10,924 matches
-
probe la 24 de ore după prima prelevare. Dacă administrarea dozelor durează mai mult de o zi, ar trebui să se procedeze la o prelevare de probe la un interval de timp egal cu de 1,5 ori durata ciclului celular normal după tratamentul final. Înainte de sacrificare, se procedează la injectarea intraperitoneală a animalelor cu o doză corespunzătoare de agent de inhibare a metafazei (de ex. Colcemid(r) sau colchicină). Probele de la animale se prelevează apoi la un interval corespunzător. Pentru
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
de celule poliploide poate să indice faptul că substanța de testat poate produce aberații ale numărului de cromozomi. O creștere a numărului de celule cu cromozomi enderoduplicați poate să indice faptul că substanța de testat poate să inhibe avansarea ciclului celular (7) (8). Dacă rezultatele pentru o substanță de testat nu îndeplinesc criteriile menționate anterior, substanța respectivă se consideră a fi nemutagenă în prezentul test. Deși majoritatea experimentelor vor da în mod clar rezultate pozitive sau negative, în unele cazuri rare
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
dovezi că substanța de testat sau un metabolit reactiv nu atinge țesutul-țintă utilizarea prezentului test nu este potrivită. A se vedea și introducerea generală din partea B. 1.2. DEFINIȚII Centromer (kinetocor): porțiune sau porțiuni dintr-un cromozom care în timpul diviziunii celulare este legată cu fibrele fusului mitotic, ceea ce permite deplasarea ordonată a cromozomilor fiice către polii celulelor fiice. Micronuclee: nuclee mici, separate de nucleele principale ale celulelor și prezente în plus față de acestea, produse în timpul telofazei mitozei (meioză) de către fragmentele de
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
bacterian de mutație inversă este rapid, ieftin și relativ ușor de realizat. Multe dintre sușele experimentale au câteva particularități care le fac mai sensibile pentru detectarea de mutații, inclusiv secvențe de ADN sensibile la mutații în locurile de inversare, permeabilitate celulară crescută pentru moleculele mari și eliminarea sistemelor de regenerare a ADN sau intensificarea proceselor care au tendința să inducă erori în timpul regenerării ADN. Specificitatea sușelor experimentale poate să furnizeze informații utile privind tipurile de mutații care sunt induse de către agenții
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
directoare OCDE TG 476, Testul in vitro de mutație genică pe celule de mamifere (1997). 1.1. INTRODUCERE Testul in vitro de mutație genică pe celule de mamifere se poate utiliza pentru detectarea mutațiilor genice produse de substanțele chimice. Liniile celulare corespunzătoare conțin celule de limfom de șoarece L5178Y, liniile CHO, CHO-AS52 și V79 de celule de hamster chinezesc și celule limfoblastoide umane TK6 (1). În liniile celulare menționate, efectele genetice cel mai frecvent măsurate sunt o mutație în pozițiile timidin
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
mamifere se poate utiliza pentru detectarea mutațiilor genice produse de substanțele chimice. Liniile celulare corespunzătoare conțin celule de limfom de șoarece L5178Y, liniile CHO, CHO-AS52 și V79 de celule de hamster chinezesc și celule limfoblastoide umane TK6 (1). În liniile celulare menționate, efectele genetice cel mai frecvent măsurate sunt o mutație în pozițiile timidin kinază (TK) și hipoxantin-guanină fosforibozil transferază (HPRT), precum și o transgenă de xantin-guanină fosforibozil transferază (XPRT). Testele de mutație TK, HPRT și XPRT permit detectarea diferitelor spectre ale
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
permită detectarea fenomenelor genetice (de ex. deleții importante) care nu sunt detectate în locusul HPRT la cromozomii X (2) (3) (4) (5) (6). În testul in vitro de mutație genică pe celule de mamifere, se pot utiliza culturi de linii celulare stabilite sau sușe celulare. Celule utilizate se selectează în funcție de capacitatea de creștere în cultură și de stabilitatea frecvenței de mutație spontană. Testele realizate in vitro necesită, în general, utilizarea unei surse exogene de activare metabolică. Sistemul de activare metabolică de
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
de ex. deleții importante) care nu sunt detectate în locusul HPRT la cromozomii X (2) (3) (4) (5) (6). În testul in vitro de mutație genică pe celule de mamifere, se pot utiliza culturi de linii celulare stabilite sau sușe celulare. Celule utilizate se selectează în funcție de capacitatea de creștere în cultură și de stabilitatea frecvenței de mutație spontană. Testele realizate in vitro necesită, în general, utilizarea unei surse exogene de activare metabolică. Sistemul de activare metabolică de acest tip nu poate
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
Celulele cu deficit de timidin chinază (TK) datorită mutației TK+/- →TK-/- sunt rezistente la efectele citotoxice ale trifluorotimidinei (TFT), un analog al pirimidinei. Celulele care posedă timidin chinază sunt sensibile la TFT, care produce inhibarea metabolismului celular și întrerupe diviziunea celulară. Prin urmare, celulele mutante pot să prolifereze în prezența TFT, în timp ce celulele normale, care conțin timidin chinază, nu pot. În mod similar, celulele cu deficit de HPRT sau XPRT sunt selectate în funcție de rezistența la 6-tioguanină (TG) sau 8-azaguanină (AG). Dacă
