408 matches
-
a coordona, prin consultare cu Comisia, metodele utilizate în statele membre pentru diagnosticul pestei porcine africane, în special prin: * deținerea și livrarea culturilor celulare pentru diagnostic, * specificarea, deținerea și livrarea sușelor virusului pestei porcine africane în vederea testelor serologice și preparării antiserului, * livrarea serurilor de referință, a serurilor conjugate și a altor reactivi de referință laboratoarelor naționale în vederea standardizării testelor și a reactivilor utilizați în statele membre, * realizarea și conservarea unei colecții a virusului pestei porcine africane, * organizarea periodică a testelor comparative
jrc5631as2002 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90801_a_91588]
-
Medicamente, conținând hormoni, dar nu antibiotice 3003.3 + 3004.3 24.42.13 Medicamente, conținând alcaloizi sau derivate ale acestora, dar nu hormoni sau antibiotice 3003[.4 + .9] + 3004[.4 - .9] 24.42.2 Alte produse farmaceutice 24.42.21 Antiseruri și vaccinuri 3002[.1 - .3] 24.42.22 Preparate anticoncepționale chimice pe bază de hormoni sau spermicide 3006[.6] 24.42.23 Reactivi de diagnosticare și alte produse farmaceutice 3006[.2 - .4 + .7] 24.42.24 Pansamente, catgut și alte
jrc5688as2002 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90858_a_91645]
-
mixer sau cu un ansamblu mojar-pisălog și centrifugat de la 2 000 până la 4 000 x g timp de 15 minute la 0-6 șC, apoi suspensia este filtrată (0,45 μm) și incubată cu un volum egal dintr-un amestec de antiseruri diluat corespunzător contra serotipurilor indigene ale virusului NPI. Titlul antiserului trebuie să fie de cel puțin 1:2 000, în cadrul unui test de neutralizare pe lamă de 50 %. Amestecul este incubat timp de o oră la 15 șC. Acesta constituie
jrc5932as2002 by Guvernul României () [Corola-website/Law/91104_a_91891]
-
000 până la 4 000 x g timp de 15 minute la 0-6 șC, apoi suspensia este filtrată (0,45 μm) și incubată cu un volum egal dintr-un amestec de antiseruri diluat corespunzător contra serotipurilor indigene ale virusului NPI. Titlul antiserului trebuie să fie de cel puțin 1:2 000, în cadrul unui test de neutralizare pe lamă de 50 %. Amestecul este incubat timp de o oră la 15 șC. Acesta constituie inoculul. Tratarea tuturor inoculurilor cu un ser antivirus IPN (virus
jrc5932as2002 by Guvernul României () [Corola-website/Law/91104_a_91891]
-
utiliza alte descendențe celulare cu o eficacitate și sensibilitate confirmate pentru izolarea virusului AIS, ținând seama de variabilitatea sușei și de capacitatea diverselor sușe de a se reproduce în descendențe celulare diferite. Se inoculează o suspensie de organe tratată cu antiser, în culturi celulare tinere, în fază de creștere activă, în scopul obținerii unei diluții finale a materialului tisular, într-un mediu de cultură de 1: 1 000. La fiecare suspensie de organe, se adaugă 40 μl de inocul la o
jrc5932as2002 by Guvernul României () [Corola-website/Law/91104_a_91891]
-
prin observarea prezenței sau absenței dârelor în formă de sfârc la același nivel ca și în cazul godeurilor martor care conțin numai RBCs (0,025 ml) și PBS (0,05 ml). (i) Titrul IH reprezintă diluția cea mai mare a antiserului care produce inhibarea completă a patru sau opt unități de virus (este necesar să se includă în fiecare test o titrare HA pentru confirmarea prezenței HAU). (j) Valabilitatea rezultatelor depinde de obținerea unui titru mai mic de 2³ pentru patru
jrc2401as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87555_a_88342]
-
antigenul VBLA, anticorpul monoclonal și conjugatul. Acesta reprezintă un martor negativ. Media citirilor densității optice de pe acest rând martor reprezintă valoarea de inhibare 0%. Martor pozitiv Rândul 3 A- H este martorul pozitiv. Acesta constă din antigen VBLA, diluții de antiser pozitiv VBLA, ACM și conjugat. Este inclus ca indicator pentru funcționarea corespunzătoare a testului și, de la un test la altul, ar trebui să se obțină niveluri similare de inhibiție. Serurile de testare În formatul de testare prezentat mai sus pot
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
de exemplu Clavibacter michiganensis subsp. sepedonicus. Datorită parametrilor de citire specificați în această metodă, este un test sensibil (pragul de sensibilitate de 10³ - 104 celule pe ml de extract final de cartof). Factorul critic pentru siguranța rezultatelor testului este calitatea antiserului. Doar antiserul cu un titru superior (minim 2000 pentru antiserul brut) este acceptabil și toate testele trebuie efectuate la titrul antiserului sau o diluție sub titru. Este preferată metoda indirectă. Metoda directă se poate aplica dacă testul are un nivel
