4,889 matches
-
Rezultatul pozitiv al unui singur test de depistare nu este suficient pentru ca proba să fie considerată suspectă. Testele de depistare și testele de izolare trebuie să permită praguri de detectare cuprinse între 103 și 104 celule/ml de extract concentrat repus în suspensie, inclus ca martori pozitivi în fiecare serie de teste. ***[PLEASE INSERT DIAGRAM FROM ORIGINAL AND THE FOLLOWING TRANSLATIONS IN RO LANGUAGE]*** échantillon de tubercules de pomme de terre = probă de tuberculi de cartof 9 extraction et concentration de
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
fereastră o cantitate standard (15 μl sunt suficienți pentru un diametru al ferestrei de 6 mm; pentru ferestrele cu un diametru mai mare se alege o cantitate mai mare) dintr-o soluție de 1/100 de extract concentrat de cartof repus în suspensie. Apoi se depune cu pipeta o cantitate similară de extract concentrat nediluat (1/1) pe ferestrele rămase din acel șir. Șirul următor poate fi folosit ca duplicat sau poate servi pentru o a doua probă, astfel cum se
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
fi folosit ca duplicat sau poate servi pentru o a doua probă, astfel cum se indică în figura 1; (ii) alte extracte: se prepară diluțiile zecimale (la 1/10, la 1/100 și la 1/1 000) din extractul concentrat repus în suspensie în soluția tampon. Se depune cu pipeta pe un șir de ferestre o cantitate standard (15 μl sunt suficienți pentru un diametru al ferestrei de 6 mm; pentru ferestrele cu un diametru mai mare se alege o cantitate
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
1 (ii): se prepară diluția de lucru de anticorp într-un tampon de imunofluorescență. Diluția de lucru are efect asupra specificității. Figura 1. Prepararea lamei de test în conformitate cu punctele 4.1 (i) și 4.3 (i) Diluția de extract concentrat repus în suspensie 1/100 1/1 1/1 1/1 1/1 Diluție de extract concentrat repus în suspensie (T = titru) T/2 T/4 T/2 T 2T Diluție pe jumătate a antiserului/anticorpului ***[PLEASE INSERT FIGURE AND THE
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
are efect asupra specificității. Figura 1. Prepararea lamei de test în conformitate cu punctele 4.1 (i) și 4.3 (i) Diluția de extract concentrat repus în suspensie 1/100 1/1 1/1 1/1 1/1 Diluție de extract concentrat repus în suspensie (T = titru) T/2 T/4 T/2 T 2T Diluție pe jumătate a antiserului/anticorpului ***[PLEASE INSERT FIGURE AND THE FOLLOWING TEXT IN RO LANGUAGE]*** échantillon 1 = eșantion 1 double de l'échantillon 1 ou de l
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
al eșantionului 2 Figura 2. Prepararea lamei de test în conformitate cu punctele 4.1 (ii) și 4.3 (ii) Diluția de lucru de antiser/anticorp 1/1 1/10 1/100 gol gol Diluție la a zecea parte de extract concentrat repus în suspensie ***[PLEASE INSERT FIGURE AND THE FOLLOWING TEXT IN RO LANGUAGE]*** échantillon 1 = eșantion 1 double de l'échantillon 1 ou de l'échantillon 2 = dublul eșantionului 1 sau al eșantionului 2 4.3.1. Se așază lamele pe
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
de imunofluorescență: (i) În cazul în care proba conține celule care prezintă o fluorescență vie și o morfologie caracteristică, se evaluează numărul mediu de celule caracteristice pe câmp microscopic și se calculează numărul celulelor menționate pe mililitru de extract concentrat repus în suspensie (a se vedea apendicele 4). Testul de imunofluorescență este considerat pozitiv atunci când eșantionul conține cel puțin 5 x 103 celule caracteristice pe mililitru de extract concentrat repus în suspensie. În acest caz, eșantionul este considerat ca fiind potențial
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
și se calculează numărul celulelor menționate pe mililitru de extract concentrat repus în suspensie (a se vedea apendicele 4). Testul de imunofluorescență este considerat pozitiv atunci când eșantionul conține cel puțin 5 x 103 celule caracteristice pe mililitru de extract concentrat repus în suspensie. În acest caz, eșantionul este considerat ca fiind potențial contaminat și trebuie continuate testele. (ii) Testul de imunofluorescență este considerat negativ atunci când eșantionul conține mai puțin de 5 x 103 celule pe mililitru de extract concentrat repus în
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
