2,287 matches
-
în vecinătatea acesteia (Check, 2002, 2003). În urma unui astfel de eșec, chiar dacă parțial, toate testele clinice bazate pe transducția retrovirală a limfocitelor T au fost interzise până la înțelegerea deplină a cauzelor care au condus la asemenea rezultate. 32.6. TERAPIA GENICĂ ÎN CANCER După estimările lui Strachan și Read (2004) peste 60% dintre protocoalele de terapie genică aprobate până acum, au fost elaborate pentru tratarea bolii canceroase, așa cum rezultă din tabelul 32.2. În cazul terapiei genice in vivo a tumorilor
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
bazate pe transducția retrovirală a limfocitelor T au fost interzise până la înțelegerea deplină a cauzelor care au condus la asemenea rezultate. 32.6. TERAPIA GENICĂ ÎN CANCER După estimările lui Strachan și Read (2004) peste 60% dintre protocoalele de terapie genică aprobate până acum, au fost elaborate pentru tratarea bolii canceroase, așa cum rezultă din tabelul 32.2. În cazul terapiei genice in vivo a tumorilor cerebrale (fig. 32.9) se realizează manipularea unui retrovirus spre a produce timidinkinaza specifică virusului Herpes
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
rezultate. 32.6. TERAPIA GENICĂ ÎN CANCER După estimările lui Strachan și Read (2004) peste 60% dintre protocoalele de terapie genică aprobate până acum, au fost elaborate pentru tratarea bolii canceroase, așa cum rezultă din tabelul 32.2. În cazul terapiei genice in vivo a tumorilor cerebrale (fig. 32.9) se realizează manipularea unui retrovirus spre a produce timidinkinaza specifică virusului Herpes simplex, desemnată HSV-TK. Celulele tumorale vor fi injectate cu un asemenea construct molecular și vor produce vectorul. Ele sunt desemnate
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
tumorale, care vor fi lizate selectiv. Acest tratament a fost eficient atunci când s-a asociat chimioterapiei sistemice. TIL - limfocite infiltrate intratumoral; TNF - factor de necroză tumorală; IL - interleukină; GM-CSF - factor stimulator de granulocit - macrofag; IFN - interferon. Există și o terapie genică ex vivo (fig. 32.10) a tumorilor solide, în cadrul căreia se urmărește modificarea genetică în cultură a limfocitelor infiltrante în tumori primare, metodă proiectată spre a fi aplicată în cazul melanomului metastatic. Limfocitele T infiltrate în tumori (TIL) sunt recoltate
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
a deveni vectori celulari cu ajutorul cărora se poate transporta retrovirusul recombinant în melanoamele metastazate (fig. 32.10). Retrovirusul recombinant are inserționată gena care specifică citokina antitumorală IL-2 sau TNF-α (factorul α de necroză tumorală). Dificultățile abordării acestei metode de terapie genică ex vivo sunt legate de eficientizarea transferului constructului genic retroviral în TIL-uri și reglarea negativă de către citokine, ce poate limita succesul operației. Implantare stereotactică ghidată de MRI a celulelor producătoare de vector (VPC) în tumorile creierului, in situ. 32
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
retrovirusul recombinant în melanoamele metastazate (fig. 32.10). Retrovirusul recombinant are inserționată gena care specifică citokina antitumorală IL-2 sau TNF-α (factorul α de necroză tumorală). Dificultățile abordării acestei metode de terapie genică ex vivo sunt legate de eficientizarea transferului constructului genic retroviral în TIL-uri și reglarea negativă de către citokine, ce poate limita succesul operației. Implantare stereotactică ghidată de MRI a celulelor producătoare de vector (VPC) în tumorile creierului, in situ. 32.7. TERAPIA GENICĂ ÎN INFECȚIILE CU HIV-1 HIV-1 este
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
sunt legate de eficientizarea transferului constructului genic retroviral în TIL-uri și reglarea negativă de către citokine, ce poate limita succesul operației. Implantare stereotactică ghidată de MRI a celulelor producătoare de vector (VPC) în tumorile creierului, in situ. 32.7. TERAPIA GENICĂ ÎN INFECȚIILE CU HIV-1 HIV-1 este cel mai periculos agent patogen viral la om, din care cauză s-au depus eforturi uriașe în înțelegerea ciclului reproducerii sale și în încercarea de a elabora strategii terapeutice, incluzând terapia genică. S-au
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
7. TERAPIA GENICĂ ÎN INFECȚIILE CU HIV-1 HIV-1 este cel mai periculos agent patogen viral la om, din care cauză s-au depus eforturi uriașe în înțelegerea ciclului reproducerii sale și în încercarea de a elabora strategii terapeutice, incluzând terapia genică. S-au realizat încercări de a obține vaccinuri ADN, pe de o parte, iar pe de alta de a manipula genetic celulele gazdă. Banca de date a Institutului Național de Sănătate din SUA - NIH (www4.od.nih.gov/oba/rac
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