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
puțin egal cu de 10 ori inversul frecvenței de mutație spontană. Cu toate acestea, se recomandă utilizarea a minimum 106 celule. Pentru a asigura o performanță constantă a testului, ar trebui să se dispună de date anterioare specifice privind sistemul celular utilizat. 1.4.1.2. Mediile și condițiile de cultură Se recomandă utilizarea mediilor de cultură și a condițiilor de incubare (vasele de cultură, temperatura, concentrația CO2, și umiditatea) corespunzătoare. Alegerea mediilor ar trebui să se facă în funcție de sistemele selective
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
sistem de activare metabolică poate să depindă de clasa chimică a substanței de testat. În unele cazuri, ar putea fi convenabilă utilizarea mai multor concentrații ale fracției postmitocondriale. O serie de realizări, inclusiv crearea prin inginerie genetică a unor linii celulare care exprimă enzime activatoare specifice, pot să furnizeze potențialul pentru o activare endogenă. Alegerea liniilor celulare ar trebui să fie justificată din punct de vedere științific (de ex. prin importanța izoenzimei citocromului P450 pentru metabolismul substanței de testat). 1.4
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
cazuri, ar putea fi convenabilă utilizarea mai multor concentrații ale fracției postmitocondriale. O serie de realizări, inclusiv crearea prin inginerie genetică a unor linii celulare care exprimă enzime activatoare specifice, pot să furnizeze potențialul pentru o activare endogenă. Alegerea liniilor celulare ar trebui să fie justificată din punct de vedere științific (de ex. prin importanța izoenzimei citocromului P450 pentru metabolismul substanței de testat). 1.4.1.5. Prepararea substanței de testat Substanțele de testat în stare solidă ar trebui să se
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
vedere la determinarea dozei maxime sunt citotoxicitatea, solubilitatea în sistemul de testare și modificările de pH sau osmolalitate. Citotoxicitatea ar trebui să se determine cu și fără activare metabolică în experimentul principal, utilizând un indicator corespunzător al integrității și dezvoltării celulare, ca eficacitatea clonării relative (supraviețuirea) sau creșterea totală relativă. Ar putea fi utilă determinarea citotoxicității și solubilității într-un experiment preliminar. Ar trebui să se utilizeze cel puțin patru concentrații analizabile. Dacă o substanță este citototoxică, concentrațiile respective ar trebui
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
atât în prezența, cât și în absența unui sistem de activare metabolică. Timpul de expunere ar trebui să fie corespunzător (de obicei, un timp 3-6 ore este eficient). Timpul de expunere se poate prelungi cu unul sau mai multe cicluri celulare. Fiecare concentrație se poate testa pe una sau pe două culturi tratate. Dacă se utilizează culturi unice, numărul concentrațiilor ar trebui să fie mai mare pentru a asigura un număr suficient de culturi pentru analiză (de ex. minimum opt concentrații
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
mamifere utilizate, în cultură. 3. RAPORTAREA RAPORTUL TESTULUI Raportul testului trebuie să conțină următoarele informații: Solventul/vehiculul: - justificarea alegerii vehiculului, - solubilitatea și stabilitatea substanței de testat în solvent/vehicul, dacă se cunoaște. Celulele: - tipul și sursa celulelor, - numărul de culturi celulare, - numărul de reînsămânțări, dacă este cazul, - metodele de întreținere a culturilor celulare, dacă este cazul, - absența micoplasmei. Condițiile de testare: - justificarea alegerii concentrațiilor și numărului de culturi, inclusiv, de ex. datele de citotoxicitate și limitele de solubilitate, dacă sunt disponibile
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
conțină următoarele informații: Solventul/vehiculul: - justificarea alegerii vehiculului, - solubilitatea și stabilitatea substanței de testat în solvent/vehicul, dacă se cunoaște. Celulele: - tipul și sursa celulelor, - numărul de culturi celulare, - numărul de reînsămânțări, dacă este cazul, - metodele de întreținere a culturilor celulare, dacă este cazul, - absența micoplasmei. Condițiile de testare: - justificarea alegerii concentrațiilor și numărului de culturi, inclusiv, de ex. datele de citotoxicitate și limitele de solubilitate, dacă sunt disponibile, - compoziția mediului, concentrația CO2, - concentrația substanței de testat, - volumul vehiculului și al
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
de culturi, inclusiv, de ex. datele de citotoxicitate și limitele de solubilitate, dacă sunt disponibile, - compoziția mediului, concentrația CO2, - concentrația substanței de testat, - volumul vehiculului și al substanței de testat adăugate, - temperatura de incubare, - timpul de incubare, - durata tratamentului, - densitatea celulară în timpul tratamentului, - tipul și compoziția sistemului de activare metabolică, inclusiv criteriile de acceptabilitate, - martorii pozitivi și negativi, - timpul de manifestare (inclusiv numărul de celule însămânțate și reînsămânțate, programele de alimentare, dacă este cazul), - agenții selectivi, - criteriile utilizate la caracterizarea studiilor
