3,294 matches
-
urmărită prin testarea seroconversiei. Deși detecția anticorpilor anti-L1 a fost utilizată pentru monitorizarea expunerii populației la virus, seroconversia nu poate face distincția între achiziția infecției, persistența sau regresia ei. În plus, nu există reagenți standardizați pentru evidențierea anticorpilor specifici fiecărui genotip. Anticorpii anti-L1 VLP, specifici de tip, ating titrul maxim la 1 lună de la a treia doză de vaccin. Titrul scade în următoarele 12-24 luni pentru a rămâne apoi în platou. La 3 ani, titrurile rămân de 2-20 ori mai mari
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
tabelul 34). TEHNICI DE HIBRIDARE Testul comercializat pentru această metodă este HPV Hybrid Capture®2 [HC2] High Risk Test, Digene, Gaithersburg, MD. Testul utilizează probele citologice recoltate pentru testul Pap sau biopsii cervicale. Metoda detectează prezența unuia sau mai multor genotipuri dintre 13 genotipuri HPV hr. În primul timp nu se poate preciza care anume genotip este prezent dar operații consecutive pot face acest lucru. Principiul metodei este un sistem sandwich de hibridizare care amplifică un semnal chemiluminiscent pentru detecția calitativă
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
DE HIBRIDARE Testul comercializat pentru această metodă este HPV Hybrid Capture®2 [HC2] High Risk Test, Digene, Gaithersburg, MD. Testul utilizează probele citologice recoltate pentru testul Pap sau biopsii cervicale. Metoda detectează prezența unuia sau mai multor genotipuri dintre 13 genotipuri HPV hr. În primul timp nu se poate preciza care anume genotip este prezent dar operații consecutive pot face acest lucru. Principiul metodei este un sistem sandwich de hibridizare care amplifică un semnal chemiluminiscent pentru detecția calitativă a prezenței HPV
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
HC2] High Risk Test, Digene, Gaithersburg, MD. Testul utilizează probele citologice recoltate pentru testul Pap sau biopsii cervicale. Metoda detectează prezența unuia sau mai multor genotipuri dintre 13 genotipuri HPV hr. În primul timp nu se poate preciza care anume genotip este prezent dar operații consecutive pot face acest lucru. Principiul metodei este un sistem sandwich de hibridizare care amplifică un semnal chemiluminiscent pentru detecția calitativă a prezenței HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
hybride capture a fost 91-93%, iar pentru testul GP5+/GP6+ - PCR-EIA, peste 95% (Castle P.E., 2008). Când raportul dintre valoarea probei și valoarea prag crește peste 2-3, specificitatea reacției hybride capture se aproprie de PCR datorită reducerii reactivității încrucișate cu genotipurile HPV lr . Potențialul comercial al testului HC2 a stimulat competitorii pe piața testelor de diagnostic. Câteva procese sunt în curs pentru paternitatea patentului pe care se bazează testul Digene. Compania rivală, Third Wave Technologies Inc, a pus pe piață o
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
curs pentru paternitatea patentului pe care se bazează testul Digene. Compania rivală, Third Wave Technologies Inc, a pus pe piață o metodă similară (Inv2) care ar avea și capacitatea de genotipare prin utilizarea mai multor seturi de probe care diferențiază genotipurile oncogene de cele rar oncogene, iar între primele, pe cele pozitive pentru grupul HPV 16 de cele pozitive pentru grupul HPV 18 (tabelul 35). TEHNICI PCR Mai multe metode PCR au fost propuse pentru detecția unui spectru larg de genotipuri
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
genotipurile oncogene de cele rar oncogene, iar între primele, pe cele pozitive pentru grupul HPV 16 de cele pozitive pentru grupul HPV 18 (tabelul 35). TEHNICI PCR Mai multe metode PCR au fost propuse pentru detecția unui spectru larg de genotipuri HPV cu mucotropism utilizând primeri consens sau degenerați (tabelul 36). Trusele PCR amplifică regiunea conservată a genei pentru proteina L1, iar tipizarea se face ulterior prin hibridizare specifică de tip sau prin digestie cu enzime de restricție sau prin secvențiere
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
face ulterior prin hibridizare specifică de tip sau prin digestie cu enzime de restricție sau prin secvențiere. În unele trialuri clinice post-vaccinare au fost utilizate și truse PCR multiplex capabile să detecteze genele L1, E6, și E7 gene pentru fiecare genotip din vaccin. Primerii au fost obținuți după consultarea bazei de date de la Los Alamos care deține secvențele tuturor genotipurilor HPV. Primerii GP5+/GP6+ (de Roda Husman și colab., 1995) au fost îmbunătățiți încât, în prezent, sunt mai folosiți primerii din
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
trialuri clinice post-vaccinare au fost utilizate și truse PCR multiplex capabile să detecteze genele L1, E6, și E7 gene pentru fiecare genotip din vaccin. Primerii au fost obținuți după consultarea bazei de date de la Los Alamos care deține secvențele tuturor genotipurilor HPV. Primerii GP5+/GP6+ (de Roda Husman și colab., 1995) au fost îmbunătățiți încât, în prezent, sunt mai folosiți primerii din seturile: MY 09/11 și PGMY 09/11 (Gravitt PE., și colab., 2000) sau fragmentele scurte SPF (short fragments
