356 matches
-
000 rpm timp de 10 minute. 8. Stocați supernatantul la +4șC și resuspendați peleta celulară rămasă în 10- 20 ml tampon liză. 9. Sonicați și limpeziți, stocând supernatantul la fiecare fază, în total de trei ori. 10. Comasați supernantanții și centrifugați la 24 000 rpm timp de 120 de minute la +4ș C pe o pernă de 5 ml de sucroză 40% (w/v în PBS) utilizând tuburi de centrifugare Beckmann de 30 ml și un rotor SW 28. 11. Aruncați
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
pentru 15 - 30 de minute. 1.4. Bacteriile se extrag din taloanele printr-una din următoarele proceduri: (i) Maceratul se decantează încet într-un tub de centrifugare lăsând resturile în recipient sau în sac. Dacă maceratul decantat este tulbure, se centrifughează timp de 10 minute la cel mult 180 g la o temperatură sub 10°C. Se centrifughează maceratul decantat sau supranatantul din prima etapă de centrifugare la 7 000 g timp de 15 minute sau la 10 000 g timp
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
i) Maceratul se decantează încet într-un tub de centrifugare lăsând resturile în recipient sau în sac. Dacă maceratul decantat este tulbure, se centrifughează timp de 10 minute la cel mult 180 g la o temperatură sub 10°C. Se centrifughează maceratul decantat sau supranatantul din prima etapă de centrifugare la 7 000 g timp de 15 minute sau la 10 000 g timp de 10 minute la o temperatură sub 10°C. Se îndepărtează supranatantul fără a deranja extractul concentrat
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
ii) Se filtrează maceratul printr-un sistem de filtrare cu mărimea porilor de 40 - 100 μm. Se accelerează filtrarea utilizând o pompă de vid. Se colectează filtratul într-un tub de centrifugare. Se spală filtrul cu tamponul de macerare. Se centrifughează filtratul la 7 000 g timp de 15 minute sau la 10 000 g timp de 10 minute la o temperatură sub 10°C. Se îndepărtează supranatantul fără a deranja extractul concentrat. 1.5 Se face o nouă suspensie a
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
egale și se transferă fiecare parte într-o microfiolă. Una dintre microfiole se folosește pentru testare. Restul extractului se conservă pe perioada testelor la temperatura de 4°C. Se adaugă 10 - 25% (v/v) glicerol steril în cealaltă microfiolă. Se centrifughează. Se depozitează la - 18°C (săptămâni) sau la - 70°C (luni). 2. Testul IF Se folosește antiserul pentru Ralstonia solanacearum, preferabil rasa 3/biovar 2. Se determină titrul unei suspensii de 106 celule pe ml din sușa omologă de Ralstonia
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
μl din extractul concentrat resuspendat într-o microfiolă. Se încălzește timp de 4 minute la 100 șC. Se pune microfiola la gheață. 3.2. Se adaugă un volum egal de tampon de acoperire din carbonat dublu concentrat (apendicele 5). Se centrifughează. 3.3. Se aplică 100 μl alicote fiecăreia dintre minim ultimele două puțuri ale plăcii de microtitrare. Se incubează o oră la 37 șC sau peste noapte la 4 șC. 3.4. Se scot extractele din puțuri. Se spală puțurile
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
45 μl - 48 μl din amestec în fiole PCR sterile. Fiolele cu amestecul de reacție PCR se păstrează la gheață. Pentru volume de reacție de 25 μl: Se diminuează corespunzător componenții. 4.5. Amplificarea PCR 4.5.1. Opțional: se centrifughează pulsatoriu fiolele cu eșantionul fiert și cu controlul pozitiv. Se adaugă în fiolele cu amestecul de reacție PCR, în ordinea specificată, 2-5 μl din eșantion sau eșantioane, apă și controlul pozitiv. Se pun fiolele în blocul de încălzire al ciclorului
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
2 Se incubează timp de 48 de ore și în nici un caz mai mult de 72 de ore la temperatura de 28°C, fără a închide ermetic dopul tubului, pentru a permite aerisirea. 7.3 Se fixează dopul și se centrifughează. Se utilizează alicote pentru testul IF (prezenta secțiune, 2.), testul ELISA (prezenta secțiune, 3.) și/sau testul PCR (prezenta secțiune, 4.). 8. Testul de patogenicitate A se vedea secțiunea II, 4.3. Apendicele 1 Medii nutritive pentru izolarea și cultura
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
