3,282 matches
-
după adăugarea unui anticorp antișoarece marcat enzimatic și a cromogenului/substratului. Serurile pot fi testate într-o singură diluție de 1:5 (testul spot - apendicele 1) sau pot fi titrate (titrarea serului - apendicele 2) pentru a defini punctele limită de diluție. Valorile de inhibiție mai mari decât 50 % pot fi considerate pozitive. Materiale și reactivi 1. Plăci de microtitrare ELISA adecvate. 2. Antigen: furnizat sub formă de concentrat celular, preparat după procedura descrisă în continuare și păstrat la o temperatură de
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
cu ochiul liber). Schema de testare Cc: control conjugat (fără ser/fără anticorp monoclonal); C++: control cu ser puternic pozitiv; C+: control cu ser slab pozitiv; C-: control cu ser negativ; Cm: control al anticorpului monoclonal (fără ser). Apendicele 1: Diluție unică (1:5) - Schemă (40 seruri/placă) ***[PLEASE INSERT THE REST OF THE TABLE FROM THE ORIGINAL]*** Controale Seruri de testare Apendicele 2: Schemă de titrare a serului (10 seruri/placă) ***[PLEASE INSERT THE REST OF THE TABLE FROM THE
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
Control negativ (C-) Godeurile 2A și 2B corespund controalelor negative, care cuprind antigenul BTV, antiserul BTV negativ, AcM și conjugatul. Ser de testare: Pentru studii serologice la scară mare și teste de control rapide, serurile se pot testa într-o diluție unică 1:5 (apendicele 1). Eventual, 10 seruri se pot testa într-o serie de diluții de la 1:5 până la 1:640 (apendicele 2). Vor rezulta informații cu privire la titrul anticorpului din serul de testare. Procedura: 1. Se diluează antigenul BTV
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
negativ, AcM și conjugatul. Ser de testare: Pentru studii serologice la scară mare și teste de control rapide, serurile se pot testa într-o diluție unică 1:5 (apendicele 1). Eventual, 10 seruri se pot testa într-o serie de diluții de la 1:5 până la 1:640 (apendicele 2). Vor rezulta informații cu privire la titrul anticorpului din serul de testare. Procedura: 1. Se diluează antigenul BTV la concentrația pretitrată în PBS, se agită energic cu ajutorul unui aparat cu ultrasunete pentru a dispersa
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
și se golirea godeurilor cu PBS nesteril și se usucă cu hârtie sugativă. 3. Godeurile de control: Se adaugă 100 µl tampon de blocare în godeurile Cc. Se adaugă 50 µl de ser de control pozitiv și negativ, într-o diluție de 1:5 (10 µl de ser + 40 µl de tampon de blocare), în godeurile C-, C + și, respectiv, C++. Se adaugă 50 µl de tampon de blocare în godeurile de control AcM. Metoda de titrare unică: Se adaugă fiecare
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
de 1:5 cu tampon de blocare, in duplicat, in godeurile coloanelor de la 3 la 12 (10 µl de ser + 40 µl de tampon de blocare), conform schemei anterioare. sau Metoda de titrare a serului: Se prepară o serie de diluții în progresie geometrică ale fiecărui eșantion de testare (de la 1:5 la 1:640) într-un tampon de blocare in cele opt godeuri ale fiecărei coloane de la 3 la 12. 4. Imediat după adăugarea serului de testare, se diluează AcM
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
scurgă bine și se repune în suspensie fragmentul în PBS prin sonicare. Se stochează antigenul în părți alicote la -20 °C. Titrarea antigenului virusului BTV pentru ELISA Titrarea antigenului bolii limbii albastre pentru ELISA se face prin tehnica ELISA indirectă. Diluțiile în progresie geometrică ale antigenului se titrează în funcție de o diluție constantă (1/100) de anticorp monoclonal 3-17-A3. Protocolul este următorul: 1. Se titrează antigenul BTV în PBS la o diluție de 1:20 pe o placă de microtitrare într-o
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
prin sonicare. Se stochează antigenul în părți alicote la -20 °C. Titrarea antigenului virusului BTV pentru ELISA Titrarea antigenului bolii limbii albastre pentru ELISA se face prin tehnica ELISA indirectă. Diluțiile în progresie geometrică ale antigenului se titrează în funcție de o diluție constantă (1/100) de anticorp monoclonal 3-17-A3. Protocolul este următorul: 1. Se titrează antigenul BTV în PBS la o diluție de 1:20 pe o placă de microtitrare într-o serie de diluții în progresie geometrică (50 µl/godeu) utilizând
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
