înseamnă persistență pe viață și un risc cancerigen puternic. Tehnicile frecvent utilizate sunt calitative: hibridizarea (Hybrid Capture) sau amplificarea genică prin PCR. În ambele cazuri genotiparea este dependentă de operații subsecvente executate manual. Rapid real-time PCR distinge genotipurile într-un singur timp, prin analiza computerizată a kineticii curbelor de topire ale diferitelor specii ADN HPV. Pe baza argumentelor indubitabile
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
calității diagnosticului, să aibă un sistem intern de control de calitate și să fie verificate periodic de controale externe de calitate. Pentru aceste deziderate, laboratoarele trebuie să funcționeze cu îndeplinirea următoarelor condiții: Infrastructură (spații separate) și aparatură corespunzătoare pentru extracția, amplificarea și detecția ADN viral; Acreditare pentru proceduri de biologie moleculară, protocoale (SOP - standard operation procedures) și aplicarea cerințelor GLP (good laboratory practice); Sistem de monitorizare a performanțelor prin evaluări periodice cu paneluri de probe, disponibile la nivel național. În practică
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
de standardizare și de control de calitate, - acceptabilitate, - concordanță cu alte metode de diagnostic folosite pentru evaluarea vaccinării, - ușurința de integrare în programele de screening deja operante. Dintre testele existente cele mai utilizate sunt testele de hibridizare (HC) și de amplificare prin reacția PCR. Tabelul următor sintetizează avantajele și limitele principalelor metode propuse. NIVELUL ANTICORPILOR PROTECTORI LA VACCINAȚI Este surprinzător că, spre deosebire de alte vaccinări, eficiența vaccinării HPV nu poate fi urmărită prin testarea seroconversiei. Deși detecția anticorpilor anti-L1 a fost utilizată
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]