11,087 matches
-
Utilizarea altor solvenți/vehicule decât cele recunoscute ar trebui să fie justificată cu date care să demonstreze compatibilitatea acestora. Se recomandă ca, ori de câte ori este posibil, să se prefere utilizarea unui solvent/vehicul apos. Când se testează substanțe instabile în apă, solventul organic utilizat ar trebui să nu conțină apă. 1.5.2. Condițiile de testare 1.5.2.1. Sușele experimentale (vezi 1.5.1.1) 1.5.2.2. Concentrația de expunere Printre criteriile care trebuie luate în considerație la
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
un conținut substanțial de posibile impurități mutagene, s-ar putea avea în vedere testarea la concentrații mai mari de 5 mg/placă sau 5μl/placă. 1.5.2.3. Martorii negativi și pozitivi Martorii pozitivi specifici sușei și martorii negativi (solvent sau vehicul) utilizați în paralel, ar trebui să se includă în fiecare test, atât în prezența, cât și în absența activării metabolice. Pentru martorii pozitivi, ar trebui să fie selectate acele concentrații care permit să se demonstreze eficiența testului realizat
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
plasmid Se pot utiliza și alte substanțe de referință ca martori pozitivi corespunzători. Ar trebui să se aibă în vedere utilizarea unor martori pozitivi din aceeași clasă chimică, dacă sunt disponibili. Ar trebui să se utilizeze martori negativi, constituiți din solvent sau vehicul fără substanța de testat, dar tratați în același mod ca grupele cu tratament. În plus, ar trebui să se utilizeze și martori netratați, cu excepția cazului în care există date din testele anterioare care să ateste că solventul ales
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
din solvent sau vehicul fără substanța de testat, dar tratați în același mod ca grupele cu tratament. În plus, ar trebui să se utilizeze și martori netratați, cu excepția cazului în care există date din testele anterioare care să ateste că solventul ales nu are efecte dăunătoare sau mutagene. 1.5.3. Modul de lucru Pentru metoda de încorporare prin depunere pe o placă (1) (2) (3) (4), fără activare metabolică, se prepară, de obicei, un amestec din 0,05 ml sau
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
1. PRELUCRAREA REZULTATELOR Datele ar trebui să se prezinte sub forma numărului de colonii care provoacă reversia de pe fiecare placă. De asemenea, ar trebui să se prezinte numărul de colonii care provoacă reversie, atât pe plăcile cu martor negativ (martor solvent și martor netratat, dacă s-a utilizat), cât și pentru plăcile cu martor pozitiv. Ar trebui să se prezinte numărătoarea pentru fiecare placă, numărul mediu de colonii care provoacă reversia pentru fiecare placă și deviația standard pentru substanța de testat
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
pentru plăcile cu martor pozitiv. Ar trebui să se prezinte numărătoarea pentru fiecare placă, numărul mediu de colonii care provoacă reversia pentru fiecare placă și deviația standard pentru substanța de testat și pentru martorii pozitivi și negativi (netratați și/sau solvent). Nu este necesară verificarea unui răspuns clar pozitiv. Rezultatele nesigure ar trebui să fie clarificate prin teste suplimentare, realizate de preferință prin modificarea uneia dintre condițiile experimentale. Rezultatele negative necesită confirmare pentru fiecare caz. În cazurile în care se consideră
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
cadrului de citire în genomul de Salmonella typhimurium și/sau Escherichia coli. Rezultatele negative indică faptul că, în condiții experimentale, substanța de testat nu este mutagenă pentru speciile testate. 3. RAPORTAREA RAPORTUL TESTULUI Raportul testului trebuie să conțină următoarele informații: Solventul/vehiculul: - justificarea alegerii vehiculului, - solubilitatea și stabilitatea substanței de testat în solvent/vehicul, dacă se cunoaște. Sușele: - sușele utilizate, - numărul de celule per cultură, - caracteristicile sușei, Condițiile de testare: - cantitatea de substanță de testat per placă (mg/placă sau μl
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
Rezultatele negative indică faptul că, în condiții experimentale, substanța de testat nu este mutagenă pentru speciile testate. 3. RAPORTAREA RAPORTUL TESTULUI Raportul testului trebuie să conțină următoarele informații: Solventul/vehiculul: - justificarea alegerii vehiculului, - solubilitatea și stabilitatea substanței de testat în solvent/vehicul, dacă se cunoaște. Sușele: - sușele utilizate, - numărul de celule per cultură, - caracteristicile sușei, Condițiile de testare: - cantitatea de substanță de testat per placă (mg/placă sau μl/placă) cu justificarea alegerii dozei și numărului de plăci per concentrație, - mediile
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
procedurile de tratament. Rezultatele: - semnele de toxicitate, - semnele de precipitare, - numărătoarea pentru fiecare placă, - numărul mediu de colonii care provoacă reversia pentru fiecare placă și deviația standard - relația doză-răspuns, dacă este posibil, - analizele statistice, dacă există, - datele privind martorii negativi (solvent/vehicul) și pozitivi studiați în paralel, cu domenii, valori medii și deviații standard, - datele privind martorii negativi (solvent/vehicul) și pozitivi studiați anterior, cu domenii, valori medii și deviații standard. Discutarea rezultatelor. Concluziile. 4. BIBLIOGRAFIA (1) Ames, B. N., McCann