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
sensibil deși rămâne bine corelat cu rezultatele HC2 (Perrons C. și colab., 2005). Compania Roche Molecular Systems, Alameda, CA comercializează două kit-uri de diagnostic: Amplicor HPV (AMP™) și Linear Array HPV genotyping (LA™) care pot detecta și tipiza 37 genotipuri, inclusiv cele 13 HPV hr detectate de HC2. Corelația între HC2 și LA este de 84%, iar între HC2 și AMP între 84,4-85,9% (Stevens M.P. și colab., 2007). Automatizarea cu ajutorul unei platforme BeeBlot™ a demonstrat fiabilitatea kit-urilor
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
la excitație. Pe măsură ce produsul amplificat se acumulează, crește fluorescența. La denaturare, colorantul se eliberează din dublul helix ADN și fluorescența scade. Curba de denaturare (de topire ADN) este dependentă de secvență, de lungimea lanțului, de conținutul GC și diferă între genotipuri. Determinarea punctului de topire se poate face după amplificare, pentru fiecare probă, fără a mai deschide vasele de reacție. Aparatele moderne sunt robotizate. Primerii GP5+/GP6+ sunt primeri cu spectru larg, primerii TS sunt specifici pentru tipurile HPV 16 sau
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
sunt specifici pentru tipurile HPV 16 sau 18. Rezultatele diagnosticului cu AMP™ indică o perioadă medie de detectabilitate a ADN HPV hr, după o infecție nouă, de 1-2 ani, cu mențiunea că HPV 16 tinde să persiste mai îndelungat. Celelalte genotipuri oncogene nu persistă mai mult decât genotipurile nononcogene. Co-infecția tranzitorie cu alte genotipuri decât cele din vaccin poate competiționa cu primerii PCR și determina reacții fals negative pentru genotipurile clinic relevante. Testul SPF10/ LiPA detectează mai multe genotipuri de risc
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
18. Rezultatele diagnosticului cu AMP™ indică o perioadă medie de detectabilitate a ADN HPV hr, după o infecție nouă, de 1-2 ani, cu mențiunea că HPV 16 tinde să persiste mai îndelungat. Celelalte genotipuri oncogene nu persistă mai mult decât genotipurile nononcogene. Co-infecția tranzitorie cu alte genotipuri decât cele din vaccin poate competiționa cu primerii PCR și determina reacții fals negative pentru genotipurile clinic relevante. Testul SPF10/ LiPA detectează mai multe genotipuri de risc înalt decât HC2 Digene. Ultima metodă nu
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
o perioadă medie de detectabilitate a ADN HPV hr, după o infecție nouă, de 1-2 ani, cu mențiunea că HPV 16 tinde să persiste mai îndelungat. Celelalte genotipuri oncogene nu persistă mai mult decât genotipurile nononcogene. Co-infecția tranzitorie cu alte genotipuri decât cele din vaccin poate competiționa cu primerii PCR și determina reacții fals negative pentru genotipurile clinic relevante. Testul SPF10/ LiPA detectează mai multe genotipuri de risc înalt decât HC2 Digene. Ultima metodă nu diferențiază infecția persistentă reală, cu același
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
cu mențiunea că HPV 16 tinde să persiste mai îndelungat. Celelalte genotipuri oncogene nu persistă mai mult decât genotipurile nononcogene. Co-infecția tranzitorie cu alte genotipuri decât cele din vaccin poate competiționa cu primerii PCR și determina reacții fals negative pentru genotipurile clinic relevante. Testul SPF10/ LiPA detectează mai multe genotipuri de risc înalt decât HC2 Digene. Ultima metodă nu diferențiază infecția persistentă reală, cu același genotip, de infecțiile în care genotipul s-a schimbat între cele două determinări. In concluzie, ambele
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
îndelungat. Celelalte genotipuri oncogene nu persistă mai mult decât genotipurile nononcogene. Co-infecția tranzitorie cu alte genotipuri decât cele din vaccin poate competiționa cu primerii PCR și determina reacții fals negative pentru genotipurile clinic relevante. Testul SPF10/ LiPA detectează mai multe genotipuri de risc înalt decât HC2 Digene. Ultima metodă nu diferențiază infecția persistentă reală, cu același genotip, de infecțiile în care genotipul s-a schimbat între cele două determinări. In concluzie, ambele teste Roche (AMP și LA) sunt relativ ușor de
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
decât cele din vaccin poate competiționa cu primerii PCR și determina reacții fals negative pentru genotipurile clinic relevante. Testul SPF10/ LiPA detectează mai multe genotipuri de risc înalt decât HC2 Digene. Ultima metodă nu diferențiază infecția persistentă reală, cu același genotip, de infecțiile în care genotipul s-a schimbat între cele două determinări. In concluzie, ambele teste Roche (AMP și LA) sunt relativ ușor de utilizat și oferă o metodă rapidă, standardizată pentru detecția și genotiparea ADN HPV. Ele sunt utile
