942 matches
-
Se incubează timp de 30 de minute la 37°C. 3.1.4. Se spală plăcile de cinci ori cu SSFTT și se usucă așa cum a fost descris mai sus. 3.1.5. Cromogen/ Substrat Se adaugă câte 100 f2æl/godeu de soluție de cromogen/ substrat (1 ml ABTS (2,2'-azino-bis-[3-etilbenzotiazolină-6-acid sulfonic])5 mg/ml + 9 ml de soluție tampon de substrat (soluție tampon de fosfat-citrat 0,1 M cu pH de 4, care conține H(2)O(2
EUR-Lex () [Corola-website/Law/220360_a_221689]
-
de substrat (soluție tampon de fosfat-citrat 0,1 M cu pH de 4, care conține H(2)O(2) 0,03 %] și se incubează timp de 10 minute la temperatura camerei. Dezvoltarea culorii este oprită prin adăugarea a 100 f2æl/godeu de SDS 2 % (Sulfat dodecil de sodiu). 3.1.6. Citirea Se Citesc la 405 nm la un cititor pentru ELISA. 3.2. Interpretarea rezultatelor 3.2.1. Validarea probelor Testul este valid atunci când densitatea optica (DO) a testului de
EUR-Lex () [Corola-website/Law/220360_a_221689]
-
diluții (1/2 și 1/4) ca test de screening rapid. PROCEDURA 1. Diluați antigenul VBLA la concentrația pre-titrată în PBS, sonicați scurt pentru dispersarea virusului agregat (dacă nu aveți sonicator, pipetați cu putere) și adăugați 50 μl în toate godeurile plăcii Elisa. Loviți ușor marginile plăcii pentru dispersarea antigenului. 2. Incubați la 37ș C timp de 60 de minute pe un agitator orbital. Spălați plăcile de trei ori prin inundare și goliți godeurile cu PBS nesteril și uscați pe hârtie
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
putere) și adăugați 50 μl în toate godeurile plăcii Elisa. Loviți ușor marginile plăcii pentru dispersarea antigenului. 2. Incubați la 37ș C timp de 60 de minute pe un agitator orbital. Spălați plăcile de trei ori prin inundare și goliți godeurile cu PBS nesteril și uscați pe hârtie absorbantă. 3. Adăugați 50 μl tampon de blocare pentru fiecare godeu. Adăugați serurile de testare și serul pozitiv în godeurile corespunzătoare și diluați de-a lungul plăcii utilizând o pipetă multi-canal. Nu adăugați
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
Incubați la 37ș C timp de 60 de minute pe un agitator orbital. Spălați plăcile de trei ori prin inundare și goliți godeurile cu PBS nesteril și uscați pe hârtie absorbantă. 3. Adăugați 50 μl tampon de blocare pentru fiecare godeu. Adăugați serurile de testare și serul pozitiv în godeurile corespunzătoare și diluați de-a lungul plăcii utilizând o pipetă multi-canal. Nu adăugați ser la martorul orb sau la martorul ACM. 4. Imediat după adăugarea serurilor de testare, diluați ACM în
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
pe un agitator orbital. Spălați plăcile de trei ori prin inundare și goliți godeurile cu PBS nesteril și uscați pe hârtie absorbantă. 3. Adăugați 50 μl tampon de blocare pentru fiecare godeu. Adăugați serurile de testare și serul pozitiv în godeurile corespunzătoare și diluați de-a lungul plăcii utilizând o pipetă multi-canal. Nu adăugați ser la martorul orb sau la martorul ACM. 4. Imediat după adăugarea serurilor de testare, diluați ACM în tamponul de blocare (la diluția pre-titrată) și adăugați 50
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
de-a lungul plăcii utilizând o pipetă multi-canal. Nu adăugați ser la martorul orb sau la martorul ACM. 4. Imediat după adăugarea serurilor de testare, diluați ACM în tamponul de blocare (la diluția pre-titrată) și adăugați 50 μl în toate godeurile plăcii, cu excepția martorului orb. 5. Incubați la 37ș C timp de 60 de minute pe un agitator orbital. Spălați de trei ori cu PBS și uscați. 6. Diluați concentratul de globulină de iepure anti-șoarece la 1/5 000 în tamponul
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
C timp de 60 de minute pe un agitator orbital. Spălați de trei ori cu PBS și uscați. 6. Diluați concentratul de globulină de iepure anti-șoarece la 1/5 000 în tamponul de blocare și adăugați 50 μl în toate godeurile plăcii. 7. Incubați la 37ș C timp de 60 de minute pe un agitator orbital. Spălați de trei ori cu PBS și uscați. 8. Dezghețați OPD și, imediat înainte de utilizare, adăugați 12 μl peroxid de hidrogen 30% la fiecare 25
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
de 60 de minute pe un agitator orbital. Spălați de trei ori cu PBS și uscați. 8. Dezghețați OPD și, imediat înainte de utilizare, adăugați 12 μl peroxid de hidrogen 30% la fiecare 25 ml OPD. Adăugați 50 μl în toate godeurile plăcii. Lăsați culoarea să se dezvolte timp de aproximativ 10 minute și opriți reacția cu 1 M acid sulfuric (50 μl pentru un godeu). Culoarea trebuie să se dezvolte în godeurile martorului AMC și în godeurile care conțin seruri FĂRĂ