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
Clavibacter michiganensis subsp. sepedonicus. Datorită parametrilor de citire specificați în această metodă, este un test sensibil (pragul de sensibilitate de 10³ - 104 celule pe ml de extract final de cartof). Factorul critic pentru siguranța rezultatelor testului este calitatea antiserului. Doar antiserul cu un titru superior (minim 2000 pentru antiserul brut) este acceptabil și toate testele trebuie efectuate la titrul antiserului sau o diluție sub titru. Este preferată metoda indirectă. Metoda directă se poate aplica dacă testul are un nivel de sensibilitate
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
specificați în această metodă, este un test sensibil (pragul de sensibilitate de 10³ - 104 celule pe ml de extract final de cartof). Factorul critic pentru siguranța rezultatelor testului este calitatea antiserului. Doar antiserul cu un titru superior (minim 2000 pentru antiserul brut) este acceptabil și toate testele trebuie efectuate la titrul antiserului sau o diluție sub titru. Este preferată metoda indirectă. Metoda directă se poate aplica dacă testul are un nivel de sensibilitate și specificitate echivalente metodei indirecte. Testul IF are
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
de 10³ - 104 celule pe ml de extract final de cartof). Factorul critic pentru siguranța rezultatelor testului este calitatea antiserului. Doar antiserul cu un titru superior (minim 2000 pentru antiserul brut) este acceptabil și toate testele trebuie efectuate la titrul antiserului sau o diluție sub titru. Este preferată metoda indirectă. Metoda directă se poate aplica dacă testul are un nivel de sensibilitate și specificitate echivalente metodei indirecte. Testul IF are avantajul interpretării subiective a morfologiei colorației celulare și intensității fluorescenței care
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
de sensibilitate 104- 105 celule pe extract final de cartof). Testul este ieftin și rapid, dar în general mai vulnerabil la false rezultate pozitive (reacții încrucișate) și negative (inhibare de către moleculele fenolice din extractul de cartof). Cerințele de specificitate a antiserului sunt extrem de mari. Testul ELISA nu poate fi folosit ca test de triere unic. 6 Testul PCR PCR are potențialul unei detectări foarte sensibile, deși testul este ușor inhibat de componente de plantă sau de extract de cartof ducând la
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
Producție de levan - Mediile și metodele se găsesc în Lelliott & Stead (1987) Testul IF Se prepară o suspensie de 106 celule pe ml din cultură și din sușa sau sușele de control. Se prepară o serie de diluții duble de antiser. Se aplică procedura IF (secțiunea III.2). Valoarea IF a culturii trebuie să fie echivalentă celei a controlului pozitiv. Testul ELISA Se prepară o suspensie de >106 celule pe ml din cultură și din sușa sau sușele de control. Se
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
extractului se conservă pe perioada testelor la temperatura de 4°C. Se adaugă 10 - 25% (v/v) glicerol steril în cealaltă microfiolă. Se centrifughează. Se depozitează la - 18°C (săptămâni) sau la - 70°C (luni). 2. Testul IF Se folosește antiserul pentru Ralstonia solanacearum, preferabil rasa 3/biovar 2. Se determină titrul unei suspensii de 106 celule pe ml din sușa omologă de Ralstonia solanacearum cu o diluție corespunzătoare de antiser conjugat cu izotiocianat de fluoresceină (FITC), în conformitate cu recomandările producătorului. Antiserul
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
sau la - 70°C (luni). 2. Testul IF Se folosește antiserul pentru Ralstonia solanacearum, preferabil rasa 3/biovar 2. Se determină titrul unei suspensii de 106 celule pe ml din sușa omologă de Ralstonia solanacearum cu o diluție corespunzătoare de antiser conjugat cu izotiocianat de fluoresceină (FITC), în conformitate cu recomandările producătorului. Antiserul brut ar trebui să aibă o valoare IF de minim 1:2000. Se utilizează lame microscopice cu mai multe puțuri, de preferință cu 10 ferestre de minim 6 mm diametru
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
antiserul pentru Ralstonia solanacearum, preferabil rasa 3/biovar 2. Se determină titrul unei suspensii de 106 celule pe ml din sușa omologă de Ralstonia solanacearum cu o diluție corespunzătoare de antiser conjugat cu izotiocianat de fluoresceină (FITC), în conformitate cu recomandările producătorului. Antiserul brut ar trebui să aibă o valoare IF de minim 1:2000. Se utilizează lame microscopice cu mai multe puțuri, de preferință cu 10 ferestre de minim 6 mm diametru. Pe fiecare lamă de test se include un control FITC