15 minute și se completează cu soluție de extragere (4.4). Se transferă aproximativ 10 ml din acest extract într-o eprubetă prevăzută cu dop. Eprubeta se introduce în refrigerator (3.1) timp de aproximativ 30 minute. Extractul rece se centrifughează timp de 5 minute la aproximativ 2 000 rpm și se decantează imediat. Soluția decantată se lasă să se răcească la temperatura camerei. Se pipetează 5 ml din soluția decantată într-un balon cotat de 100 ml și se completează
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
soluție de acid tricloroacetic (5.1.) timp de două minute, amestecându-se cu ajutorul unui agitator magnetic (6.4). Tubul se introduce într-o baie de apă (6.9) și se lasă timp de 60 de minute. 8.3.3. Se centrifughează (6.2) timp de 10 minute la 2 200 g sau se filtrează printr-o hârtie (6.6), eliminându-se primii 5 ml de filtrat. 8.4. Determinarea cromatografică 8.4.1. Se injectează 15 - 30 μl de supernatant sau
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
soluție de acid tricloroacetic (5.1.) timp două minute, amestecându-se puternic cu ajutorul unui agitator magnetic (6.4). Tubul se introduce într-o baie de apă (6.9) și se lasă timp de 60 de minute. 8.3.3. Se centrifughează (6.2) timp de 10 minute sau se filtrează prin hârtie (6.6), eliminându-se primii 5 ml de filtrat. 8.4. Determinarea cromatografică 8.4.1. Se efectuează analiza HPLC conform descrierii din anexa XVIII. Dacă se obține un
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
din soluția de triptamină de 0,15 mM (7-1) cu ajutorul unei seringi (5.7) și se completează la volum cu metanol (4.2.1). Se amestecă cu grijă prin răsturnare și se sonichează (5.8) timp de 15 minute. Se centrifughează (5.9) la 27 000 x g timp de 10 minute și se colectează supranatantul într-o fiolă de sticlă (5.10). Notă: Soluția probă se depozitează la 4°C până la finalizarea analizei HPLC. 7.3. Prepararea soluției etalon extern
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
un tub de centrifugarea de 50 ml. Se adaugă 30 ml de soluție de citrat trisodic (4.1) încălzit în prealabil la 45°C. Se amestecă timp de cel puțin cinci minute cu ajutorul unui agitator magnetic. 6.2.2. Se centrifughează la 500 g (2 000 - 3 000 rpm) timp de 10 minute și se decantează cu atenție supranatantul apos limpede într-un pahar de laborator de 150 - 200 ml, pentru a nu se pierde material. 6.2.3. Se realizează
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
prin termostat la 37°C timp de 15 - 20 minute pentru a se obține un echilibru salin. Acesta este indicat de o ușoară tulburare. 6.3.2. Lichidul se transferă în unul (sau în două) tuburi de centrifugare și se centrifughează la 2 000 g timp de 10 minute pentru a se îndepărta substanțele precipitate. Se transferă supranatantul, fără a se spăla sedimentul, în unul (sau în două) tuburi de centrifugare. 6.3.3. Supranatantul se aduce din nou la temperatura
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
sau două minute. 6.3.4. Proba se introduce din nou în baia de apă și se lasă la o temperatură de 37°C timp de 15 minute. Proba se scoate din baie, iar coagul se sparge prin amestecare. Se centrifughează la 2 000 g timp de 10 minute. Se filtrează supranatantul printr-un filtru de hârtie adecvat 23 (Whatman nr. 541 sau echivalent) și se păstrează filtrul de hârtie. Precipitatul se clătește în tubul de centrifugare cu 50 ml de
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
filtrează supranatantul printr-un filtru de hârtie adecvat 23 (Whatman nr. 541 sau echivalent) și se păstrează filtrul de hârtie. Precipitatul se clătește în tubul de centrifugare cu 50 ml de apă la aproximativ 35°C amestecându-se precipitatul. Se centrifughează din nou la 2 000 g timp de 10 minute. Supranatantul se filtrează prin filtrul de hârtie păstrat. 6.4. Determinarea azotului din cazeină 6.4.1. După clătire precipitatul se transferă cantitativ în filtrul de hârtie rămas de la 6
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
sub formă de pudră, se pun într-un tub de centrifugă și se adaugă 5 ml de soluție de extragere ce conține etalonul intern. Se pun într-o baie cu ultrasunete și se lasă timp de 20 de minute. Se centrifughează timp de cinci minute la 3 000 rot/min, apoi se extrage soluția THC supernatantă. Se injectează soluția în cromatograf și se efectuează o analiză cantitativă. 3.4. Cromatografia în fază gazoasă (a) Aparatură de laborator - cromatograf în fază gazoasă
