468 matches
-
lipazei: 4.21. pH-metru 4.22. Agitator cu spirală 4.23. Biuretă de 5 mililitri 4.24. Cronometru. Pentru prepararea eventuală a lipazei: 4.25. Agitator de laborator potrivit pentru dispersia și amestecul substanțelor eterogene. 5. REACTIVI 5.1. n-hexan, sau în lipsa acestuia, eter de petrol (punct de fierbere 30-50°C), de calitate cromatografică. 5.2. 2-propanol (sau etanol), 95°C (V/V), de calitate analitică. 5.3. 2-propanol (sau etanol) în soluție apoasă 1/1. 5.4. Eter dietilic
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
V), de calitate analitică. 5.3. 2-propanol (sau etanol) în soluție apoasă 1/1. 5.4. Eter dietilic fără peroxizi. 5.5. Acetonă. 5.6. Acid formic de minimum 98 % (m/m). 5.7. Solvent de developare: amestec de n-hexan (5.1.), de eter dietilic (5.4) și de acid formic (5.6.), conform proporțiilor 70/30/1 (V/V/V). 5.8. Alumină activată pentru cromatografie, neutră, cu grad de activitate Brockmann 1. 5.9. Pudră de siliciu, cu
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
se trece pe alumină conform indicațiilor de la pct. 6.2. 6.1. Neutralizarea cu alcalin în prezența unui solvent Într-o pâlnie de decantare (4.6.) se introduc aproximativ 10 g de ulei brut și se adaugă 100 ml de hexan (5.1.), 50 ml de 2-propanol (5.2.), câteva picături de soluție de fenolftaleină (5.16.) și o cantitate de soluție de hidroxid de sodiu (5.11) corespunzătoare conținutului de acizi liberi ai uleiului, majorată cu 0,3 %. Se agită
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
energic timp de un minut, se adaugă 50 ml, se agită din nou și se lasă în repaus. După separare, se elimină stratul inferior de săpun. Se elimină, de asemenea, toate straturile intermediare (mucilagii, materii insolubile). Se spală soluția de hexan și de ulei neutralizat cu mai multe doze de 25-30 ml de soluție de 2-propanol (5.3) până când dispare culoarea roz a fenolftaleinei. Se elimină cea mai mare parte de hexan prin distilarea sub vid în evaporatorul rotativ (4.18
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
straturile intermediare (mucilagii, materii insolubile). Se spală soluția de hexan și de ulei neutralizat cu mai multe doze de 25-30 ml de soluție de 2-propanol (5.3) până când dispare culoarea roz a fenolftaleinei. Se elimină cea mai mare parte de hexan prin distilarea sub vid în evaporatorul rotativ (4.18) și se usucă uleiul la 30-40°C (tot sub vid) cu ajutorul unui curent de azot pur până la eliminarea hexanului. 6.2. Purificarea prin trecere pe alumină Se prepară o suspensie de
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
dispare culoarea roz a fenolftaleinei. Se elimină cea mai mare parte de hexan prin distilarea sub vid în evaporatorul rotativ (4.18) și se usucă uleiul la 30-40°C (tot sub vid) cu ajutorul unui curent de azot pur până la eliminarea hexanului. 6.2. Purificarea prin trecere pe alumină Se prepară o suspensie de 15 g de alumină activată (5.8) în 50 ml de hexan (5.1) și se toarnă, agitând încontinuu, pe coloana cromatografică (4.7). Se procedează la tasarea
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
usucă uleiul la 30-40°C (tot sub vid) cu ajutorul unui curent de azot pur până la eliminarea hexanului. 6.2. Purificarea prin trecere pe alumină Se prepară o suspensie de 15 g de alumină activată (5.8) în 50 ml de hexan (5.1) și se toarnă, agitând încontinuu, pe coloana cromatografică (4.7). Se procedează la tasarea aluminei și se lasă să scadă nivelul solventului până la 1 sau 2 mm deasupra absorbantului. Se toarnă cu grijă pe coloană o soluție de
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
coloana cromatografică (4.7). Se procedează la tasarea aluminei și se lasă să scadă nivelul solventului până la 1 sau 2 mm deasupra absorbantului. Se toarnă cu grijă pe coloană o soluție de 5 g de ulei în 25 ml de hexan (5.1). Se colectează în totalitate efluentul coloanei într-un balon (4.1). 7. PREGĂTIREA PLĂCILOR CROMATOGRAFICE Se curăță temeinic plăcile de sticlă (4.13) cu etanol, eter, petrol și acetonă pentru a elimina toate urmele de materii grase. Într-
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
