3,199 matches
-
optimă predeterminata în tampon carbonat/bicarbonat, pH 9,6. Antigenele sunt preparate din tulpini selectate de virus multiplicat pe monostraturi de celule BHK-21. Supernatantul nepurificat este utilizat și pretitrat în conformitate cu protocolul, dar fără adăugare de ser, pentru a da o diluție care după adăugarea unui volum egal de PBST (tampon fosfat salin conținând 0,05% Tween -20 și indicator roșu fenol) ce va da o densitate optică între 1,2 și 1,5. Virușii pot fi utilizați inactivați. PBST este utilizat
EUR-Lex () [Corola-website/Law/259610_a_260939]
-
de testat sunt diluate în PBST. Procedeu: 1. Plăcile ELISA sunt căptușite cu 50 μl de seruri antivirale de iepure, peste noapte, într-o cameră umedă și la temperatura camerei. 2. Cincizeci de microlitri din fiecare ser de testat în diluții serice în baza 2, în duplicat, pornind de la 1/4 sunt preparați în plăci de microtitrare cu godeuri multiple cu fund sub forma literei "U" (plăci carrier). Sunt adăugați cincizeci de microlitri dintr-o doză constantă de antigen în fiecare
EUR-Lex () [Corola-website/Law/259610_a_260939]
-
plăci de microtitrare cu godeuri multiple cu fund sub forma literei "U" (plăci carrier). Sunt adăugați cincizeci de microlitri dintr-o doză constantă de antigen în fiecare godeu și amestecul este lăsat peste noapte la 4°C. Adăugarea antigenului reduce diluția de start a serului la 1/8. 3. Plăcile ELISA sunt spălate de cinci ori cu PBST. 4. Cincizeci de microlitri de amestec ser/antigen sunt apoi transferați din plăcile carrier în plăcile ELISA căptușite cu ser de iepure și
EUR-Lex () [Corola-website/Law/259610_a_260939]
-
4) soluție 1,25 M. Plăcile sunt citite spectofotometric la 492 nm la un cititor ELISA legat la un microcomputer. Martori: Pentru fiecare antigen se utilizează 40 de godeuri ce nu conțin ser dar conțin antigen diluat în PBST; o diluție binara în serie, dublă de antiser de referință, omolog bovin; o diluție binara în serie, dublă de ser negativ bovin. Interpretare: Titrurile de anticorpi sunt exprimate că diluție finală a serului de testat ce dă 50% din valoarea medie a
EUR-Lex () [Corola-website/Law/259610_a_260939]
-
la un cititor ELISA legat la un microcomputer. Martori: Pentru fiecare antigen se utilizează 40 de godeuri ce nu conțin ser dar conțin antigen diluat în PBST; o diluție binara în serie, dublă de antiser de referință, omolog bovin; o diluție binara în serie, dublă de ser negativ bovin. Interpretare: Titrurile de anticorpi sunt exprimate că diluție finală a serului de testat ce dă 50% din valoarea medie a densităților optice înregistrată în godeurile de control al virusului unde serul de
EUR-Lex () [Corola-website/Law/259610_a_260939]
-
godeuri ce nu conțin ser dar conțin antigen diluat în PBST; o diluție binara în serie, dublă de antiser de referință, omolog bovin; o diluție binara în serie, dublă de ser negativ bovin. Interpretare: Titrurile de anticorpi sunt exprimate că diluție finală a serului de testat ce dă 50% din valoarea medie a densităților optice înregistrată în godeurile de control al virusului unde serul de testat este absent. Titrurile superioare valorii de 1/40 sunt considerate pozitive. Referințe: Hamblin C., Barnett
EUR-Lex () [Corola-website/Law/259610_a_260939]
-