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
se usuce. Celulele bacteriene se fixează pe lamă prin încălzire, trecere prin flacără sau cu 95% etanol. 2.3 Procedura IF (i) În conformitate cu pregătirea lamei de test de la 2.1 pct. (i): se prepară un set de diluții duble ale antiserului în tampon IF (apendicele 3): 1/4 din titru (T/4), 1/2 din titru (T/2), titru (T) și de două ori titrul (2T). (ii) În conformitate cu pregătirea lamei de test de la 2.1 pct. (ii): se prepară diluția de
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
apendicele 3): 1/4 din titru (T/4), 1/2 din titru (T/2), titru (T) și de două ori titrul (2T). (ii) În conformitate cu pregătirea lamei de test de la 2.1 pct. (ii): se prepară diluția de lucru (WD) a antiserului în tampon IF. Diluția de lucru este diluția antiserului cu specificitate optimă și este de obicei jumătate din titru. Figura 1 Pregătirea lamei de test în conformitate cu 2.1 pct. (i) și 2.3 pct. (i) Diluție standard a extractului concentrat
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
2 din titru (T/2), titru (T) și de două ori titrul (2T). (ii) În conformitate cu pregătirea lamei de test de la 2.1 pct. (ii): se prepară diluția de lucru (WD) a antiserului în tampon IF. Diluția de lucru este diluția antiserului cu specificitate optimă și este de obicei jumătate din titru. Figura 1 Pregătirea lamei de test în conformitate cu 2.1 pct. (i) și 2.3 pct. (i) Diluție standard a extractului concentrat resuspendat T = titru FITC T/4 T/2 T
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
este de obicei jumătate din titru. Figura 1 Pregătirea lamei de test în conformitate cu 2.1 pct. (i) și 2.3 pct. (i) Diluție standard a extractului concentrat resuspendat T = titru FITC T/4 T/2 T 2T => diluțiile duble ale antiserului Eșantionul 1 ●1 ●2 ●3 ●4 ●5 Duplicatul eșantionului 1 sau al eșantionului 2 ●6 ●7 ●8 ●9 ●10 Figura 2 Pregătirea lamei de test în conformitate cu 2.1 pct. (ii) și 2.3 pct. (ii) FITC Diluție standard a antiserului
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
antiserului Eșantionul 1 ●1 ●2 ●3 ●4 ●5 Duplicatul eșantionului 1 sau al eșantionului 2 ●6 ●7 ●8 ●9 ●10 Figura 2 Pregătirea lamei de test în conformitate cu 2.1 pct. (ii) și 2.3 pct. (ii) FITC Diluție standard a antiserului pur pur 1/10 !/100 1/1000 => Diluțiile decimale ale extractului concentrat resuspendat Eșantionul 1 ●1 ●2 ●3 ●4 ●5 Duplicatul eșantionului 1 sau al eșantionului 2 ●6 ●7 ●8 ●9 ●10 2.3.1. Se aranjează lamele pe hârtie
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
extractului concentrat resuspendat Eșantionul 1 ●1 ●2 ●3 ●4 ●5 Duplicatul eșantionului 1 sau al eșantionului 2 ●6 ●7 ●8 ●9 ●10 2.3.1. Se aranjează lamele pe hârtie absorbantă Se acoperă ferestrele de test cu diluția sau diluțiile antiserului. În ferestrele FITC se aplică PBS. Volumul antiserului aplicat în ferestre trebuie să fie echivalent cu volumul extractului aplicat. 2.3.2. Se incubează acoperit timp de 30 de minute la temperatura camerei. 2.3.3. Se scutură picăturile de
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
4 ●5 Duplicatul eșantionului 1 sau al eșantionului 2 ●6 ●7 ●8 ●9 ●10 2.3.1. Se aranjează lamele pe hârtie absorbantă Se acoperă ferestrele de test cu diluția sau diluțiile antiserului. În ferestrele FITC se aplică PBS. Volumul antiserului aplicat în ferestre trebuie să fie echivalent cu volumul extractului aplicat. 2.3.2. Se incubează acoperit timp de 30 de minute la temperatura camerei. 2.3.3. Se scutură picăturile de antiser de pe lamă și se clătesc lamele cu
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
În ferestrele FITC se aplică PBS. Volumul antiserului aplicat în ferestre trebuie să fie echivalent cu volumul extractului aplicat. 2.3.2. Se incubează acoperit timp de 30 de minute la temperatura camerei. 2.3.3. Se scutură picăturile de antiser de pe lamă și se clătesc lamele cu atenție cu un tampon IF. Se spală timp de cinci minute în soluție tampon IF - Tween și apoi cinci minute în tampon IF (apendicele 3). Excesul de umezeală se îndepărtează cu grijă. 2
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
se îndepărtează cu grijă. 2.3.4. Se aranjează lamele pe hârtie absorbantă. Se acoperă ferestrele de test și fereastra FITC cu diluția conjugatului FITC utilizat pentru determinarea titrului. Volumul conjugatului aplicat în ferestre trebuie să fie echivalent cu volumul antiserului aplicat. 2.3.5. Se incubează acoperit timp de 30 de minute la temperatura camerei. 2.3.6. Se scutură picăturile de conjugat de pe lamelă. Se clătesc și se spală ca mai sus (2.3.3). Se îndepărtează cu grijă
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]