8. MODUL DE LUCRU 8.1. Hidroliza cu lipază pancreatică Se cântăresc aproximativ 0,1 g de probă preparată în eprubeta de centrifugare (4.8). Dacă este vorba de o substanță grasă solidă, se dizolvă în 0,2 ml de hexan încălzind ușor, dacă este necesar. Se adaugă 20 ml de lipază (5.10) și 2 ml de soluție tampon (5.15). Se agită convenabil, dar prudent, apoi se adaugă 0,5 ml de soluție de colat de sodiu (5.14
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
de 95 % la 250 nm, - un alt solvent adecvat capabil să dizolve perfect substanța grasă (alcoolul etilic pentru uleiul de ricin). 4.2. Alumină bazică pentru cromatografia pe coloană, preparată și controlată conform descrierii de la apendicele 1. 4.3. n-Hexan pentru cromatografie. 5. MOD DE LUCRU 5.1. Proba examinată trebuie să fie perfect omogenă și lipsită de impurități în suspensie. Uleiurile lichide cu temperatură ambiantă sunt filtrate pe hârtie la o temperatură de aproximativ 30°C, grăsimile solide sunt
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
adecvate mai concentrate sau mai diluate. 5.4. În cazul în care ar fi necesară determinarea extincțiilor specifice după trecerea pe alumină, se procedează în felul următor: se introduc în coloana cromatografică 30 g de alumină bazică în suspensie în hexan; se elimină excesul de hexan după tasarea absorbantului, sau cel puțin până la aproximativ 1 cm peste nivelul superior al aluminei. Se dizolvă 10 g de materie grasă, omogenizată și filtrată conform descrierii de la pct. 5.1, în 100 ml de
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
diluate. 5.4. În cazul în care ar fi necesară determinarea extincțiilor specifice după trecerea pe alumină, se procedează în felul următor: se introduc în coloana cromatografică 30 g de alumină bazică în suspensie în hexan; se elimină excesul de hexan după tasarea absorbantului, sau cel puțin până la aproximativ 1 cm peste nivelul superior al aluminei. Se dizolvă 10 g de materie grasă, omogenizată și filtrată conform descrierii de la pct. 5.1, în 100 ml de hexan și se toarnă această
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
se elimină excesul de hexan după tasarea absorbantului, sau cel puțin până la aproximativ 1 cm peste nivelul superior al aluminei. Se dizolvă 10 g de materie grasă, omogenizată și filtrată conform descrierii de la pct. 5.1, în 100 ml de hexan și se toarnă această soluție în coloană. Se colectează eluantul și a se evapora solventul în vid și la o temperatură mai mică de 25°C. Se acționează imediat asupra materiei grase obținute conform descrierii de la pct. 5.2. 6
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
mare de 3 %, se utilizează numai metodele cu metanol și cu acid clorhidric sau sulfat dimetilic, - pentru determinările prin cromatografie în fază gazoasă a izomerilor trans, se utilizează numai metodele cu metilat de sodiu sau sulfat dimetilic, - metoda cu metanol, hexan și acid sulfuric trebuie să se utilizeze pentru prepararea esterilor metilici ai micilor cantități de materii grase ce provin din separarea prin cromatografie în strat subțire. Prezența nesaponificabilelor poate fi neglijată dacă nu depășește 3 %, în caz contrar, esterii metilici
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
a cinci metode de preparare a esterilor metilici din materii grase: (a) cu metilat de sodiu; (b) cu metilat de sodiu în balon închis; (c) cu metanol și acid clorhidric în balon închis; (d) cu sulfat dimetilic; (e) cu metanol, hexan și acid sulfuric. Metoda A 2. PRINCIPIU Substanța grasă de analizat este încălzită cu reflux cu ajutorul alcoolului metilic și al metilatului de sodiu. Esterii metilici obținuți sunt extrași cu eter etilic. 3. INSTRUMENTE 3.1. Balon de 100 ml cu
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
40-50 mm; diametrul 14-16 mm). 3.2. Pipete gradate de 1 și de 2 mm. 4. REACTIVI 4.1. Soluție metanolică de acid clorhidric de 2 %. Se prepară cu acid clorhidric gazos și cu metanol anhidru (nota 1). 4.2. Hexan pentru cromatografie în stare gazoasă. 5. MOD DE LUCRU 5.1. Se introduc în balonul de sticlă 0,2 g de substanță grasă deshidratată în prealabil în sulfat de sodiu și filtrată, precum și 2 ml de soluție metanolică de acid
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
balonul la flacără. 5.2. Se menține balonul într-o baie la 100°C timp de patruzeci de minute. 5.3. Se răcește balonul în apă curentă, se deschide, se adaugă 2 ml de apă distilată și 1 ml de hexan. Se centrifughează și se prelevează faza hexanică, care este gata de folosire. Metoda D 2. PRINCIPIU Substanța grasă de analizat este saponificată cu o soluție metilalcoolică de hidroxid de potasiu, apoi tratată cu sulfat dimetilic. După adăugarea acidului clorhidric, separarea