limbii albastre pentru ELISA se face prin tehnica ELISA indirectă. Diluțiile în progresie geometrică ale antigenului se titrează în funcție de o diluție constantă (1/100) de anticorp monoclonal 3-17-A3. Protocolul este următorul: 1. Se titrează antigenul BTV în PBS la o diluție de 1:20 pe o placă de microtitrare într-o serie de diluții în progresie geometrică (50 µl/godeu) utilizând o pipetă multicanal. 2. Se incubează o oră la 37 °C într-un agitator orbital. 3. Se spală plăcile de
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
geometrică ale antigenului se titrează în funcție de o diluție constantă (1/100) de anticorp monoclonal 3-17-A3. Protocolul este următorul: 1. Se titrează antigenul BTV în PBS la o diluție de 1:20 pe o placă de microtitrare într-o serie de diluții în progresie geometrică (50 µl/godeu) utilizând o pipetă multicanal. 2. Se incubează o oră la 37 °C într-un agitator orbital. 3. Se spală plăcile de trei ori cu PBS. 4. Se adaugă 50 µl de anticorp monoclonal 3-17-A3
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
C. 9. Se adaugă substrat și cromogen după indicațiile anterioare. Se întrerupe reacția după 10 minute prin adăugarea acidului sulfuric 1 M (50 µl/godeu). În testul de concurență, anticorpul monoclonal trebuie să fie în exces, astfel, se alege o diluție a antigenului ce se găsește pe curba de titrare (nu în zona de platou) care dă aproximativ o DO de 0,8 după 10 minute. B. Testul de imunodifuzie în gel de agar se efectuează în conformitate cu protocolul următor: Antigen: Se
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
Interpretare: Rezultatele testului de neutralizare și titrul virusului folosit la testare se înregistrează după trei până la șase zile de incubare la temperatura de 37 °C. Titrurile serului se consideră negative, în cazul în care nu există nici o neutralizare la o diluție de 1/2 (ser nediluat). B. Orice alt test recunoscut în contextul Deciziei 93/42/ CE a Comisiei privind garanțiile suplimentare referitoare la rinotraheita infecțioasă bovină pentru bovinele destinate statelor membre sau regiunilor acestora indemne de boală. Febra aftoasă (FMD
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
sau alte antibiotice adecvate. Serurile se inactivează la temperatura de 56 °C timp de 30 de minute și se folosesc volume de 0,05 ml din acestea pentru prepararea unor serii duble pe plăci de microtitrare cu ajutorul unei anse de diluție de 0,05 ml. Se adaugă apoi în fiecare godeu virus pretitrat, diluat de asemenea în mediu de cultură fără ser, conținând 100 TCID50/0,05 ml. După incubarea la temperatura de 37 °C timp de o oră pentru a
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
a serului, un control al mediului și o titrare a virusului pe baza căreia se calculează cantitatea reală a virusului utilizată în test. Interpretare: Godeurile care prezintă CPE sunt considerate infectate și titrurile de neutralizare sunt exprimate ca reprezentând reciproca diluției finale de ser prezent în amestecurile de ser/virus la punctul final de 50 % estimat după metoda Spearman-Karber. (Karber, G., 1931, Archiv fuer Experimentelle Pathologie und Pharmakologie, 162, 480). Testele se consideră valide în cazul în care cantitatea reală de
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
într-un tampon de carbonat/bicarbonat cu pH 9,6. Se prepară antigene din tulpinile de virus selectate, cultivate pe monostraturi de celule BHK-21. Se utilizează supernatanți nepurificați și se pretitrează conform protocolului, dar fără ser, pentru a da o diluție care, după adăugarea unui volum egal de PBST (tampon fosfat salin, conținând 0,05 % Tween-20 și indicator roșu fenol) ar da o densitate optică între 1,2 și 1,5. Virusurile pot fi folosite inactivate. PBST este folosit ca diluant
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
seruri antivirale de iepure și se lasă peste noapte într-o încăpere umedă, la temperatura ambiantă. 2. În plăci de microtitrare cu godeuri multiple și cu fundul rotund (plăci purtătoare), se prepară, la un volum de 50 microlitri, serii de diluții în progresie geometrică, in duplicat, din fiecare ser de testare începând cu diluția 1/4. Se adaugă în fiecare godeu 50 microlitri dintr-o doză constantă de antigen și amestecurile se lasă peste noapte la temperatura de 4 °C. Adăugarea
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
la temperatura ambiantă. 2. În plăci de microtitrare cu godeuri multiple și cu fundul rotund (plăci purtătoare), se prepară, la un volum de 50 microlitri, serii de diluții în progresie geometrică, in duplicat, din fiecare ser de testare începând cu diluția 1/4. Se adaugă în fiecare godeu 50 microlitri dintr-o doză constantă de antigen și amestecurile se lasă peste noapte la temperatura de 4 °C. Adăugarea antigenului reduce diluția serică inițială la 1/8. 3. Se spală plăcile ELISA