de testări clinice trimise în perioada 1992-2001, în care se încearcă transferul de gene toate prezentând schema generală utilizată în cazul X-SCID (Strachan și Read, 2004). În principiu, celule stem hematopoietice sunt prelevate de la pacient și transfectate cu un construct genic = vector în care este inserționată o genă al cărei produs proteinic ar avea rolul de a inhiba replicarea HIV-1, după care celulele astfel transfectate sunt reintroduse în organismul pacientului. Cum patologia majoră a sindromului imunodeficienței dobândite implică infectarea și distrugerea
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
genomul său genele gag, pol și env. În replicația HIV-1 intervin și proteinele reglatoare Tat și Rev care se leagă la secvențele din ARN viral desemnate TAR și RRE. Aceste gene și aceste secvențe au fost considerate ținte pentru terapia genică anti- HIV-1 în încercarea de a conferi limfocitelor rezistență la infecția cu HIV-1. Strategiile terapeutice au fost orientate în mai multe direcții: 1) utilizarea unui ARN antisens față de TAR și față de ARNm suprapus tat și rev, precum și față de pol și
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
Spre deosebire de retrovirusurile simple, HIV-1 codifică încă două proteine reglatoare Tat și Rev, care se leagă la secvențele TAR și RRE din genomul viral, secvențe care sunt esențiale în replicarea acestuia. De aceea, aceste secvențe au devenit ținta protocoalelor de terapie genică în SIDA (din Strachan și Read, 2004). Celulele manipulate in vitro manifestă înaltă rezistență la infecția cu HIV, precum și in vivo cu grefe de măduvă osoasă, rezistența durează câteva luni până la unul sau doi ani. În cazuri disperate, se urmărește
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
și realizarea de grefă de măduvă osoasă cu celule T rezistente la infecția HIV-1. Utilizarea ribozimelor (molecule ribonucleice autocatalitice) în terapia anticanceroasă vizează anihilarea componentei ARN a telomerazei, blocarea splicing-ului pre-ARNm la joncțiunile intronexon sau a peptidil-transferazei din ribozomi. Terapia genică vizează utilizarea acelor ribozime care taie ARN țintă cu specificitate de secvență. În figura 32.13 se prezintă principiul utilizării unei ribozime transclivatoare, de tip „cap de ciocan”, spre a distruge un ARNm mutant. Utilizarea ARN de interferență (ARNi) în
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
oră. În anul 2006, pentru descoperirea fenomenului ARN interferență s-a acordat Premiul Nobel în Fiziologie și Medicină, cercetătorilor americani, profesori Craig Mello (de la Universitatea Massachussetts Medical School in Worcester) și Andrew Fire (de la Universitatea Standford din California). În terapia genică, porțiunea care conține ținta (situsul de clivaj) este separată de catena catalitică (ribozima manipulată in vitro). Proiectarea unei ribozime cu secvența (YYYY...) complementară țintei ce trebuie distrusă având secvența (XXXX...) conferă acesteia capacitatea de a distruge aproape orice țintă ribonucleică
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
care se asigură o sinteză intensă de molecule de ARNr și o rezervă mare de precursori ribozomali exprimate prin volumul enorm al nucleolului (fig. 33.1). Amplificarea prin politenie conduce la formarea de numeroase copii ale matriței ADN pentru locusul genic în care sunt localizați cistronii ribozomali. Totodată la nivel citologic, se revelează și existența acestui locus genic „ab initio” în numeroase exemplare apărute prin duplicație genică în urma mecanismului de crossing-over inegal sau prin replicație eronată sectorială a ADN, astfel încât apar
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
exprimate prin volumul enorm al nucleolului (fig. 33.1). Amplificarea prin politenie conduce la formarea de numeroase copii ale matriței ADN pentru locusul genic în care sunt localizați cistronii ribozomali. Totodată la nivel citologic, se revelează și existența acestui locus genic „ab initio” în numeroase exemplare apărute prin duplicație genică în urma mecanismului de crossing-over inegal sau prin replicație eronată sectorială a ADN, astfel încât apar mai multe asemenea regiuni organizator nucleololare în care cromatina ia aspect decondensat, stare în care este posibilă
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
Amplificarea prin politenie conduce la formarea de numeroase copii ale matriței ADN pentru locusul genic în care sunt localizați cistronii ribozomali. Totodată la nivel citologic, se revelează și existența acestui locus genic „ab initio” în numeroase exemplare apărute prin duplicație genică în urma mecanismului de crossing-over inegal sau prin replicație eronată sectorială a ADN, astfel încât apar mai multe asemenea regiuni organizator nucleololare în care cromatina ia aspect decondensat, stare în care este posibilă transcripția genelor ribozomale. Prin apoziția produșilor de transcripție la
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
pe care le exploatează A. tumefaciens în cursul infecției servesc altor funcții fiziologice ale plantei gazdă, astfel că silențierea unor asemenea gene endogene trebuie să aibă efecte pleiotropice negative. Silențierea oncogenelor reprezintă o altă strategie în rezistența mediată prin silențiere genică posterioară transferului T-ADN (PTGS) care interferă cu dezvoltarea tumorilor de colet, urmare a integrării T-ADN în genomul plantei. Expresia bacteriooncogenelor iaaM, iaaH și ipt în celulele plantelor transformate se asociază cu sinteza rapidă a auxinei și citokininei care