Gastroenterita transmisibila (GET) Testul de seroneutralizare va fi efectuat în conformitate cu următorul protocol: Serul: Toate serurile, înainte de utilizare, sunt inactivate prin căldură la 56°C timp de 30 de minute. Procedeu: Testul de neutralizare cu virus constant și variind antigenul (aceeași diluție de virus cu diluții diferite de ser) pe plăci de microtitrare folosește celule A72 (linie celulară tumorala de câine) sau alte sisteme celulare sensibile. Virusul gastroenteritei transmisibile este utilizat la 100TCID50 per 0,025 ml; probe de ser nediluat inactivat
EUR-Lex () [Corola-website/Law/259610_a_260939]
-
de seroneutralizare va fi efectuat în conformitate cu următorul protocol: Serul: Toate serurile, înainte de utilizare, sunt inactivate prin căldură la 56°C timp de 30 de minute. Procedeu: Testul de neutralizare cu virus constant și variind antigenul (aceeași diluție de virus cu diluții diferite de ser) pe plăci de microtitrare folosește celule A72 (linie celulară tumorala de câine) sau alte sisteme celulare sensibile. Virusul gastroenteritei transmisibile este utilizat la 100TCID50 per 0,025 ml; probe de ser nediluat inactivat sunt amestecate cu un
EUR-Lex () [Corola-website/Law/259610_a_260939]
-
37°C. Titrurile de ser mai mici de 'bd (ser nediluat) sunt considerate negative. Dacă probele de ser sunt toxice pentru culturile tisulare, acele seruri pot fi diluate 'bd înainte de a fi utilizate în testare. Aceasta va fi echivalent cu diluția finală de ser 'bc. Titrurile de ser mai mici de 'bc (diluție finală) sunt considerate, în acest caz, negative. Boală veziculoasa a porcului Testele pentru boala veziculoasa a porcului vor fi efectuate în conformitate cu Decizia Comisiei 2000/428/CE transpusa prin
EUR-Lex () [Corola-website/Law/259610_a_260939]
-
considerate negative. Dacă probele de ser sunt toxice pentru culturile tisulare, acele seruri pot fi diluate 'bd înainte de a fi utilizate în testare. Aceasta va fi echivalent cu diluția finală de ser 'bc. Titrurile de ser mai mici de 'bc (diluție finală) sunt considerate, în acest caz, negative. Boală veziculoasa a porcului Testele pentru boala veziculoasa a porcului vor fi efectuate în conformitate cu Decizia Comisiei 2000/428/CE transpusa prin "Normă sanitară veterinară privind procedurile de diagnostic, metodele de prelevare de probe
EUR-Lex () [Corola-website/Law/259610_a_260939]
-
albastre prezenți în serul de testat blochează reactivitatea anticorpilor monoclonali (Mab) și determină o reducere a culorii așteptate, dezvoltată după adăugarea de anticorpi anti-șoarece marcați cu enzimă și după adăugarea de cromogen/substrat. Serul poate fi testat la o singură diluție unică de 1:5 (test spot - apendice 1) sau poate fi titrat (titrarea serului - apendice 2) pentru a da diluția finală. Valorile inhibiției mai mari de 50% pot fi considerate pozitive. Materiale și reagenți: 1. Plăci corespunzătoare pentru microtitrare ELISA
EUR-Lex () [Corola-website/Law/259612_a_260941]
-
adăugarea de anticorpi anti-șoarece marcați cu enzimă și după adăugarea de cromogen/substrat. Serul poate fi testat la o singură diluție unică de 1:5 (test spot - apendice 1) sau poate fi titrat (titrarea serului - apendice 2) pentru a da diluția finală. Valorile inhibiției mai mari de 50% pot fi considerate pozitive. Materiale și reagenți: 1. Plăci corespunzătoare pentru microtitrare ELISA. 2. Antigen: furnizat că și concentrat de extract celular, preparat conform descrierii anterioare și stocat la -20°C sau -70
EUR-Lex () [Corola-website/Law/259612_a_260941]
-