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
geometrică, in duplicat, din fiecare ser de testare începând cu diluția 1/4. Se adaugă în fiecare godeu 50 microlitri dintr-o doză constantă de antigen și amestecurile se lasă peste noapte la temperatura de 4 °C. Adăugarea antigenului reduce diluția serică inițială la 1/8. 3. Se spală plăcile ELISA cu PBST de cinci ori. 4. Se transferă apoi 50 microlitri de amestecuri ser/antigen din plăcile purtătoare în plăcile ELISA acoperite cu ser de iepure și se incubează la
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
M. Se efectuează o citire spectrofotometrică a plăcilor la 492 nm cu ajutorul unui cititor ELISA, cuplat la un microcalculator. Controale: Pentru fiecare antigen utilizat, 40 de godeuri nu conțin ser, ci antigen diluat într-un PBST. O serie dublă de diluții în progresie geometrică de antiser bovin omolog de referință. O serie dublă de diluții în progresie geometrică de ser bovin negativ. Interpretare: Titrurile anticorpilor sunt exprimate ca reprezentând diluția finală a serurilor de testare, dând 50 % din valoarea medie DO
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
ELISA, cuplat la un microcalculator. Controale: Pentru fiecare antigen utilizat, 40 de godeuri nu conțin ser, ci antigen diluat într-un PBST. O serie dublă de diluții în progresie geometrică de antiser bovin omolog de referință. O serie dublă de diluții în progresie geometrică de ser bovin negativ. Interpretare: Titrurile anticorpilor sunt exprimate ca reprezentând diluția finală a serurilor de testare, dând 50 % din valoarea medie DO înregistrate în godeurile de control al virusului, unde serul de testare lipsește. Titrurile superioare
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
ser, ci antigen diluat într-un PBST. O serie dublă de diluții în progresie geometrică de antiser bovin omolog de referință. O serie dublă de diluții în progresie geometrică de ser bovin negativ. Interpretare: Titrurile anticorpilor sunt exprimate ca reprezentând diluția finală a serurilor de testare, dând 50 % din valoarea medie DO înregistrate în godeurile de control al virusului, unde serul de testare lipsește. Titrurile superioare valorii de 1/40 sunt considerate pozitive. Referințe: Hamblin C., Barnett ITR și Hedger RS
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
de culturi celulare neinoculate; (iv) antiseruri de referință. Interpretare: Rezultatele testului de neutralizare și titrul virusului folosit la testare se înregistrează după trei până la cinci zile de incubare la temperatura de 37 °C. Titrurile serului mai mici decât 1/2 (diluție finală) se consideră negative. În cazul în care eșantioanele de ser nediluat sunt toxice pentru culturile tisulare, aceste seruri se pot dilua în proporție de 1/2 înainte de a fi utilizate în test. Acest lucru corespunde unei diluții finale a
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
1/2 (diluție finală) se consideră negative. În cazul în care eșantioanele de ser nediluat sunt toxice pentru culturile tisulare, aceste seruri se pot dilua în proporție de 1/2 înainte de a fi utilizate în test. Acest lucru corespunde unei diluții finale a serului de 1/4. În aceste cazuri, titrurile serului mai mici decât 1/4 (diluție finală) se consideră negative. Boala veziculoasă a porcului (SVD) Testele pentru boala veziculoasă a porcului (SVD) se efectuează în conformitate cu Decizia 2000/428/CE
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
pentru culturile tisulare, aceste seruri se pot dilua în proporție de 1/2 înainte de a fi utilizate în test. Acest lucru corespunde unei diluții finale a serului de 1/4. În aceste cazuri, titrurile serului mai mici decât 1/4 (diluție finală) se consideră negative. Boala veziculoasă a porcului (SVD) Testele pentru boala veziculoasă a porcului (SVD) se efectuează în conformitate cu Decizia 2000/428/CE a Comisiei. Pestă porcină clasică (CSF) Testele pentru pesta porcină clasică (CSF) se efectuează în conformitate cu Decizia 2002
32004D0212-ro () [Corola-website/Law/292306_a_293635]
-
perfuziei cu o viteză mai mică . Caelyx nu se administrează in bolus sau sub formă de soluție nediluată . Se recomandă ca perfuzia cu Caelyx să fie conectată la o perfuzie cu glucoză 5 % ( 50 mg/ ml ) pentru a obține o diluție mai mare și pentru a diminua riscul de tromboză și extravazare . Perfuzia poate fi administrată într- o venă periferică . Nu se vor utiliza linii perfuzoare cu filtre incluse . Caelyx nu trebuie administrat intramuscular sau subcutanat ( vezi pct . 6. 6 ) . Pentru
Ro_160 () [Corola-website/Science/290920_a_292249]