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
Nota A: Dacă separarea esterilor metilici nu se produce în mod spontan, se adaugă 5 ml de apă în eprubetă și se agită. Metoda E 2. PRINCIPIU Substanța grasă de analizat este încălzită cu ajutorul unui sistem cu reflux, cu metanol, hexan și acid sulfuric. Esterii metilici obținuți sunt extrași cu eter de petrol. 3. INSTRUMENTE 3.1. Eprubetă de aproximativ 20 ml, prevăzută cu un condensator cu reflux de aer, cu o lungime de 1 metru, cu îmbinări din sticlă rodată
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
gradată de 5 ml. 3.3. Pâlnie de decantare de 50 ml. 3.4. Eprubete gradate de 10 și de 25 ml. 3.5. Eprubetă de 15 ml, cu fund conic. 4. REACTIVI 4.1. Reactivi de metilare: metanol anhidru, hexan, acid sulfuric concentrat (d = 1,84), într-un raport de 75:25:1 (V/V/V). 4.2. Eter de petrol la 40-60°C. 4.3. Sulfat de sodiu anhidru. 5. MOD DE LUCRU 5.1. În eprubeta de 20
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
laborator cu tuburi de 100 mm, - pahar de laborator de 250 ml, - baloane de 100 ml, - pâlnie de decantare de 1 litru. 1.1.2. Reactivi - soluție apoasă de hidroxid de sodiu de 12 %, - soluție etanolică de 1 % de fenolftaleină, - hexan pur pentru analiză, - alcool izopropilic pur pentru analiză. 1.1.3. Mod de lucru (a) Uleiuri cu o aciditate exprimată în acid oleic mai mică de 30 % Se introduc, într-un pahar de laborator de 300 mm de formă înaltă
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
uleiul pentru a elimina micile cantități de apă reziduală. (b) Uleiuri cu o aciditate exprimată în acid oleic mai mare de 30 % Într-o pâlnie de decantare de un litru, se introduc 50 g de ulei brut, 200 ml de hexan, 100 ml de alcool izopropilic și o cantitate de soluție de hidroxid de sodiu de 12 % ce corespunde acidității libere a uleiului, cu un supliment de 0,3 %. Se agită energic timp de 1 minut. Să se adauge 100 ml
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
eliminat. În continuare, se trece la spălarea soluției hexanice de ulei neutru cu 50-60 ml dintr-o soluție de alcool izopropilic/apă distilată 1/1 (v/v) până la dispariția colorației roz a fenolftaleinei. Se trece apoi la eliminarea completă a hexanului prin distilare în vid (de exemplu, în evaporatorul rotativ). 1.2. Decolorarea uleiului neutralizat 1.2.1. Aparatură - balon de 250 ml cu 3 gâturi din sticlă rodată ce permit inserarea: (a) unui termometru gradat în grade ce permite citirea
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
presiuni reduse, - concasor mecanic ușor de curățat care permite concasarea fără încălzire și fără diminuarea sensibilă a conținutului lor de apă și de ulei, - cartuș de extracție și vată hidrofilă sau hârtie de filtru, fără produse care se extrag cu hexan, - exsicator, - sită cu găuri cu diametru de 1 mm, - piatră ponce cu granule mici, uscată în prealabil. 1.2. Reactiv n-hexan tehnic al cărui reziduu în urma evaporării complete trebuie să fie mai mic de 0,002 g pentru 100
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
de ulei, - cartuș de extracție și vată hidrofilă sau hârtie de filtru, fără produse care se extrag cu hexan, - exsicator, - sită cu găuri cu diametru de 1 mm, - piatră ponce cu granule mici, uscată în prealabil. 1.2. Reactiv n-hexan tehnic al cărui reziduu în urma evaporării complete trebuie să fie mai mic de 0,002 g pentru 100 de ml. 2. MOD DE LUCRU 2.1. Prepararea probei Se sfărâmă proba pentru laborator, dacă este necesar, în concasorul mecanic bine
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]
-
C 2°C, apoi se răcește timp de cel puțin o oră într-un exsicator. 2.6. Prima extracție Se pune în aparatul de extracție cartușul (sau hârtia de filtru) ce conține proba. Se toarnă în balon cantitatea necesară de hexan. Se adaptează balonul la aparatul de extracție și se plasează totul pe baia cu încălzire electrică. Încălzirea se efectuează în așa fel încât debitul refluxului să fie de cel puțin trei picături pe secundă (fierbere moderată, fără clocote). După 4
jrc1835as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86985_a_87772]