și conjugat. Control negativ (C-): Godeurile 2A și 2B sunt controale negative ce conțin antigen BTV, antiser BTV negativ, Mab și conjugat. Seruri test: Pentru examinări serologice pe scară largă și evidențiere rapidă, pot fi testate seruri la o singură diluție de 1:5 (apendice 1). În mod alternativ, 10 seruri pot fi testate peste o diluție cuprinsă între 1:5 și 1:640 (apendice 2). Aceste godeuri oferă o indicație asupra titrului de anticorpi în serurile de testat. Procedura: 1
EUR-Lex () [Corola-website/Law/259612_a_260941]
-
antiser BTV negativ, Mab și conjugat. Seruri test: Pentru examinări serologice pe scară largă și evidențiere rapidă, pot fi testate seruri la o singură diluție de 1:5 (apendice 1). În mod alternativ, 10 seruri pot fi testate peste o diluție cuprinsă între 1:5 și 1:640 (apendice 2). Aceste godeuri oferă o indicație asupra titrului de anticorpi în serurile de testat. Procedura: 1. Se diluează antigen BTV în PBS la concentrație de pretitrare, sonicat rapid pentru a dispersa virus
EUR-Lex () [Corola-website/Law/259612_a_260941]
-
cu fața în jos pe o hârtie de filtru) pe hârtie de filtru. 3. Control godeuri: Se adaugă 100 μl de tampon de blocare în godeurile Cc. Se adaugă 50 μl de seruri negative și pozitive de controlat, la o diluție de 1:5 (10 μl ser + 40 μl tampon de blocare), în godeuri respectiv C-, C+ și C++. Se adaugă 50 μl tampon de blocare în godeurile pentru controlul Mab. Metodă de titrare Spot: se adaugă o diluție de 1
EUR-Lex () [Corola-website/Law/259612_a_260941]
-
la o diluție de 1:5 (10 μl ser + 40 μl tampon de blocare), în godeuri respectiv C-, C+ și C++. Se adaugă 50 μl tampon de blocare în godeurile pentru controlul Mab. Metodă de titrare Spot: se adaugă o diluție de 1:5 din fiecare ser de testat în tampon de blocare pentru godeurile duplicat ale coloanelor de la 3 la 12 (10 μl ser + 40 μl tampon de blocare), sau Metodă de titrare a serului: Se prepară o diluție în
EUR-Lex () [Corola-website/Law/259612_a_260941]
-
o diluție de 1:5 din fiecare ser de testat în tampon de blocare pentru godeurile duplicat ale coloanelor de la 3 la 12 (10 μl ser + 40 μl tampon de blocare), sau Metodă de titrare a serului: Se prepară o diluție în serie, în binare din fiecare proba de testat (1:5 la 1:640) în tampon de blocare de-a lungul a opt godeuri, pe câte o singură coloana de la 3 la 12. 4. Imediat dupa adăugarea serurilor de testat
EUR-Lex () [Corola-website/Law/259612_a_260941]
-
11. Se îndepărtează supernatantul, se scurge complet și se resuspendă în PBS prin sonicare. Se stochează antigenul alicotat la -20°C. Titrare de antigen ELISA al bolii limbii albastre: Antigenul ELISA pentru boala limbii albastre este titrat prin ELISA indirectă. Diluții binare de antigen sunt titrate față de o diluție constantă (1/100) de anticorpi monoclonali 3-17-A3. Protocolul este următorul: 1. Se titrează o diluție de 1:20 în PBS de antigen al bolii limbii albastre în raport cu o diluție serica binara (50
EUR-Lex () [Corola-website/Law/259612_a_260941]
-
se resuspendă în PBS prin sonicare. Se stochează antigenul alicotat la -20°C. Titrare de antigen ELISA al bolii limbii albastre: Antigenul ELISA pentru boala limbii albastre este titrat prin ELISA indirectă. Diluții binare de antigen sunt titrate față de o diluție constantă (1/100) de anticorpi monoclonali 3-17-A3. Protocolul este următorul: 1. Se titrează o diluție de 1:20 în PBS de antigen al bolii limbii albastre în raport cu o diluție serica binara (50 μl/godeu) pe placă de microtitrare, utilizând o
