3,845 matches
-
se diluează extractul de 10 sau 100 de ori cu cloroform (3.2) sau cu amestec benzen/acetonitril (3.6) înainte de a-l supune din nou cromatografiei în strat subțire. 5.5.2. Măsurători prin fluorodensitometrie Se măsoară intensitatea fluorescenței spoturilor de aflatoxină B1 cu ajutorul fluorodensitometrului (4.12) la o lungime de undă de sensibilizare de 365 nm și la o lungime de undă de emisie de 443 nm. Se determină cantitatea de aflatoxină B1 din spoturile de extract prin compararea
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
Se măsoară intensitatea fluorescenței spoturilor de aflatoxină B1 cu ajutorul fluorodensitometrului (4.12) la o lungime de undă de sensibilizare de 365 nm și la o lungime de undă de emisie de 443 nm. Se determină cantitatea de aflatoxină B1 din spoturile de extract prin compararea intensității fluorescenței lor cu cea a spoturilor de aflatoxină B1 standard. 5.6. Confirmarea identității aflatoxinei B1 Se confirmă identitatea aflatoxinei B1 din extract prin procesele arătate în continuare. 5.6.1. Tratarea cu acid sulfuric
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
12) la o lungime de undă de sensibilizare de 365 nm și la o lungime de undă de emisie de 443 nm. Se determină cantitatea de aflatoxină B1 din spoturile de extract prin compararea intensității fluorescenței lor cu cea a spoturilor de aflatoxină B1 standard. 5.6. Confirmarea identității aflatoxinei B1 Se confirmă identitatea aflatoxinei B1 din extract prin procesele arătate în continuare. 5.6.1. Tratarea cu acid sulfuric Se pulverizează acid sulfuric (3.13) pe cromatograma obținută la 5
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
B1 standard. 5.6. Confirmarea identității aflatoxinei B1 Se confirmă identitatea aflatoxinei B1 din extract prin procesele arătate în continuare. 5.6.1. Tratarea cu acid sulfuric Se pulverizează acid sulfuric (3.13) pe cromatograma obținută la 5.4. Fluorescența spoturilor de aflatoxină B1 trebuie să se schimbe din albastru în galben în urma iradierii cu UV. 5.6.2. Cromatografie bidimensională implicând formarea hemiacetalului de aflatoxină B1 (aflatoxină B12) NB: Operațiile descrise în continuare trebuie efectuate urmărindu-se cu atenție diagrama
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
3. 5.6.2.1. Aplicarea soluțiilor Se trasează două linii drepte pe placa TLC (4.8), paralele cu cele două margini apropiate (la 6 cm de fiecare margine) pentru a limita migrarea fronturilor de solvent. Se pun pe placă spoturi din următoarele soluții folosindu-se pipete capilare sau microseringi: * în punctul A: un volum din extractul de eșantion purificat obținut la 5.3, care conține aproximativ 2,5 nm de aflatoxină B1; * în punctele B și C: 25 l din
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
la linia de limitare a acestuia. Se scoate placa din rezervor și se lasă la uscat la temperatura camerei. 5.6.2.3. Interpretarea cromatogramei Se examinează cromatograma în lumină UV (4.9) și se verifică următoarele. (a) Apariția unui spot fluorescent albastru de aflatoxină B1, provenită din soluția standard aplicată în punctul C (migrare în direcția I). (b) Apariția unui spot fluorescent albastru de aflatoxină B1 care nu a reacționat (cu acidul clorhidric) și a unui spot fluorescent albastru mai
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
2.3. Interpretarea cromatogramei Se examinează cromatograma în lumină UV (4.9) și se verifică următoarele. (a) Apariția unui spot fluorescent albastru de aflatoxină B1, provenită din soluția standard aplicată în punctul C (migrare în direcția I). (b) Apariția unui spot fluorescent albastru de aflatoxină B1 care nu a reacționat (cu acidul clorhidric) și a unui spot fluorescent albastru mai intens de hemiacetal de aflatoxină B1, ambele provenite din soluția standard aplicată în punctul B (migrare în direcția II). (c) Apariția
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
a) Apariția unui spot fluorescent albastru de aflatoxină B1, provenită din soluția standard aplicată în punctul C (migrare în direcția I). (b) Apariția unui spot fluorescent albastru de aflatoxină B1 care nu a reacționat (cu acidul clorhidric) și a unui spot fluorescent albastru mai intens de hemiacetal de aflatoxină B1, ambele provenite din soluția standard aplicată în punctul B (migrare în direcția II). (c) Apariția unor spoturi similare celor de la punctul (b), provenite din extractul de eșantion aplicat în punctul A
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