jrc4878as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90046_a_90833]
-
unui scalpel, se omogenizează după descrierea de mai sus și se plasează în suspensie în mediul de transport. Raportul final între țesuturi și mediul de transport trebuie să fie ajustat în laborator la 1:10. 3. Centrifugarea omogenatului Omogenatul este centrifugat într-o centrifugă refrigerată la o temperatură cuprinsă între 2 și 5°C, la 2000 - 4000 x g timp de 15 minute, iar lichidul de suprafață este colectat și tratat, fie timp de 4 ore la 15°C, fie timp
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
expedierea eșantioanelor de pești A se vedea partea II 3. I.3. Colectarea de material diagnostic suplimentar A se vedea partea II 4. II.1. Omogenizarea organelor A se vedea partea I II 2. II.2. Centrifugarea omogenatului Omogenatul este centrifugat într-o centrifugă răcită la o temperatură cuprinsă între 2 și 5°C, la 2000-4000 x g timp de 15 minute, iar lichidul de suprafață este colectat și tratat timp de patru ore la 15°C cu antibiotice (de exemplu
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
3.8. Soluție Carrez II: se dizolvă în apă 10,6 g de ferocianură de potasiu, K4[Fe(CN)4] 3H2O. Se completează până la 100 ml cu apă. 3.9. Carbon activ, exceptând clorurile care nu-l absorb. 4. Aparatura Centrifugă (culbutor): aproximativ 35 până la 40 rotații pe minut. 5. Mod de lucru 5.1. Prepararea soluției În funcție de natura probei, se prepară o soluție conform indicațiilor din 5.1.1., 5.1.2. sau 5.1.3. Se efectuează, în paralel
jrc125as1971 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85260_a_86047]
-
produse bogate în făină de in și alte produse bogate în mucilagii și în substanțe coloidale (de exemplu: amidon dextrinat) Se prepară o soluție conform indicației de la 5.1.2, dar nu se filtrează. Se decantează (dacă este necesar, se centrifughează), se recoltează 100 ml lichid de la suprafață și se introduce în balonul gradat de 200 ml. Se amestecă cu acetonă (3.6.) și se completează la volum cu acest solvent, se omogenizează și se filtrează. 5.2. Titrarea Se introduce
jrc125as1971 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85260_a_86047]
-
de mercur ca agent conservator. 3.11. Acid sulfuric 6 N. 3.12. Soluție 30 % (m/v) iodură de potasiu. 3.13. Granule de piatră ponce, fierte în acid clorhidric, spălate în apă și uscate. 3.14. Izopentanol. 4. Aparatura Centrifugă (culbutor):aproximativ 35-40 rot/min. 5. Mod de lucru 5.1. Punerea în soluție Se cântărește, cu o precizie de 1 mg, o cantitate de 2,5 g de probă și se introduce într-un balon gradat de 250 ml
jrc125as1971 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85260_a_86047]
-
de antibiotic este mai mic de 10 ppm, fie proba omogenizată sau fracțiunea cea mai fină separată prin sită pot fi folosite, antibioticele putând fi găsite în principal în această fracțiune. Se suspendă proba în amestec (3.5) și se centrifughează. Se colectează lichidul supernatant și se folosește direct sau diluat, dacă este necesar, cu amestecul (3.5) pentru a obține concentrații ale antibioticelor de aproximativ 100 μg pe ml (6.1) și 5 μg pe ml (6.2). 7. Detectarea
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
pe o platformă de agitare. Apoi se diluează imediat cu soluția tampon de fosfat (4.3) conform indicațiilor date în tabelul de mai jos pentru a obține concentrația U2. Concentrația formamidă a acestei soluții nu trebuie să depășească 40 %. Se centrifughează sau se decantează pentru a obține o soluție clară. Apoi se prepară concentrațiile U4, U2 șiU1 prin diluări succesive (1 + 1) folosind soluție tampon de fosfat (4.3). Antibiotic CTC OTC TC Conținut presupus de ppm 10 50 10 50
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]
-
ml 6. Extracție Se ia o probă de testat de 2 - 10 g, în funcție de conținutul de oleandomicină presupus al probei, se adaugă 100 ml din soluție (4.7) și se agită 30 de minute pe o platformă de agitare. Se centrifughează, se ia o parte alicotă din extract și se diluează cu soluția (4.6) pentru a obține o concentrație presupusă de oleandomicină de 0,1 μg pe ml (= U2). Apoi se prepară concentrațiile U4, U2 și U1, prin diluări (1
jrc149as1972 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85284_a_86071]