EUR-Lex () [Corola-website/Law/259612_a_260941]
-
antigen ELISA al bolii limbii albastre: Antigenul ELISA pentru boala limbii albastre este titrat prin ELISA indirectă. Diluții binare de antigen sunt titrate față de o diluție constantă (1/100) de anticorpi monoclonali 3-17-A3. Protocolul este următorul: 1. Se titrează o diluție de 1:20 în PBS de antigen al bolii limbii albastre în raport cu o diluție serica binara (50 μl/godeu) pe placă de microtitrare, utilizând o pipeta multicanal. 2. Se incubează timp de o oră la 37°C pe un agitator
EUR-Lex () [Corola-website/Law/259612_a_260941]
-
prin ELISA indirectă. Diluții binare de antigen sunt titrate față de o diluție constantă (1/100) de anticorpi monoclonali 3-17-A3. Protocolul este următorul: 1. Se titrează o diluție de 1:20 în PBS de antigen al bolii limbii albastre în raport cu o diluție serica binara (50 μl/godeu) pe placă de microtitrare, utilizând o pipeta multicanal. 2. Se incubează timp de o oră la 37°C pe un agitator orbital. 3. Se spală cu PBS de trei ori. 4. Se adaugă 50 μl
EUR-Lex () [Corola-website/Law/259612_a_260941]
-
godeu) pe placă de microtitrare, utilizând o pipeta multicanal. 2. Se incubează timp de o oră la 37°C pe un agitator orbital. 3. Se spală cu PBS de trei ori. 4. Se adaugă 50 μl de anticorpi monoclonali 3-17-A3 (diluție 1/100) în fiecare godeu al plăcii de microtitrare. 5. Se incubează o oră la 37°C pe un agitator orbital. 6. Se spală cu PBS de trei ori. 7. Se adaugă 50 μl de globulina de iepure anti-șoarece conjugat
EUR-Lex () [Corola-website/Law/259612_a_260941]
-
9. Adăugare de substrat și cromogen așa cum este descris anterior. Se stopează reacția după 10 minute prin adăugare de acid sulfuric soluție 1 Molar. În proba de competiție, anticorpii monoclonali trebuie să fie în exces; prin urmare este aleasă o diluție de antigen descendentă pe curbă de titrare (nu în regiunea în platou) care dă aproximativ 0,8 DO după 10 minute. B. Testul de imunodifuzie în gel de agar va fi efectuat în conformitate cu următorul protocol: Antigen: Antigenul precipitat este preparat
EUR-Lex () [Corola-website/Law/259612_a_260941]
-
Rino-traheita infecțioasă bovina (IBR)/Vulvo-vaginita pustuloasa bovina (IPV) Testul de seroneutralizare va fi efectuat în conformitate cu următorul protocol: Serul: Toate serurile, înainte de utilizare, sunt inactivate la cald la 56°C, timp de 30 minute. Procedeu: Testul de seroneutralizare cu ser în diluție constantă și antigen în diluții diferite pe placă de microtitrare, utilizând MDBK sau alte celule susceptibile. Tulpina de virus Oxford, tulpina Colorado sau orice altă tulpina de referință este utilizată la un titru de 100 TCID^50/0,025 ml
EUR-Lex () [Corola-website/Law/259612_a_260941]
-
pustuloasa bovina (IPV) Testul de seroneutralizare va fi efectuat în conformitate cu următorul protocol: Serul: Toate serurile, înainte de utilizare, sunt inactivate la cald la 56°C, timp de 30 minute. Procedeu: Testul de seroneutralizare cu ser în diluție constantă și antigen în diluții diferite pe placă de microtitrare, utilizând MDBK sau alte celule susceptibile. Tulpina de virus Oxford, tulpina Colorado sau orice altă tulpina de referință este utilizată la un titru de 100 TCID^50/0,025 ml; probe inactivate de ser nediluat
EUR-Lex () [Corola-website/Law/259612_a_260941]