concentrat repus în suspensie. În acest caz, eșantionul este considerat ca fiind potențial contaminat și trebuie continuate testele. (ii) Testul de imunofluorescență este considerat negativ atunci când eșantionul conține mai puțin de 5 x 103 celule pe mililitru de extract concentrat repus în suspensie și proba este considerată necontaminată. Nu este necesară continuarea testelor. 5. TESTUL FISH Principiu În cazul în care testul FISH este folosit ca test de depistare inițial și rezultatul său este pozitiv, trebuie să se efectueze un test
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
etanol la 96 %. Se amestecă la vortex și se lasă la incubat la 4 °C timp de 30-60 minute. 5.1.4. Se pune la centrifugat timp de 8 minute la 7 000 g, se elimină lichidul supernatant și se repune în suspensie extractul concentrat în 75 μl de tampon fosfatat la 0,01 M. 5.1.5. Se depun 16 μl de suspensii fixate pe o lamă multitest, astfel cum se indică în figura 3. Pe fiecare lamă se aplică
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
nici un martor negativ. În cazul în care proba conține celule care prezintă o fluorescență vie și o morfologie caracteristică, se evaluează numărul mediu de celule caracteristice pe câmp microscopic și se calculează numărul celulelor respective pe mililitru de extract concentrat repus în suspensie (a se vedea apendicele 4). Probele care conțin cel puțin 5 x 103 celule caracteristice pe mililitru de extract concentrat repus în suspensie sunt considerate ca fiind potențial contaminate. Trebuie continuate testele. Eșantioanele care conțin mai puțin de
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
de celule caracteristice pe câmp microscopic și se calculează numărul celulelor respective pe mililitru de extract concentrat repus în suspensie (a se vedea apendicele 4). Probele care conțin cel puțin 5 x 103 celule caracteristice pe mililitru de extract concentrat repus în suspensie sunt considerate ca fiind potențial contaminate. Trebuie continuate testele. Eșantioanele care conțin mai puțin de 5 x 103 celule caracteristice pe mililitru de extract concentrat repus în suspensie sunt considerate ca fiind negative; (ii) testul FISH este negativ
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
cel puțin 5 x 103 celule caracteristice pe mililitru de extract concentrat repus în suspensie sunt considerate ca fiind potențial contaminate. Trebuie continuate testele. Eșantioanele care conțin mai puțin de 5 x 103 celule caracteristice pe mililitru de extract concentrat repus în suspensie sunt considerate ca fiind negative; (ii) testul FISH este negativ în cazul în care nu se observă, prin intermediul filtrului rodamină, celule de mărimea și cu morfologia caracteristice pentru C. m. ssp. sepedonicus care prezintă o fluorescență vie de
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
care a dat anterior rezultate negative pentru C. m. ssp. sepedonicus; - tampoane martori folosite pentru a extrage bacteria și ADN-ul din probă; - amestec reactiv pentru PCR. De asemenea, trebuie incluși aici și următorii martori pozitivi: - alicote de extracte finale repuse în suspensie, după ce s-a adăugat C. m. ssp. sepedonicus (a se vedea apendicele 2 pentru preparare); - suspensie în mediu apos de 106 celule pe mililitru dintr-un izolat virulent de C. m. ssp. sepedonicus (de exemplu, NCPPB 2140 sau
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
Se centrifughează la 15 000 g timp de 10 minute la 4 °C, se conservă extractul concentrat și se elimină etanolul. 14. Se lasă să se usuce extractul în aer liber sau într-un Speed Vac de ADN. 15. Se repune în suspensie extractul în concentrat în 100 μl de apă ultrapură sterilă și se lasă la temperatura mediului înconjurător timp de cel puțin 20 de minute. 16. Se conservă la -20 °C până atunci când se utilizează pentru PCR. 17. Se
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
fie optime. Pentru detaliile privind cultura, a se vedea apendicele 8. 7.1. Se repartizează pe pătlăgelele vinete, în conformitate cu una dintre metodele indicate în continuare (punctul 7.3 sau 7.4), tot restul de alicotă de test din extractul concentrat repus în suspensie, obținut în conformitate cu indicațiile din secțiunea 3.1.6 sau 3.2.5. Se folosesc doar plante ajunse în stadiul celei de-a doua sau a treia frunze, până la dezvoltarea completă a celei de-a treia frunze adevărate. Pentru
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
din secțiunea 3.1.6 sau 3.2.5. Se folosesc doar plante ajunse în stadiul celei de-a doua sau a treia frunze, până la dezvoltarea completă a celei de-a treia frunze adevărate. Pentru a folosi integral extractul concentrat repus în suspensie și pentru a asigura eficacitatea inoculării, sunt necesare între 15 și 25 de pătlăgele vinete pe eșantion pentru efectuarea procedurilor descrise în continuare. 7.2. Înainte de inoculare, pătlăgelele vinete nu trebuie udate timp de una sau două zile