albastru de aflatoxină B1 care nu a reacționat (cu acidul clorhidric) și a unui spot fluorescent albastru mai intens de hemiacetal de aflatoxină B1, ambele provenite din soluția standard aplicată în punctul B (migrare în direcția II). (c) Apariția unor spoturi similare celor de la punctul (b), provenite din extractul de eșantion aplicat în punctul A. Poziția acestor spoturi se definește mai întâi prin distanța de migrare a aflatoxinei B1 din punctul A în direcția I (aceeași cu distanța parcursă de soluția
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
mai intens de hemiacetal de aflatoxină B1, ambele provenite din soluția standard aplicată în punctul B (migrare în direcția II). (c) Apariția unor spoturi similare celor de la punctul (b), provenite din extractul de eșantion aplicat în punctul A. Poziția acestor spoturi se definește mai întâi prin distanța de migrare a aflatoxinei B1 din punctul A în direcția I (aceeași cu distanța parcursă de soluția standard aplicată în punctul C), și apoi prin distanțele de migrare de acolo în direcția II a
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
direcția I (aceeași cu distanța parcursă de soluția standard aplicată în punctul C), și apoi prin distanțele de migrare de acolo în direcția II a aflatoxinei B1-hemiacetal (aceleași cu distanțele parcurse de soluția standard aplicată în punctul B). Intensitățile fluorescenței spoturilor de hemiacetal provenite din extract și din soluția standard aplicată în B trebuie să fie aceeași. 6. Calcularea rezultatelor 6.1. Pe baza măsurătorilor vizuale Conținutul de aflatoxină B1 în micrograme per kg de eșantion (ppb) este dat de formula
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
Pe baza măsurătorilor fluorodensimetrice Conținutul în micrograme de aflatoxină B1 pe kg de eșantion, este dat de formula: unde: Y = volumul, în microlitri, de extract aplicat pe placă (10 sau 20 l); S = cantitatea, în nanograme, de aflatoxină B1 din spotul de extract (proporțională cu valoarea Y), obținută în urma măsurătorilor; V = volumul final de extract, în microlitri, care permite orice diluție necesară; W = greutatea, în grame, a eșantionului, corespunzătoare volumului de extract implicat în procesul de curățare a coloanei. 7. Prepararea
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
cromatografice Se pun pe placa TLC (4.8) 5 l din soluția standard de aflatoxină B1, conținând 8-10 g/ml (7.1). Se developează cromatograma conform indicațiilor de la 5.4. În lumină UV, cromatograma ar trebui să prezinte un singur spot, fără ca vreo fluorescență să fie detectabilă la nivelul zonei originale de depunere. 8. Repetabilitate Diferența dintre rezultatele a două determinări paralele efectuate pe același eșantion, de către același analist, nu trebuie să depășească: * 25 %, raportat la cel mai mare conținut de
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
µl din soluția standard (3.16); - în punctul D, 20 µl din soluția standard (3.16); - în punctul E, 40 µl din soluția standard (3.16). Se usucă într-un curent ușor de aer sau de gaz inert (3.11). Spoturile obținute trebuie să aibă un diametru de aproximativ 5 mm. 5.4.2. Developarea (se respectă diagrama din figura 1) Se developează cromatograma în direcția I, la întuneric, folosind solventul de developare (3.15.1) (strat de 1 cm într-
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
se lasă să se usuce la întuneric la temperatura camerei. 5.4.3. Interpretarea cromatogramei (se respectă diagrama din figura 2) Se iradiază cromatograma cu radiații UV, poziționându-se placa la 10 cm de lampă (4.9). Se localizează poziția spoturilor fluorescente albastre B, C, D și E de aflatoxină B1 din soluția standard. Se trasează două linii imaginare care trec prin aceste spoturi și în unghi drept față de direcțiile de developare. Intersecția P a acestor linii reprezintă locul în care
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
cromatograma cu radiații UV, poziționându-se placa la 10 cm de lampă (4.9). Se localizează poziția spoturilor fluorescente albastre B, C, D și E de aflatoxină B1 din soluția standard. Se trasează două linii imaginare care trec prin aceste spoturi și în unghi drept față de direcțiile de developare. Intersecția P a acestor linii reprezintă locul în care se estimează să se găsească spotul de aflatoxină B1 provenit din extractul de eșantion aplicat în punctul A (figura 1). Totuși, localizarea reală
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
și E de aflatoxină B1 din soluția standard. Se trasează două linii imaginare care trec prin aceste spoturi și în unghi drept față de direcțiile de developare. Intersecția P a acestor linii reprezintă locul în care se estimează să se găsească spotul de aflatoxină B1 provenit din extractul de eșantion aplicat în punctul A (figura 1). Totuși, localizarea reală a spotului de aflatoxină B1 poate fi în punctul Q la intersecția a două linii drepte imaginare care formează un unghi de aproximativ
