4,238 matches
-
II PROTOCOL DE TESTARE PENTRU DIAGNOSTICAREA, DETECTAREA ȘI IDENTIFICAREA RALSTONIA SOLANACEARUM (SMITH) YABUUCHI ET AL. DOMENIUL DE APLICARE AL PROTOCOLULUI DE TESTARE Protocolul prezentat descrie diversele proceduri implicate în: (i) diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomate; (ii) detectarea Ralstonia solanacearum în eșantioanele de tuberculi de cartof; (iii) identificarea Ralstonia solanacearum. În apendice se oferă detalii cu privire la prepararea materialelor de testare, adică mediul de cultură, tampoanele, soluțiile, reactivii. CUPRINS: SECȚIUNEA I
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
iii) identificarea Ralstonia solanacearum. În apendice se oferă detalii cu privire la prepararea materialelor de testare, adică mediul de cultură, tampoanele, soluțiile, reactivii. CUPRINS: SECȚIUNEA I: Aplicarea protocolului de testare..............................................................9 1. Diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomată .......................9 2. Detectarea și identificarea Ralstonia solanacearum în eșantioanele de tuberculi de cartof ...............................................................11 SECȚIUNEA II: Diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomată.................................13
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomată .......................9 2. Detectarea și identificarea Ralstonia solanacearum în eșantioanele de tuberculi de cartof ...............................................................11 SECȚIUNEA II: Diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomată.................................13 1. Simptome..................................................................................13 2. Test(e) de triere rapidă..............................................................13 3. Procedură de izolare..................................................................14 4. Test(e) de confirmare................................................................14 SECȚIUNEA III: Detectarea și identificarea Ralstonia solanacearum în eșantioanele de tuberculi de
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
ELISA..........................................................................28 Apendicele 6 Materiale pentru testul PCR..............................................................................29 Apendicele 7 Materiale pentru test(ele) de placare selectivă și de îmbogățire.....................29 Bibliografie..............................................................................................................................30 SECȚIUNEA I APLICAREA PROTOCOLULUI DE TESTARE Diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomată Protocolul de testare este destinat tuberculilor de cartof cu simptome tipice sau suspecți de putregai brun și în cazul plantelor de cartof și tomate cu simptome tipice sau suspecte de ofilire bacteriană. Presupune un
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomată Protocolul de testare este destinat tuberculilor de cartof cu simptome tipice sau suspecți de putregai brun și în cazul plantelor de cartof și tomate cu simptome tipice sau suspecte de ofilire bacteriană. Presupune un test de triere rapidă, izolarea agentului patogen din țesutul vascular infectat pe mediile de diagnosticare și, în cazul unui rezultat pozitiv, identificarea culturii ca fiind Ralstonia solanacearum. Referințe la diagramă: 1 Descrierea simptomelor este oferită în secțiunea II
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
testele enumerate în secțiunea II.4.1., în combinație cu un test al patogenicității (secțiunea II.4.3.). Caracterizarea sușelor este opțională, dar recomandată pentru fiecare caz nou. SECȚIUNEA II Diagnosticarea putregaiului brun din tuberculii de cartof și a ofilirii bacteriene la plantele de cartof și tomată 1. Simptome 1.1 Simptome la cartof Planta de cartof. Stadiul incipient al infecției este reprezentat de ofilirea frunzelor înspre vârful plantei în timpul temperaturilor diurne ridicate și de revenirea în timpul nopții. Ofilirea devine repede
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
pot dezvolta un număr mare de rădăcini adventive. Este posibilă observarea unui cordon gras de-a lungul tulpinii care este dovada necrozei sistemului vascular. Dacă tulpina este tăiată transversal, țesuturile vasculare brune decolorate ale tulpinii elimină picături dintr-o scurgere bacteriană albă sau gălbuie. 2. Teste de triere rapidă Testele de triere rapidă ușurează diagnosticul prezumtiv. Folosiți unul sau mai multe dintre următoarele teste: Testul de exsudație a tulpinii Prezența Ralstonia solanacearum în tulpini ofilite de cartof sau tomate poate fi
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
Prezența Ralstonia solanacearum în tulpini ofilite de cartof sau tomate poate fi evaluată prin următorul test prezumtiv simplu: Se taie tulpina chiar deasupra nivelului solului. Se pune suprafața tăiată într-un pahar cu apă. Imediat după aceea, fire de exudat bacteriană curg spontan din fasciculele vasculare. Nici o altă bacterie care produce infecții vasculare la cartofi sau tomate nu va prezenta acest fenomen. Detectarea granulelor de poli-β-hidroxibutirat (PHB) Granulele de PHB din celulele de Ralstonia solanacearum sunt vizualizate prin colorarea cu albastru
