7,898 matches
-
clar rezultate pozitive sau negative, în unele cazuri rare datele stabilite vor exclude posibilitatea unei concluzii definitive cu privire la activitatea substanței de testat. Rezultatele pot să rămână nesigure sau discutabile, independent de numărul de experimente. Rezultatele pozitive ale unui test de mutație bacteriană inversă indică faptul că substanța de testat induce mutații punctiforme prin substituirea bazelor sau decalarea cadrului de citire în genomul de Salmonella typhimurium și/sau Escherichia coli. Rezultatele negative indică faptul că, în condiții experimentale, substanța de testat nu
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
stabilite vor exclude posibilitatea unei concluzii definitive cu privire la activitatea substanței de testat. Rezultatele pot să rămână nesigure sau discutabile, independent de numărul de experimente. Rezultatele pozitive ale unui test de mutație bacteriană inversă indică faptul că substanța de testat induce mutații punctiforme prin substituirea bazelor sau decalarea cadrului de citire în genomul de Salmonella typhimurium și/sau Escherichia coli. Rezultatele negative indică faptul că, în condiții experimentale, substanța de testat nu este mutagenă pentru speciile testate. 3. RAPORTAREA RAPORTUL TESTULUI Raportul
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
of Data from Microbial Colony Assays, in: UKEMS Sub-Committee on Guidelines for Mutagenicity Testing. Part II. Statistical Evaluation of Mutagenicity Test Data, ed. Kirkland, D. J., Cambridge University Press, pp. 28-65. ANEXA 4E B.17. MUTAGENITATEA - TEST IN VITRO DE MUTAȚIE GENICĂ PE CELULE DE MAMIFERE 1. METODA Prezenta metodă este reprodusă după linia directoare OCDE TG 476, Testul in vitro de mutație genică pe celule de mamifere (1997). 1.1. INTRODUCERE Testul in vitro de mutație genică pe celule de
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
ed. Kirkland, D. J., Cambridge University Press, pp. 28-65. ANEXA 4E B.17. MUTAGENITATEA - TEST IN VITRO DE MUTAȚIE GENICĂ PE CELULE DE MAMIFERE 1. METODA Prezenta metodă este reprodusă după linia directoare OCDE TG 476, Testul in vitro de mutație genică pe celule de mamifere (1997). 1.1. INTRODUCERE Testul in vitro de mutație genică pe celule de mamifere se poate utiliza pentru detectarea mutațiilor genice produse de substanțele chimice. Liniile celulare corespunzătoare conțin celule de limfom de șoarece L5178Y
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
TEST IN VITRO DE MUTAȚIE GENICĂ PE CELULE DE MAMIFERE 1. METODA Prezenta metodă este reprodusă după linia directoare OCDE TG 476, Testul in vitro de mutație genică pe celule de mamifere (1997). 1.1. INTRODUCERE Testul in vitro de mutație genică pe celule de mamifere se poate utiliza pentru detectarea mutațiilor genice produse de substanțele chimice. Liniile celulare corespunzătoare conțin celule de limfom de șoarece L5178Y, liniile CHO, CHO-AS52 și V79 de celule de hamster chinezesc și celule limfoblastoide umane
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
METODA Prezenta metodă este reprodusă după linia directoare OCDE TG 476, Testul in vitro de mutație genică pe celule de mamifere (1997). 1.1. INTRODUCERE Testul in vitro de mutație genică pe celule de mamifere se poate utiliza pentru detectarea mutațiilor genice produse de substanțele chimice. Liniile celulare corespunzătoare conțin celule de limfom de șoarece L5178Y, liniile CHO, CHO-AS52 și V79 de celule de hamster chinezesc și celule limfoblastoide umane TK6 (1). În liniile celulare menționate, efectele genetice cel mai frecvent
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
substanțele chimice. Liniile celulare corespunzătoare conțin celule de limfom de șoarece L5178Y, liniile CHO, CHO-AS52 și V79 de celule de hamster chinezesc și celule limfoblastoide umane TK6 (1). În liniile celulare menționate, efectele genetice cel mai frecvent măsurate sunt o mutație în pozițiile timidin kinază (TK) și hipoxantin-guanină fosforibozil transferază (HPRT), precum și o transgenă de xantin-guanină fosforibozil transferază (XPRT). Testele de mutație TK, HPRT și XPRT permit detectarea diferitelor spectre ale diferitelor fenomene genetice. Amplasarea autozomică a TK și XPRT poate
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
chinezesc și celule limfoblastoide umane TK6 (1). În liniile celulare menționate, efectele genetice cel mai frecvent măsurate sunt o mutație în pozițiile timidin kinază (TK) și hipoxantin-guanină fosforibozil transferază (HPRT), precum și o transgenă de xantin-guanină fosforibozil transferază (XPRT). Testele de mutație TK, HPRT și XPRT permit detectarea diferitelor spectre ale diferitelor fenomene genetice. Amplasarea autozomică a TK și XPRT poate să permită detectarea fenomenelor genetice (de ex. deleții importante) care nu sunt detectate în locusul HPRT la cromozomii X (2) (3
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