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
extractului concentrat de țesut de tubercul sau de tulpină (obținut la secțiunea 3.1.6 sau 3.2.5). Izolarea directă a C. m. ssp. sepedonicus rămâne posibilă pe mediu selectiv și pe baza unei diluții adecvate de extract concentrat, repus în suspensie, de conuri de cartofi prelevate de la stolonul sau tulpina de cartof. Izolările trebuie practicate pe toți tuberculii sau pe toate segmentele de tulpini de cartofi și pe toate pătlăgelele vinete care nu prezintă nici un simptom, dar pentru care
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
-l utiliza pentru testarea probelor de rutină. Materialul de control se testează la fel ca și probele. 8.1. Desfășurare pe medii selective 8.1.1. Pe baza a 100 μl de alicotă de probă de extract concentrat de cartof repus în suspensie sau de sevă de pătlăgea vânătă, se efectuează diluții la a zecea parte într-un tampon de extract concentrat (a se vedea apendicele 3). 8.1.2. Tentativele de izolare pe bază de extract concentrat nediluat de cartof
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
de 0,20-600 nm. Se prelevează un con de stolon de la 200 de tuberculi dintr-o recoltă de varietate cu coajă albă, cunoscută ca fiind lipsită de C. m. ssp. sepedonicus. solanacearum. Se tratează stolonii urmând metoda obișnuită și se repune extractul concentrat în suspensie de 10 mililitri. Se varsă 900 μl de extract concentrat repus în suspensie în zece microfiole sterile de 1,5 ml. Se însămânțează prima microfiolă cu 100 μl din suspensia de C. m. ssp. sepedonicus. Se
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
o recoltă de varietate cu coajă albă, cunoscută ca fiind lipsită de C. m. ssp. sepedonicus. solanacearum. Se tratează stolonii urmând metoda obișnuită și se repune extractul concentrat în suspensie de 10 mililitri. Se varsă 900 μl de extract concentrat repus în suspensie în zece microfiole sterile de 1,5 ml. Se însămânțează prima microfiolă cu 100 μl din suspensia de C. m. ssp. sepedonicus. Se omogenizează prin agitare. Se stabilesc niveluri de contaminare la a zecea parte, urmând diluția în
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
de tipul de ocular și variază de la 8 la 24) K = coeficientul fiolei (1 sau 1,25) G = mărirea obiectivului (de 100 de ori, de 40 de ori etc.) 3. Se calculează celulele fluorescente caracteristice pe mililitru de extract concentrat repus în suspensie (N) N = C x 1 000/y x F unde: y = volumul de extract concentrat repus în suspensie pe fiecare fereastră și F = factorul de diluție al extractului concentrat repus în suspensie Apendicele 5 Medii de izolare și
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
mărirea obiectivului (de 100 de ori, de 40 de ori etc.) 3. Se calculează celulele fluorescente caracteristice pe mililitru de extract concentrat repus în suspensie (N) N = C x 1 000/y x F unde: y = volumul de extract concentrat repus în suspensie pe fiecare fereastră și F = factorul de diluție al extractului concentrat repus în suspensie Apendicele 5 Medii de izolare și de cultură ale C. m. ssp. sepedonicus (a) Medii de cultură de tip general Agar nutritiv Agar nutritiv
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
celulele fluorescente caracteristice pe mililitru de extract concentrat repus în suspensie (N) N = C x 1 000/y x F unde: y = volumul de extract concentrat repus în suspensie pe fiecare fereastră și F = factorul de diluție al extractului concentrat repus în suspensie Apendicele 5 Medii de izolare și de cultură ale C. m. ssp. sepedonicus (a) Medii de cultură de tip general Agar nutritiv Agar nutritiv (Difco) 23,0 g Apă distilată 1,0 l Se dizolvă ingredientele și se
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]
-
a se vedea secțiunea 6). 14 Test FISH. Se utilizează reactivi și protocoale validate (a se vedea secțiunea 5). 15 Izolare selectivă. Asociată cu utilizarea unui mediu MTNA sau NCP-88 și a unei diluări la 1/100 de extract concentrat repus în suspensie, izolarea selectivă constituie, în numeroase cazuri, o metodă bună de izolare directă a C.m. ssp. sepedonicus. Coloniile caracteristice se pot obține la o perioadă între trei și zece zile de la însămânțare. Atunci este posibil să se efectueze purificarea
32006L0056-ro () [Corola-website/Law/295065_a_296394]