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
competiționa cu primerii PCR și determina reacții fals negative pentru genotipurile clinic relevante. Testul SPF10/ LiPA detectează mai multe genotipuri de risc înalt decât HC2 Digene. Ultima metodă nu diferențiază infecția persistentă reală, cu același genotip, de infecțiile în care genotipul s-a schimbat între cele două determinări. In concluzie, ambele teste Roche (AMP și LA) sunt relativ ușor de utilizat și oferă o metodă rapidă, standardizată pentru detecția și genotiparea ADN HPV. Ele sunt utile în studiile epidemiologice pentru evaluarea
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
între cele două determinări. In concluzie, ambele teste Roche (AMP și LA) sunt relativ ușor de utilizat și oferă o metodă rapidă, standardizată pentru detecția și genotiparea ADN HPV. Ele sunt utile în studiile epidemiologice pentru evaluarea eficienței vaccinării. Identificarea genotipului ar trebui completată cu determinarea încărcării virale, a statusului de integrare a genomului viral și a ARNm pentru oncoproteinele virale ceea ce ar ameliora informația oferită clinicianului, încă dependent de interpretarea citologiei clasice. Determinarea încărcării virale ar putea, teoretic, indica un
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
pentru oncoproteinele virale ceea ce ar ameliora informația oferită clinicianului, încă dependent de interpretarea citologiei clasice. Determinarea încărcării virale ar putea, teoretic, indica un risc oncogen proporțional cu doza. Tehnica este complexă și interferată de prezența simultană a infecției cu alte genotipuri, chiar lipsite de risc oncogen. Rezultate reproductibile au fost publicate în privința corelației încărcării virale pentru HPV 16 (nu și pentru alte genotipuri) și prezența sau progresia leziunilor CIN2/3. Determinarea semicantitativă a încărcării virale se poate face cu metoda HC2
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
un risc oncogen proporțional cu doza. Tehnica este complexă și interferată de prezența simultană a infecției cu alte genotipuri, chiar lipsite de risc oncogen. Rezultate reproductibile au fost publicate în privința corelației încărcării virale pentru HPV 16 (nu și pentru alte genotipuri) și prezența sau progresia leziunilor CIN2/3. Determinarea semicantitativă a încărcării virale se poate face cu metoda HC2 dar sunt metode mai sensibile, precum real-time PCR multiplex care dau rezultate de o acuratețe sporită. TESTE RAPIDE Un deziderat important al
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
ADN HPV este de a diferenția femeile cu risc oncogen mic de cele cu risc relativ consistent. Utilizarea unui singur set de primeri cu spectru larg poate eșua în a detecta concentrații joase de ADN HPV datorită competiției între diferitele genotipuri în infecțiile mixte. Pentru a crește sensibilitatea se întrebuințează primeri cu spectru larg și specifici de tip (TS), ultimii țintind HPV 16 și 18. Un protocol menționează amplificarea inițială cu primeri cu spectru larg SPF(10) și, ulterior cu primerii
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
vaccinare, când fetițele vaccinate vor trece de 30 ani. Recomandările existente (OMS, FDA, ECDC etc.) stipulează utilitatea diagnosticului virusologic numai pentru femeile peste 30 ani. La femeile mai tinere specificitatea testelor moleculare este mică datorită frecvenței infecțiilor tranzitorii, chiar cu genotipurile HPV hr. 13. ARGUMENTE PRO- ȘI CONTRA- VACCINĂRII HPV GENERALIZATE ÎN ROMÂNIA Țara noastră are una dintre cele mai înalte rate de incidență pentru cancerul de col din Europa (>31 cazuri noi/100 000 femei) fiind pe primul loc și
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
românești privind asocierea infecției HPV cu cancerul de col au fost publicate încă din anii ’90 (Stoian și Repanovici, 1994; Vârtej și colab., 1998; Pazai și colab., 2006 etc.) Câteva colective din țară au comunicat sau publicat cercetări privind distribuția genotipurilor HPV la paciente cu leziuni citologice de grade diferite. Metodologia utilizată pentru detecție și genotipare a fost variată, la fel și criteriile de selecție a bolnavelor luate în studiu. Tabelele următoare sintetizează aceste rezultate. Toate studiile semnalează corelația detecției HPV
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]
-
HSIL. Frecvența detecției HPV nu a fost influențată de vârsta pacientelor. În schimb, frecvența detecției HPV 16 a fost mai mare la cele cu leziuni CIN de grad înalt decât în cazurile de carcinom. Prezența infecției simultane cu mai multe genotipuri a variat între 48-52%, în acest din urmă caz asocierea cu HPV 16 depășind 40%. Remarcabil, toți autorii au decelat mai frecvent HPV 16, urmat de HPV 31 și HPV 18. Restul genotipurilor oncogene fiind izolate în sub 10% din
Vaccinarea în cancerul de col uterin by Costin Cernescu () [Corola-publishinghouse/Science/92273_a_92768]