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
în unghi drept față de direcțiile de developare. Intersecția P a acestor linii reprezintă locul în care se estimează să se găsească spotul de aflatoxină B1 provenit din extractul de eșantion aplicat în punctul A (figura 1). Totuși, localizarea reală a spotului de aflatoxină B1 poate fi în punctul Q la intersecția a două linii drepte imaginare care formează un unghi de aproximativ 100ș între ele și care trec prin spoturile B, respectiv C. Se determină cantitatea de aflatoxină B1 din extractul
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
eșantion aplicat în punctul A (figura 1). Totuși, localizarea reală a spotului de aflatoxină B1 poate fi în punctul Q la intersecția a două linii drepte imaginare care formează un unghi de aproximativ 100ș între ele și care trec prin spoturile B, respectiv C. Se determină cantitatea de aflatoxină B1 din extractul de eșantion conform indicațiilor de la 5.5. 5.4.4. Cromatografie suplimentară Se trasează două linii drepte pe o placă nouă (4.8), paralele cu cele două margini apropiate
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
µl din extractul de eșantion purificat obținut la 5.3 și, peste acesta, 20 µl din soluția standard (3.16). Se developează conform indicațiilor de la 5.4.2. Se iradiază cromatograma cu radiații UV (4.9) și se verifică dacă: - spoturile de aflatoxină B1 din extract și din soluția standard se suprapun, - fluorescența acestui spot este mai intensă decât cea a spotului de aflatoxină B1 developat în punctul Q de pe prima placă. 5.5 Determinări cantitative Se realizează fie vizual, fie
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
µl din soluția standard (3.16). Se developează conform indicațiilor de la 5.4.2. Se iradiază cromatograma cu radiații UV (4.9) și se verifică dacă: - spoturile de aflatoxină B1 din extract și din soluția standard se suprapun, - fluorescența acestui spot este mai intensă decât cea a spotului de aflatoxină B1 developat în punctul Q de pe prima placă. 5.5 Determinări cantitative Se realizează fie vizual, fie prin fluorodensitometrie, conform indicațiilor menționate în continuare. 5.5.1. Măsurători vizuale Se determină
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
developează conform indicațiilor de la 5.4.2. Se iradiază cromatograma cu radiații UV (4.9) și se verifică dacă: - spoturile de aflatoxină B1 din extract și din soluția standard se suprapun, - fluorescența acestui spot este mai intensă decât cea a spotului de aflatoxină B1 developat în punctul Q de pe prima placă. 5.5 Determinări cantitative Se realizează fie vizual, fie prin fluorodensitometrie, conform indicațiilor menționate în continuare. 5.5.1. Măsurători vizuale Se determină cantitatea de aflatoxină B1 din extract prin
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
developat în punctul Q de pe prima placă. 5.5 Determinări cantitative Se realizează fie vizual, fie prin fluorodensitometrie, conform indicațiilor menționate în continuare. 5.5.1. Măsurători vizuale Se determină cantitatea de aflatoxină B1 din extract prin compararea intensității fluorescenței spotului de extract cu cea a spoturilor de soluție standard C, D și E. Dacă este necesar se interpolează. Dacă intensitatea fluorescenței dată de cei 20 l de extract este mai mare decât cea dată de 40 l de soluție standard
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
placă. 5.5 Determinări cantitative Se realizează fie vizual, fie prin fluorodensitometrie, conform indicațiilor menționate în continuare. 5.5.1. Măsurători vizuale Se determină cantitatea de aflatoxină B1 din extract prin compararea intensității fluorescenței spotului de extract cu cea a spoturilor de soluție standard C, D și E. Dacă este necesar se interpolează. Dacă intensitatea fluorescenței dată de cei 20 l de extract este mai mare decât cea dată de 40 l de soluție standard, se diluează extractul de 10 sau
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]
-
se diluează extractul de 10 sau 100 de ori cu cloroform (3.2) sau cu amestec benzen/acetonitril (3.6) înainte de a-l supune din nou cromatografiei în strat subțire. 5.5.2. Măsurători prin fluorodensitometrie Se măsoară intensitatea fluorescenței spoturilor de aflatoxină B1 cu ajutorul fluorodensitometrului (4.12) la o lungime de undă de sensibilizare de 365 nm și la o lungime de undă de emisie de 443 nm. Se determină cantitatea de aflatoxină B1 din spotul de extract prin compararea
jrc329as1976 by Guvernul României () [Corola-website/Law/85464_a_86251]