ale diferitelor fenomene genetice. Amplasarea autozomică a TK și XPRT poate să permită detectarea fenomenelor genetice (de ex. deleții importante) care nu sunt detectate în locusul HPRT la cromozomii X (2) (3) (4) (5) (6). În testul in vitro de mutație genică pe celule de mamifere, se pot utiliza culturi de linii celulare stabilite sau sușe celulare. Celule utilizate se selectează în funcție de capacitatea de creștere în cultură și de stabilitatea frecvenței de mutație spontană. Testele realizate in vitro necesită, în general
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
4) (5) (6). În testul in vitro de mutație genică pe celule de mamifere, se pot utiliza culturi de linii celulare stabilite sau sușe celulare. Celule utilizate se selectează în funcție de capacitatea de creștere în cultură și de stabilitatea frecvenței de mutație spontană. Testele realizate in vitro necesită, în general, utilizarea unei surse exogene de activare metabolică. Sistemul de activare metabolică de acest tip nu poate să reproducă integral condițiile celulelor de mamifere in vivo. Ar trebui să se acorde atenție evitării
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
existența unor agenți cancerigeni care nu se depistează prin prezentul test, deoarece este posibil ca aceștia să acționeze prin alte mecanisme, negenotoxice sau mecanisme absente în celulele bacteriene (6). A se vedea și introducerea generală din partea B. 1.2. DEFINIȚII Mutație directă: o mutație a genelor de la forma originală la forma mutantă care generează o reducere a activității enzimatice din funcția proteinei codificate. Mutageni care provoacă substituția perechilor de bază: substanțe care produc substituția uneia sau mai multor perechi de bază
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
cancerigeni care nu se depistează prin prezentul test, deoarece este posibil ca aceștia să acționeze prin alte mecanisme, negenotoxice sau mecanisme absente în celulele bacteriene (6). A se vedea și introducerea generală din partea B. 1.2. DEFINIȚII Mutație directă: o mutație a genelor de la forma originală la forma mutantă care generează o reducere a activității enzimatice din funcția proteinei codificate. Mutageni care provoacă substituția perechilor de bază: substanțe care produc substituția uneia sau mai multor perechi de bază din ADN. Mutageni
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
citire: substanțe care produc adăugarea sau deleția uneia sau a mai multor perechi de bază din molecula de ADN. Timpul de manifestare a fenotipului: timpul în care produsele nemodificate ale genelor sunt epuizate din celulele care au suferit o nouă mutație. Frecvența mutantului: numărul de celule mutante observate împărțit la numărul de celule viabile. Creștere totală relativă: creșterea numărului de celule în timp, în raport cu populația de celule martor; se calculează ca produsul dintre creșterea în suspensie în raport cu martorul negativ și eficacitatea
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
de manifestare. Supraviețuire: eficacitatea clonării celulelor tratate atunci când sunt depuse pe placă la încheierea perioadei de tratament; supraviețuirea se exprimă în raport cu supraviețuirea populației de celule martor. 1.3. PRINCIPIUL METODEI DE TESTARE Celulele cu deficit de timidin chinază (TK) datorită mutației TK+/- →TK-/- sunt rezistente la efectele citotoxice ale trifluorotimidinei (TFT), un analog al pirimidinei. Celulele care posedă timidin chinază sunt sensibile la TFT, care produce inhibarea metabolismului celular și întrerupe diviziunea celulară. Prin urmare, celulele mutante pot să prolifereze în
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
nu pot. În mod similar, celulele cu deficit de HPRT sau XPRT sunt selectate în funcție de rezistența la 6-tioguanină (TG) sau 8-azaguanină (AG). Dacă analogul unei baze sau un compus înrudit cu agentul selectiv este supus la unul din testele de mutație genică pe celule de mamifere, proprietățile substanței de testat trebuie studiate cu grijă. De exemplu, ar trebui să se examineze substanța de testat suspectată de toxicitate selectivă pentru celule mutante și nemutante. În consecință, performanța sistemului/agentului de selecție trebuie
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
sau a creșterii totale relative a culturilor după perioada de tratament. Culturile tratate sunt menținute în mediul de cultură un timp suficient, caracteristic pentru fiecare locus și tip de celulă selectate, pentru a permite o manifestare fenotipică aproape optimă a mutațiilor induse. Frecvența mutanților se determină prin însămânțarea unui număr cunoscut de celule într-un mediu ce conține agentul selectiv pentru a detecta celulele mutante și într-un mediu fără agent selectiv pentru a determina eficacitatea clonării (viabilitatea). După un timp
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
utiliza în prezentul test, inclusiv subclonele de celule L5171Y, CHO, CHO-AS52, V79 sau TK6. Tipurile de celule utilizate în prezentul test ar trebui să aibă o sensibilitate dovedită la mutageni chimici, o eficacitate mare de clonare și o frecvență de mutație spontană stabilă. Ar trebui să se verifice contaminarea cu micoplasmă a celulelor și, dacă se constată că sunt contaminate, nu ar trebui să se utilizeze. Testul ar trebui conceput astfel încât să aibă o sensibilitate și putere predeterminate. Numărul de celule