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
care catalizează condensarea AMP și izopentenilpirofosfatului spre a se forma citokinin zeatina. Expresia ambelor aceste bacteriooncogene în celula gazdă este necesară și suficientă pentru formarea tumorilor de colet ale plantelor, în natură. Interferența ARN (iARN) este o formă de silențiere genică dependentă de omologie comună fungilor, animalelor și plantelor. Există specificități diferențiatoare ale acestui fenomen pentru fiecare regn, dar inițiatorul universal al iARN pare a fi un ARN dublu catenar. La plante, expresia ARN-urilor complementare din constructe transgenice introduse în
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
individual într-un vector de expresie în celule vegetale ce conține promotorul virusului mozaicului conopidei și terminatorul genei octopin sintazei. Casetele de expresie realizate astfel au fost ulterior introduse prin ligație în vectorul binar pDU99.2215 care conține un marker genic selectabil condus de promotorul manopin sintazei și uidA (β-glucozidaza, GUS) condusă de promotorul ubi3 din cartof. A rezultat astfel un vector binar desemnat pDE00.0201 care a fost transferat prin electroporare în sușa EHA1001 de A. tumefaciens dezarmat (fig. 33
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
care manifestă o mare omologie de organizare și funcționare în inducerea tumorigenezei la plante. Escobar și colaboratorii (2001) au valorificat aceste particularități genomice spre a obține rezistență la tumorigeneza de colet, prin țintirea oncogenelor iaaM și ipt pe calea silențierii genice mediate de iARN. Căile biosintezei endogene de fitohormoni pot include reacții care sunt analoage biochimic cu cele catalizate de iaaM și ipt, neexistând gene în genomul vegetal care să prezinte similitudine semnificativă cu aceste bacteriooncogene. Din această cauză, asemenea bacteriooncogene
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
din diferite izolate de A. tumefaciens exită o identitate de secvență de aproximativ 90% este posibil ca o asemenea strategie să ofere un spectru îngust de rezistență la tumorigeneză de colet. Admițând că A. tumefaciens nu posedă supresori de silențiere genică de tip viral, autorii au emis ipoteza că rezistența ar putea fi înalt durabilă, deoarece specificitatea este mediată de hibridarea ARN, mai curând decât de legarea de proteină. Pentru multe sisteme genice de rezistență a plantelor la patogeni, mutațiile minore
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
că A. tumefaciens nu posedă supresori de silențiere genică de tip viral, autorii au emis ipoteza că rezistența ar putea fi înalt durabilă, deoarece specificitatea este mediată de hibridarea ARN, mai curând decât de legarea de proteină. Pentru multe sisteme genice de rezistență a plantelor la patogeni, mutațiile minore în genele de avirulență ale patogenilor pot altera interacțiunile proteină-proteină, spre a iniția un răspuns de apărare. Totuși, întrun sistem de rezistență mediat de iARN, mutația este improbabilă să altereze rapid secvența
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
de rezistență a plantelor la patogeni, mutațiile minore în genele de avirulență ale patogenilor pot altera interacțiunile proteină-proteină, spre a iniția un răspuns de apărare. Totuși, întrun sistem de rezistență mediat de iARN, mutația este improbabilă să altereze rapid secvența genică țintă la un nivel la care silențierea genică dependentă de o omologie de 70% să nu mai fie posibilă. Faptul că tumorigeneza este uniform inhibată în liniile transgenice sugerează că silențierea transcriptelor iaaM și ipt este independentă de structura, locația
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
în genele de avirulență ale patogenilor pot altera interacțiunile proteină-proteină, spre a iniția un răspuns de apărare. Totuși, întrun sistem de rezistență mediat de iARN, mutația este improbabilă să altereze rapid secvența genică țintă la un nivel la care silențierea genică dependentă de o omologie de 70% să nu mai fie posibilă. Faptul că tumorigeneza este uniform inhibată în liniile transgenice sugerează că silențierea transcriptelor iaaM și ipt este independentă de structura, locația și numărul de copii ale locusului țintă din
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
în liniile transgenice sugerează că silențierea transcriptelor iaaM și ipt este independentă de structura, locația și numărul de copii ale locusului țintă din ADN genomic al gazdei. Aceste rezultate sugerează că locusul de silențiere și locusul țintă determină eficiența silențierii genice. Cercetările lui John și Amasino (1989) au evidențiat schimbări dramatice în pattern-ul de metilare ce însoțesc activarea unei gene ipt din T-ADN silențiat din celulele vegetale transformate cu A. tumefaciens. Autorii au încrucișat o plantă mascul sterilă de
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]