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
din extractul concentrat resuspendat și fiecare diluție într-un șir de ferestre. Șirul rămas poate fi folosit ca duplicat sau pentru un al doilea eșantion, după cum se prezintă în figura 2. 2.2. Se lasă picăturile să se usuce. Celulele bacteriene se fixează pe lamă prin încălzire, trecere prin flacără sau cu 95% etanol. 2.3 Procedura IF (i) În conformitate cu pregătirea lamei de test de la 2.1 pct. (i): se prepară un set de diluții duble ale antiserului în tampon IF
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
II, 4.1) și confirmarea culturilor de Ralstonia solanacearum se face printr-un test de patogenicitate (secțiunea II, 4.3). Interpretarea rezultatului testului de placare selectivă: Testul de placare selectivă este negativ dacă după șase zile nu sunt izolate colonii bacteriene sau dacă nu sunt izolate colonii caracteristice Ralstonia solanacearum, cu condiția să nu fie bănuită o inhibiție din cauza coloniilor unei alte bacterii și ca coloniile caracteristice de Ralstonia solanacearum să fie găsite în controalele pozitive. Testul de placare selectivă este
jrc3681as1998 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88841_a_89628]
-
Identitatea și puritatea soiului (în câmp) 120 7 100 Merelbeke (B) Calitatea morfologică a semințelor (în laborator) Solanum tuberosum DGPC Identitatea și puritatea soiului, starea fitosanitară a plantelor (în câmp) 250 51 900 Oeiras (P) Starea fitosanitară a plantelor (veștejire bacteriană/putregai brun/viroidul tuberculului fusiform al cartofului) (în laborator) Glycine max ENSE Identitatea și puritatea soiului (în câmp) 50 8 000 Milano (I) Brassica napus* NIAB Identitatea și puritatea soiului (în câmp) 120 25 600 Cambridge (UK) Calitatea morfologică a
jrc5550as2002 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90720_a_91507]
-
folosi în această etapă 1 mg/ml de gentamicină). Dacă proba a fost expediată într-un mediu de transport (adică sub antibiotice), tratamentul cu antibiotice al lichidului de suprafață nu este necesar. Tratamentul cu antibiotice are drept scop limitarea contaminării bacteriene a probelor și face inutilă orice filtrare cu ajutorul filtrelor cu membrane. Dacă lichidul de suprafață colectat este conservat la - 80°C în intervalul de 48 de ore de la luarea probelor, el poate fi reutilizat o singură dată pentru un examen
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
zile, celulele pot fi lăsate o dată și incubate pentru a se ajunge la numărul total de patrusprezece zile de la inocularea inițială. Nu trebuie să existe semne de toxicitate în cursul ultimelor șapte zile de incubare. Dacă se produce o contaminare bacteriană în ciuda tratamentului cu antibiotice, sub-cultura trebuie să fie precedată de o centrifugare la 2000-4000 x g timp de 15 până la 30 de minute, la o temperatură de 2 până la 5°C, și/sau de o filtrare a lichidului de suprafață
jrc4925as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90093_a_90880]
-
a unor forme superioare de plante care să ducă la deformări nedorite ale echilibrului organismelor prezente în corpul de apă sau ale calității fizico-chimice a apei sau a sedimentelor. Comunitatea fitobentonică nu este afectată negativ de fasciculele sau de învelișurile bacteriene prezente ca urmare a activității antropice. Compoziția taxonomică fitobentonică și macrofită diferă moderat față de comunitățile specifice acestui tip și este mult mai deformată decât în cazul unei situații bune. Apar modificări moderate în abundența macrofită și fitobentonică medie. Comunitatea fitobentonică
jrc4605as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89771_a_90558]
-
diferă moderat față de comunitățile specifice acestui tip și este mult mai deformată decât în cazul unei situații bune. Apar modificări moderate în abundența macrofită și fitobentonică medie. Comunitatea fitobentonică este combinată și, în anumite zone, înlocuită cu fasciculele sau învelișurile bacteriene prezente ca urmare a activității antropice. Fauna nevertebrată bentonică Compoziția și abundența taxonomică corespund în totalitate sau aproape în totalitate condițiilor neperturbate. Raportul dintre categoriile taxonomice sensibile la modificări și cele insensibile nu arată nici o deteriorare față de nivelurile neperturbate. Nivelul
jrc4605as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89771_a_90558]
-
vegetației fitobentonice sau a unor forme superioare de plante care să ducă la deformări nedorite ale echilibrului organismelor prezente în corpul de apă sau ale calității fizico-chimice a apei. Comunitatea fitobentonică nu este afectată negativ de fasciculele sau de învelișurile bacteriene prezente ca urmare a activității antropice. Compoziția taxonomică fitobentonică și macrofită diferă moderat față de comunitățile specifice acestui tip și este mult mai deformată decât în cazul unei stări bune. Apar modificări moderate în abundența macrofită și fitobentonică medie. Comunitatea fitobentonică
jrc4605as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89771_a_90558]
-