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
Numărul de celule, culturi și concentrațiile substanței de testat utilizate ar trebui să reflecte parametrii definiți anterior (14). Numărul minim de celule viabile care supraviețuiesc tratamentului și se utilizează în fiecare stadiu al testului ar trebui să fie în funcție de frecvența mutației spontane. O regulă generală constă în utilizarea unui număr de celule cel puțin egal cu de 10 ori inversul frecvenței de mutație spontană. Cu toate acestea, se recomandă utilizarea a minimum 106 celule. Pentru a asigura o performanță constantă a
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
viabile care supraviețuiesc tratamentului și se utilizează în fiecare stadiu al testului ar trebui să fie în funcție de frecvența mutației spontane. O regulă generală constă în utilizarea unui număr de celule cel puțin egal cu de 10 ori inversul frecvenței de mutație spontană. Cu toate acestea, se recomandă utilizarea a minimum 106 celule. Pentru a asigura o performanță constantă a testului, ar trebui să se dispună de date anterioare specifice privind sistemul celular utilizat. 1.4.1.2. Mediile și condițiile de
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
negative, în unele cazuri rare, datele stabilite vor exclude posibilitatea unei concluzii definitive cu privire la activitatea substanței de testat. Rezultatele pot să rămână nesigure sau discutabile independent de numărul de repetări ale experimentului. Rezultatele pozitive ale unui test in vitro de mutație genică pe celule de mamifere indică faptul că substanța de testat produce mutații genice în celulele de mamifere, în cultură. Un rezultat concentrație-răspuns pozitiv reproductibil este foarte semnificativ. Rezultatele negative indică faptul că, în condiții experimentale, substanța de testat nu
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
cu privire la activitatea substanței de testat. Rezultatele pot să rămână nesigure sau discutabile independent de numărul de repetări ale experimentului. Rezultatele pozitive ale unui test in vitro de mutație genică pe celule de mamifere indică faptul că substanța de testat produce mutații genice în celulele de mamifere, în cultură. Un rezultat concentrație-răspuns pozitiv reproductibil este foarte semnificativ. Rezultatele negative indică faptul că, în condiții experimentale, substanța de testat nu produce mutații genice în celulele de mamifere utilizate, în cultură. 3. RAPORTAREA RAPORTUL
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
pe celule de mamifere indică faptul că substanța de testat produce mutații genice în celulele de mamifere, în cultură. Un rezultat concentrație-răspuns pozitiv reproductibil este foarte semnificativ. Rezultatele negative indică faptul că, în condiții experimentale, substanța de testat nu produce mutații genice în celulele de mamifere utilizate, în cultură. 3. RAPORTAREA RAPORTUL TESTULUI Raportul testului trebuie să conțină următoarele informații: Solventul/vehiculul: - justificarea alegerii vehiculului, - solubilitatea și stabilitatea substanței de testat în solvent/vehicul, dacă se cunoaște. Celulele: - tipul și sursa
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
două tipuri, cromozomiale sau cromatidice. La majoritatea mutagenilor chimici, aberațiile induse sunt de tip cromatidic, dar se produc și aberații de tip cromozomial. Prezenta metodă nu este destinată determinării aberațiilor numerice și, în general, nu se utilizează în acest scop. Mutațiile cromozomiale și fenomenele conexe sunt cauza multor maladii genetice umane. Prezentul test determină fenomenele cromozomiale din celulele germinale spermatogoniale și, prin urmare, ar trebui să permită estimarea mutațiilor transmisibile produse în celulele germinale. Pentru test se utilizează, în general, rozătoare
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
determinării aberațiilor numerice și, în general, nu se utilizează în acest scop. Mutațiile cromozomiale și fenomenele conexe sunt cauza multor maladii genetice umane. Prezentul test determină fenomenele cromozomiale din celulele germinale spermatogoniale și, prin urmare, ar trebui să permită estimarea mutațiilor transmisibile produse în celulele germinale. Pentru test se utilizează, în general, rozătoare. Prezentul test citogenetic in vivo permite detectarea aberațiilor cromozomiale din mitozele spermatogoniale. Alte celule țintă nu fac obiectul prezentului test. Pentru detectarea aberațiilor de tip cromatidic din celulele
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
comunale, cu excepția: a) impozitelor indirecte, încorporate în mod normal în prețul mărfurilor sau al serviciilor; ... b) impozitelor și taxelor pe bunuri imobile particulare, situate pe teritoriul statului de reședință, sub rezerva dispozițiilor art. 45; ... c) drepturilor de succesiune și de mutație, percepute de către statul de reședință, sub rezerva prevederilor art. 57; ... d) impozitelor și taxelor pe orice fel de venituri particulare care își au sursă în statul de reședință; ... e) drepturilor percepute că remunerare a serviciilor particulare prestate; ... f) taxelor de
EUR-Lex () [Corola-website/Law/124026_a_125355]