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
utilizează, în general, rozătoare. Prezentul test citogenetic in vivo permite detectarea aberațiilor cromozomiale din mitozele spermatogoniale. Alte celule țintă nu fac obiectul prezentului test. Pentru detectarea aberațiilor de tip cromatidic din celulele spermatogoniale, ar trebui să se examineze prima diviziune celulară mitotică după tratament, înainte ca leziunile respective să se piardă în diviziunile celulare ulterioare. Prin analiza cromozomilor meiotici pentru detectarea aberațiilor de tip cromozomial în diakineză-metafaza I când celulele tratate se transformă în spermatocite, se pot obține informații suplimentare referitoare
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
din mitozele spermatogoniale. Alte celule țintă nu fac obiectul prezentului test. Pentru detectarea aberațiilor de tip cromatidic din celulele spermatogoniale, ar trebui să se examineze prima diviziune celulară mitotică după tratament, înainte ca leziunile respective să se piardă în diviziunile celulare ulterioare. Prin analiza cromozomilor meiotici pentru detectarea aberațiilor de tip cromozomial în diakineză-metafaza I când celulele tratate se transformă în spermatocite, se pot obține informații suplimentare referitoare la celulele germinale spermatogoniale tratate. Prezentul test in vivo este destinat să verifice
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
unui volum mare de material. Alte modalități de administrare ar trebui să fie justificate în mod științific. La grupa cu doza maximă prelevarea probelor după tratament se realizează în două momente. Deoarece substanța de testat poate să influențeze kinetica ciclului celular, prima și ultima prelevare de probe se realizează la intervale de 24 de ore și respectiv de 48 de ore după tratament. Pentru alte doze decât doza maximă, prelevarea probelor ar trebui să se realizeze la un interval de 24
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
de 48 de ore după tratament. Pentru alte doze decât doza maximă, prelevarea probelor ar trebui să se realizeze la un interval de 24 de ore sau la un interval de timp egal cu de 1,5 ori durata ciclului celular după tratament, cu excepția cazului în care se cunoaște un alt moment corespunzător de prelevare pentru detectarea efectelor (6). În plus, se pot utiliza și alte momente de prelevare. De exemplu, pentru produsele chimice care pot produce cromozomi întârziați sau pot
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
probelor ar putea fi adecvată (1). Adecvarea unui tratament repetat ar trebui să se determine de la caz la caz. După un program de tratamente repetate, animalele ar trebui să fie sacrificate după 24 de ore (1,5 ori durata ciclului celular) de la ultimul tratament. Se pot utiliza momente suplimentare de prelevare a probelor, dacă este necesar. Înainte de sacrificare, se procedează la injectarea intraperitoneală a animalelor cu o doză corespunzătoare de substanță de inhibare a metafazei (de ex. Colcemid(r) sau colchicină
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
mod normal efecte exacerbate la concentrații mai mari, variația volumului testat ar trebui să fie redusă la minim prin ajustarea concentrației, astfel încât să se asigure un volum constant pentru toate dozele. 1.5.6. Prepararea cromozomilor Imediat după sacrificare, suspensiile celulare obținute de la unul sau două testicule, se expun la o soluție hipotonică și se fixează. Celulele se întind apoi pe lamele și se colorează. 1.5.7. Analiza Pentru fiecare animal ar trebui să se analizeze minimum 100 de celule
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
conține o regiune deteriorată indusă de acțiunea unor substanțe chimice sau a unor agenți fizici. Testul se întemeiază, de obicei, pe încorporarea 3H-TdR în ADN-ul celulelor hepatice care prezintă o frecvență redusă de celule în faza S a ciclului celular. Încorporarea 3H-TdR se determină, de obicei, prin autoradiografie, deoarece această tehnică nu este sensibilă la interferența cu celulele în fază S, așa cum este, de exemplu, numărătoarea în scintilație lichidă. 1.4. DESCRIEREA METODEI 1.4.1. Preparatele 1.4.1
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
organismelor sensibile și reprezentative: ... - toxicitate acută; - toxicitate cronică; - toxicitate la nivel de dezvoltare și reproducere; - probleme endocrine; - toxicitate de sedimente; - biodisponibilitate/bioamplificare/bioconcentrare; - efecte asupra rețelei alimentare/populației; - observații asupra efectelor nefavorabile în teren/la pești morți/eșuări/analiza țesuturilor celulare; și - reziduuri în alimente de origine marină. Aceste date trebuie să se refere la unul sau mai multe tipuri de organisme nevizate, cum ar fi plantele acvatice, nevertebratele, peștii, păsările, mamiferele și speciile pe cale de dispariție. c) Date cu privire la posibila
EUR-Lex () [Corola-website/Law/164140_a_165469]