moderat față de comunitățile specifice acestui tip și este mult mai deformată decât în cazul unei stări bune. Apar modificări moderate în abundența macrofită și fitobentonică medie. Comunitatea fitobentonică poate fi combinată și, în anumite zone, înlocuită cu fasciculele sau învelișurile bacteriene prezente ca urmare a activității antropice. Fauna nevertebrată bentonică Compoziția și abundența taxonomică corespund în totalitate sau aproape în totalitate condițiilor neperturbate. Raportul dintre categoriile taxonomice sensibile la modificări și cele insensibile nu arată nici o schimbare față de nivelurile neperturbate. Nivelul
jrc4605as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89771_a_90558]
-
Chester, Melbourne, Sydney, pp. 184-232. ANEXA 4D B.13/14. MUTAGENITATEA - TESTUL DE MUTAȚIE INVERSĂ PE BACTERII 1. METODA Prezenta metodă este reprodusă după linia directoare OCDE TG 471, Testul de mutație inversă pe bacterii (1997). 1.1. INTRODUCERE Testul bacterian de mutație inversă se bazează pe sușe de Salmonella typhimurium și Escherichia coli, care necesită aminoacizi, și urmărește detectarea mutațiilor punctiforme, care includ substituția, adăugarea sau deleția uneia sau a câtorva perechi de bază din ADN (1) (2) (3). Principiul
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
inversă se bazează pe sușe de Salmonella typhimurium și Escherichia coli, care necesită aminoacizi, și urmărește detectarea mutațiilor punctiforme, care includ substituția, adăugarea sau deleția uneia sau a câtorva perechi de bază din ADN (1) (2) (3). Principiul prezentului test bacterian de mutație inversă constă în detectarea mutațiilor care reîntorc mutațiile, prezente în sușele experimentale, în starea inițială și refac funcționalitatea bacteriilor de a sintetiza un aminoacid esențial. Bacteriile de inversare se detectează datorită capacității lor de a se dezvolta în
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
pentru sușa parentală experimentală. Mutațiile punctiforme sunt cauza multor maladii genetice umane și există dovezi substanțiale că mutațiile din oncogene și genele supresoare de tumori din celulele somatice sunt implicate în formarea tumorilor la oameni și animalele de laborator. Testul bacterian de mutație inversă este rapid, ieftin și relativ ușor de realizat. Multe dintre sușele experimentale au câteva particularități care le fac mai sensibile pentru detectarea de mutații, inclusiv secvențe de ADN sensibile la mutații în locurile de inversare, permeabilitate celulară
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
erori în timpul regenerării ADN. Specificitatea sușelor experimentale poate să furnizeze informații utile privind tipurile de mutații care sunt induse de către agenții genotoxici. O bază de date cu un număr mare de rezultate, pentru structuri foarte variate, este disponibilă pentru testele bacteriene de mutații inverse și au fost elaborate metodologii bine stabilite pentru testarea produselor chimice cu diferite proprietăți fizico-chimice, inclusiv a compușilor volatili. A se vedea introducerea generală din partea B. 1.2. DEFINIȚII Un test de mutație inversă, fie la Salmonella
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
care provoacă substituția perechilor de bază sunt agenți care provoacă substituirea unei baze din ADN. Într-un test de reversie, acest tip de modificare poate să se producă la locul mutației inițiale sau într-un al doilea loc în genomul bacterian. Mutageni de decalare a cadrului de citire sunt agenți care produc adăugarea sau deleția uneia sau a mai multor perechi de bază din ADN, modificând astfel cadrul de citire în ARN. 1.3. CONSIDERAȚII PRELIMINARE Testul bacterian de mutație inversă
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
loc în genomul bacterian. Mutageni de decalare a cadrului de citire sunt agenți care produc adăugarea sau deleția uneia sau a mai multor perechi de bază din ADN, modificând astfel cadrul de citire în ARN. 1.3. CONSIDERAȚII PRELIMINARE Testul bacterian de mutație inversă utilizează celule procariote, care diferă de celulele mamiferelor în privința absorbției, metabolismului, structurii cromozomilor și proceselor de regenerare a ADN. Pentru testele realizate in vitro este necesară în general o sursă exogenă de activare metabolică. Sistemele de activare
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
de activare metabolică. Sistemele de activare metabolică in vitro nu pot să reproducă în totalitate condițiile metabolismului celulelor de mamifere in vivo. Testul nu furnizează, prin urmare, informații directe privind capacitatea mutagenă și cancerigenă a unei substanțe la mamifere. Testul bacterian de mutație inversă se utilizează, de obicei, pentru o primă triere a activității genotoxice, în special pentru detectarea mutației punctiforme. O bogată bază de date demonstrează că multe produse chimice care dau rezultate pozitive în prezentul test prezintă activitate mutagenă
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
alte teste. Există exemple de agenți mutageni care nu se detectează prin acest test; aceste deficiențe se pot explica prin natura specifică a efectului detectat, activării metabolice diferite sau biodisponibilității diferite. Pe de altă parte, factorii care cresc sensibilitatea testului bacterian de mutație inversă pot să conducă la o supraestimare a activității mutagene. S-ar putea ca testul bacterian de mutație inversă să nu fie potrivit pentru evaluarea anumitor clase de substanțe chimice, de exemplu compușii cu acțiune bactericidă puternică (de
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]