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
12 μl peroxid de hidrogen 30% la fiecare 25 ml OPD. Adăugați 50 μl în toate godeurile plăcii. Lăsați culoarea să se dezvolte timp de aproximativ 10 minute și opriți reacția cu 1 M acid sulfuric (50 μl pentru un godeu). Culoarea trebuie să se dezvolte în godeurile martorului AMC și în godeurile care conțin seruri FĂRĂ anticorpi VBLA. 9. Examinați și înregistrați plăcile fie vizual, fie utilizând un cititor spectrofotometric. ANALIZA REZULTATELOR Calculați media citirii OD din martorii AMC. Aceasta
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
fiecare 25 ml OPD. Adăugați 50 μl în toate godeurile plăcii. Lăsați culoarea să se dezvolte timp de aproximativ 10 minute și opriți reacția cu 1 M acid sulfuric (50 μl pentru un godeu). Culoarea trebuie să se dezvolte în godeurile martorului AMC și în godeurile care conțin seruri FĂRĂ anticorpi VBLA. 9. Examinați și înregistrați plăcile fie vizual, fie utilizând un cititor spectrofotometric. ANALIZA REZULTATELOR Calculați media citirii OD din martorii AMC. Aceasta reprezintă valoarea de inhibiție 0%. Citirea densităților
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
50 μl în toate godeurile plăcii. Lăsați culoarea să se dezvolte timp de aproximativ 10 minute și opriți reacția cu 1 M acid sulfuric (50 μl pentru un godeu). Culoarea trebuie să se dezvolte în godeurile martorului AMC și în godeurile care conțin seruri FĂRĂ anticorpi VBLA. 9. Examinați și înregistrați plăcile fie vizual, fie utilizând un cititor spectrofotometric. ANALIZA REZULTATELOR Calculați media citirii OD din martorii AMC. Aceasta reprezintă valoarea de inhibiție 0%. Citirea densităților optice din serurile de testare
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
Elisa indirect. Diluții duble de antigen se titrează față de o diluție constantă (1/50) cu anticorp monoclonal 3-17-A3. Protocolul este următorul: PROCEDURA 1. Diluați antigen VBLA în PBS pe placa de microtitrare într-o serie de diluție dublă (50 μl/godeu) utilizând o pipetă multi-canal. 2. Incubați o oră la 37ș C pe un agitator orbital. 3. Spălați plăcile de trei ori cu PBS. 4. Adăugați 50 μl anticorp monoclonal 3-17-A3 (diluat 1/50) în fiecare godeu al plăcii de microtitrare
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
diluție dublă (50 μl/godeu) utilizând o pipetă multi-canal. 2. Incubați o oră la 37ș C pe un agitator orbital. 3. Spălați plăcile de trei ori cu PBS. 4. Adăugați 50 μl anticorp monoclonal 3-17-A3 (diluat 1/50) în fiecare godeu al plăcii de microtitrare. 5. Incubați o oră la 37șC utilizând un agitator orbital. 6. Spălați plăcile de trei ori cu PBS. 7. Adăugați 50 μl globulină de iepure anti-șoarece la peroxidaza de hrean, diluată la o concentrație pre-titrată optimală
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
de microtitrare. 5. Incubați o oră la 37șC utilizând un agitator orbital. 6. Spălați plăcile de trei ori cu PBS. 7. Adăugați 50 μl globulină de iepure anti-șoarece la peroxidaza de hrean, diluată la o concentrație pre-titrată optimală, în fiecare godeu al plăcii de microtitrare. 8. Incubați o oră la 37șC pe un agitator orbital. 9. Adăugați substrat și cromogen după descrierea anterioară. Opriți reacția după zece minute prin adăugarea a 1 M acid sulfuric (50 μl/godeu). La testul competitiv
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
optimală, în fiecare godeu al plăcii de microtitrare. 8. Incubați o oră la 37șC pe un agitator orbital. 9. Adăugați substrat și cromogen după descrierea anterioară. Opriți reacția după zece minute prin adăugarea a 1 M acid sulfuric (50 μl/godeu). La testul competitiv, anticorpul monoclonal trebuie să fie în exces, pentru aceasta fiind aleasă o diluție a antigenului care se încadrează în curba de titrare (nu în regiunea platoului) care dă aproximativ 0,8 OD după zece minute. Protocol pentru
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
de testare. PROCEDURA 1. 1% agaroză preparată în soluție tampon borat sau barbitol de sodiu, pH 8,5-9,0, se toarnă într-un vas petri la o adâncime minimă de 3,0 mm. 2. O structură de testare din șapte godeuri fără umiditate, fiecare cu diametrul de 5,0 mm, se decupează în agar. Structura are un godeu central și șase godeuri aranjate în jurul său în formă de cerc cu raza de 3 mm. 1 6 2 X 5 3 4