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
care provoacă reversia pentru fiecare placă și deviația standard - relația doză-răspuns, dacă este posibil, - analizele statistice, dacă există, - datele privind martorii negativi (solvent/vehicul) și pozitivi studiați în paralel, cu domenii, valori medii și deviații standard, - datele privind martorii negativi (solvent/vehicul) și pozitivi studiați anterior, cu domenii, valori medii și deviații standard. Discutarea rezultatelor. Concluziile. 4. BIBLIOGRAFIA (1) Ames, B. N., McCann, J. and Yamasaki E. (1975), Methods for Detecting Carcinogens and Mutagens with the Salmonella/Mammalian-Microsome Mutagenicity Test, Mutation
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
vedere științific (de ex. prin importanța izoenzimei citocromului P450 pentru metabolismul substanței de testat). 1.4.1.5. Prepararea substanței de testat Substanțele de testat în stare solidă ar trebui să se preparare sub formă de soluții sau suspensii în solvenții sau vehiculele corespunzătoare, care, dacă este cazul, se diluează înaintea tratamentului celulelor. Substanțele de testat lichide se pot adăuga direct în sistemele de testare și/sau se diluează înainte de utilizare în tratamentul celulelor. Se recomandă utilizarea preparatelor proaspete de substanță
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
sau se diluează înainte de utilizare în tratamentul celulelor. Se recomandă utilizarea preparatelor proaspete de substanță de testat, cu excepția cazului în care există date care să demonstreze stabilitatea acestora la păstrare. 1.4.2. Condițiile de testare 1.4.2.1 Solventul/vehiculul Solventul/vehiculul ar trebui să fie ales, astfel încât să nu existe suspiciunea reacției chimice a acestuia cu substanța de testat și să nu afecteze negativ supraviețuirea celulelor și activitatea S9. Utilizarea altor solvenți/vehicule decât cele recunoscute ar trebui
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
diluează înainte de utilizare în tratamentul celulelor. Se recomandă utilizarea preparatelor proaspete de substanță de testat, cu excepția cazului în care există date care să demonstreze stabilitatea acestora la păstrare. 1.4.2. Condițiile de testare 1.4.2.1 Solventul/vehiculul Solventul/vehiculul ar trebui să fie ales, astfel încât să nu existe suspiciunea reacției chimice a acestuia cu substanța de testat și să nu afecteze negativ supraviețuirea celulelor și activitatea S9. Utilizarea altor solvenți/vehicule decât cele recunoscute ar trebui să se
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
de testare 1.4.2.1 Solventul/vehiculul Solventul/vehiculul ar trebui să fie ales, astfel încât să nu existe suspiciunea reacției chimice a acestuia cu substanța de testat și să nu afecteze negativ supraviețuirea celulelor și activitatea S9. Utilizarea altor solvenți/vehicule decât cele recunoscute ar trebui să se justifice cu date care să demonstreze compatibilitatea acestora. Se recomandă ca, ori de câte ori este posibil, să se prefere un solvent/vehicul apos. La testarea substanțelor instabile în apă, solventul organic utilizat nu ar
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
testat și să nu afecteze negativ supraviețuirea celulelor și activitatea S9. Utilizarea altor solvenți/vehicule decât cele recunoscute ar trebui să se justifice cu date care să demonstreze compatibilitatea acestora. Se recomandă ca, ori de câte ori este posibil, să se prefere un solvent/vehicul apos. La testarea substanțelor instabile în apă, solventul organic utilizat nu ar trebui să conțină urme de apă. Apa se poate elimina prin adăugarea unei site moleculare. 1.4.2.2 Concentrațiile de expunere Printre criteriile ce trebuie să
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
activitatea S9. Utilizarea altor solvenți/vehicule decât cele recunoscute ar trebui să se justifice cu date care să demonstreze compatibilitatea acestora. Se recomandă ca, ori de câte ori este posibil, să se prefere un solvent/vehicul apos. La testarea substanțelor instabile în apă, solventul organic utilizat nu ar trebui să conțină urme de apă. Apa se poate elimina prin adăugarea unei site moleculare. 1.4.2.2 Concentrațiile de expunere Printre criteriile ce trebuie să fie avute în vedere la determinarea dozei maxime sunt
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
prezenței celulelor, S9, serului etc. Insolubilitatea se poate constata cu ochiul liber. Ar trebui ca precipitarea să nu interfereze cu determinarea rezultatelor. 1.4.2.3 Martorii În fiecare experiment, ar trebui să se includă simultan martorii pozitivi și negativi (solvent și vehicul), atât cu, cât și fără activare metabolică. În prezența activării metabolice, substanța utilizată ca martor pozitiv ar trebui să fie aceea care necesită activare pentru a da un răspuns mutagen. În tabelul următor sunt prezentate exemple de substanțe
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
laboratorul dispune de o bază de date anterioare privind această substanță. Ar trebui să se aibă în vedere utilizarea ca martori pozitivi a unor substanțe din aceeași clasă chimică, dacă sunt disponibile. Ca martori negativi ar trebui să se utilizeze solvenți sau vehicule singure în mediul de tratare, care se tratează în același condiții ca și culturile. În plus, ar trebui să se utilizeze și martori netratați, cu excepția cazului în care există date din testele anterioare care să ateste că solventul
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
solvenți sau vehicule singure în mediul de tratare, care se tratează în același condiții ca și culturile. În plus, ar trebui să se utilizeze și martori netratați, cu excepția cazului în care există date din testele anterioare care să ateste că solventul selectat nu prezintă efecte vătămătoare sau mutagene. 1.4.3. Modul de lucru 1.4.3.1 Tratamentul cu substanța de testat Celulele în stadiu de proliferare se tratează cu substanța de testat atât în prezența, cât și în absența
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
două culturi tratate. Dacă se utilizează culturi unice, numărul concentrațiilor ar trebui să fie mai mare pentru a asigura un număr suficient de culturi pentru analiză (de ex. minimum opt concentrații analizabile). Se recomandă utilizarea culturilor duble pentru martorul negativ (solvent). Testarea substanțelor în stare gazoasă și a celor volatile ar trebui să se realizeze prin metode specifice, de ex. în vase de cultură închise ermetic (21) (22). 1.4.3.2 Determinări de supraviețuire, viabilitate și frecvența mutantului La sfârșitul
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
rezultat concentrație-răspuns pozitiv reproductibil este foarte semnificativ. Rezultatele negative indică faptul că, în condiții experimentale, substanța de testat nu produce mutații genice în celulele de mamifere utilizate, în cultură. 3. RAPORTAREA RAPORTUL TESTULUI Raportul testului trebuie să conțină următoarele informații: Solventul/vehiculul: - justificarea alegerii vehiculului, - solubilitatea și stabilitatea substanței de testat în solvent/vehicul, dacă se cunoaște. Celulele: - tipul și sursa celulelor, - numărul de culturi celulare, - numărul de reînsămânțări, dacă este cazul, - metodele de întreținere a culturilor celulare, dacă este cazul
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
în condiții experimentale, substanța de testat nu produce mutații genice în celulele de mamifere utilizate, în cultură. 3. RAPORTAREA RAPORTUL TESTULUI Raportul testului trebuie să conțină următoarele informații: Solventul/vehiculul: - justificarea alegerii vehiculului, - solubilitatea și stabilitatea substanței de testat în solvent/vehicul, dacă se cunoaște. Celulele: - tipul și sursa celulelor, - numărul de culturi celulare, - numărul de reînsămânțări, dacă este cazul, - metodele de întreținere a culturilor celulare, dacă este cazul, - absența micoplasmei. Condițiile de testare: - justificarea alegerii concentrațiilor și numărului de culturi
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
dacă s-au determinat, cel puțin pentru martorii negativi și pozitivi, - capacitatea laboratorului de a detecta mutanții în colonii mici cu sistemul TK+/- L5178Y, dacă este cazul, - relația doză-răspuns, dacă este posibil, - analizele statistice, dacă există, - datele privind martorii negativi (solvent/vehicul) și pozitivi utilizați în paralel, - datele anterioare privind martorii negativi (solvent/vehicul) și pozitivi, cu domeniile, valorile medii și deviațiile standard, - frecvența mutanților. Discutarea rezultatelor. Concluziile. 4. BIBLIOGRAFIA (1) Moore, M.M., DeMarini, D. M., DeSerres, F. J. and Tindall
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
laboratorului de a detecta mutanții în colonii mici cu sistemul TK+/- L5178Y, dacă este cazul, - relația doză-răspuns, dacă este posibil, - analizele statistice, dacă există, - datele privind martorii negativi (solvent/vehicul) și pozitivi utilizați în paralel, - datele anterioare privind martorii negativi (solvent/vehicul) și pozitivi, cu domeniile, valorile medii și deviațiile standard, - frecvența mutanților. Discutarea rezultatelor. Concluziile. 4. BIBLIOGRAFIA (1) Moore, M.M., DeMarini, D. M., DeSerres, F. J. and Tindall, K. R. (eds.) (1987), Banbury Report 28: Mammalian Cell Mutagenesis, Cold Spring
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]
-
procedează la aclimatizarea animalelor la condițiile de laborator timp de minimum cinci zile înainte de începerea studiului. 1.4.1.4. Prepararea dozelor Substanțele de testat în stare solidă ar trebui să se preparare sub formă de soluții sau suspensii în solvenții sau vehiculele corespunzătoare și să se dilueze, dacă este cazul, înainte de a fi administrate animalelor. Substanțele de testat lichide se pot administra direct sau dilua înainte de administrare. Se recomandă utilizarea preparatelor proaspete de substanță de testat, cu excepția cazului în care
jrc4583as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89749_a_90536]