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
5-9,0, se toarnă într-un vas petri la o adâncime minimă de 3,0 mm. 2. O structură de testare din șapte godeuri fără umiditate, fiecare cu diametrul de 5,0 mm, se decupează în agar. Structura are un godeu central și șase godeuri aranjate în jurul său în formă de cerc cu raza de 3 mm. 1 6 2 X 5 3 4 3. Godeul central se umple cu antigen standard. Godeurile periferice 2, 4 și 6 se umplu cu
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
într-un vas petri la o adâncime minimă de 3,0 mm. 2. O structură de testare din șapte godeuri fără umiditate, fiecare cu diametrul de 5,0 mm, se decupează în agar. Structura are un godeu central și șase godeuri aranjate în jurul său în formă de cerc cu raza de 3 mm. 1 6 2 X 5 3 4 3. Godeul central se umple cu antigen standard. Godeurile periferice 2, 4 și 6 se umplu cu serul pozitiv cunoscut, straturile
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
umiditate, fiecare cu diametrul de 5,0 mm, se decupează în agar. Structura are un godeu central și șase godeuri aranjate în jurul său în formă de cerc cu raza de 3 mm. 1 6 2 X 5 3 4 3. Godeul central se umple cu antigen standard. Godeurile periferice 2, 4 și 6 se umplu cu serul pozitiv cunoscut, straturile 1, 3 și 5 se umplu cu seruri de testare. 4. Sistemul se incubează timp de 72 de ore la temperatura
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
mm, se decupează în agar. Structura are un godeu central și șase godeuri aranjate în jurul său în formă de cerc cu raza de 3 mm. 1 6 2 X 5 3 4 3. Godeul central se umple cu antigen standard. Godeurile periferice 2, 4 și 6 se umplu cu serul pozitiv cunoscut, straturile 1, 3 și 5 se umplu cu seruri de testare. 4. Sistemul se incubează timp de 72 de ore la temperatura camerei într-o cameră umedă închisă. INTERPRETAREA
jrc2435as1994 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-
inoculului - suspensia de organe tratată cu antibiotice - și volumul mediului de culturi celulare trebuie să fie de aproximativ 1:10. ... b) Pentru fiecare diluție și fiecare linie celulară trebuie să fie utilizată o suprafață de aproximativ 2 cmc, corespunzând unui godeu dintr-o placă cu 24 de godeuri. Folosirea plăcutelor cu godeuri este recomandată, dar sunt acceptate, de asemenea, și alte suporturi cu suprafața de creștere similară sau mai mare. ... Articolul 12 Incubarea culturilor celulare a) Culturile celulare inoculate sunt incubate
EUR-Lex () [Corola-website/Law/146168_a_147497]
-
și volumul mediului de culturi celulare trebuie să fie de aproximativ 1:10. ... b) Pentru fiecare diluție și fiecare linie celulară trebuie să fie utilizată o suprafață de aproximativ 2 cmc, corespunzând unui godeu dintr-o placă cu 24 de godeuri. Folosirea plăcutelor cu godeuri este recomandată, dar sunt acceptate, de asemenea, și alte suporturi cu suprafața de creștere similară sau mai mare. ... Articolul 12 Incubarea culturilor celulare a) Culturile celulare inoculate sunt incubate la temperatura de 15°C pentru 7-10
EUR-Lex () [Corola-website/Law/146168_a_147497]
-
culturi celulare trebuie să fie de aproximativ 1:10. ... b) Pentru fiecare diluție și fiecare linie celulară trebuie să fie utilizată o suprafață de aproximativ 2 cmc, corespunzând unui godeu dintr-o placă cu 24 de godeuri. Folosirea plăcutelor cu godeuri este recomandată, dar sunt acceptate, de asemenea, și alte suporturi cu suprafața de creștere similară sau mai mare. ... Articolul 12 Incubarea culturilor celulare a) Culturile celulare inoculate sunt incubate la temperatura de 15°C pentru 7-10 zile. Dacă culoarea mediului
EUR-Lex () [Corola-website/Law/146168_a_147497]
-
nici un efect citopatic în primă incubație de 7-10 zile, se procedează la o subcultivare pe culturi celulare proaspete, utilizându-se o suprafata celulară similară cu cea din cultura primară. ... b) Cantitatea de mediu - lichid supernatant - care provine din toate culturile/godeurile ce constituie cultură primară este adunată într-un pool pentru fiecare linie celulară, la 7-10 zile după inoculare. Eșantioanele - pool-urile - sunt apoi inoculate pe culturi celulare omoloage, nediluat și diluat 1/10, rezultând în final diluții ale supernatantului de 1
EUR-Lex () [Corola-website/Law/146168_a_147497]