483 matches
-
tipul acetilării histonelor. Creșterea ratei acetilării histonelor într-o linie celulară pre-B prefațează activarea rearanjării genei Igk. Aceasta se realizează prin creșterea accesibilității endonucleazei DN-aza I la locusul k, fără însă a antrena după sine expresia sau activitatea proteinei RAG. Rearanjarea nu a fost inițiată în locusul TCRβ din aceleași celule. Aceasta demonstrează că acetilarea în sine nu este suficientă pentru ca toți locii supuși rearanjărilor să devină accesibili la proteinele RAG. În plus, mononucleosomii acetilați nu au devenit accesibili proteinelor RAG
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
DN-aza I la locusul k, fără însă a antrena după sine expresia sau activitatea proteinei RAG. Rearanjarea nu a fost inițiată în locusul TCRβ din aceleași celule. Aceasta demonstrează că acetilarea în sine nu este suficientă pentru ca toți locii supuși rearanjărilor să devină accesibili la proteinele RAG. În plus, mononucleosomii acetilați nu au devenit accesibili proteinelor RAG. Aceasta sugerează că acetilarea histonelor joacă rol în deschiderea structurii cromatinice cu un ordin de organizare superior celui nucleosomal. Realizarea unei structuri cromatinice pe
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
proteinelor RAG. Aceasta sugerează că acetilarea histonelor joacă rol în deschiderea structurii cromatinice cu un ordin de organizare superior celui nucleosomal. Realizarea unei structuri cromatinice pe deplin accesibile proteinelor Rag implică intervenția unor factori suplimentari, disponibili la locusul genic al rearanjării numai în anumite stadii de dezvoltare. Studiile de transgeneză și epigenetică arată că legarea factorilor de transcriere cu specificitate de locus și de stadiu, la elementele reglatoare din locii genici ai receptorilor de antigene, este implicată în coordonarea deschiderii localizate
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
de transgeneză și epigenetică arată că legarea factorilor de transcriere cu specificitate de locus și de stadiu, la elementele reglatoare din locii genici ai receptorilor de antigene, este implicată în coordonarea deschiderii localizate a cromozomului, ca o precerință în realizarea rearanjării V(D)J. 5.2. ACTIVAREA REARANJAMENTULUI V(D)J DE CĂTRE PRODUȘII GENELOR RAG1 ȘI RAG2 Cercetările efectuate de Oettinger, Schatz, Gorka și Baltimore (1989, 1990) au permis identificarea genelor RAG1 și RAG2, prin transfecția unei linii celulare fibroblastice de
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
REARANJAMENTULUI V(D)J DE CĂTRE PRODUȘII GENELOR RAG1 ȘI RAG2 Cercetările efectuate de Oettinger, Schatz, Gorka și Baltimore (1989, 1990) au permis identificarea genelor RAG1 și RAG2, prin transfecția unei linii celulare fibroblastice de șoarece, care conținea un substrat de rearanjare integrat cu ADN genomic. Autorii au identificat, cu frecvență mică, celule în care substratul genic a suferit procesul rearanjării. Locusul unic, responsabil pentru activarea rearanjării, conține ambele gene RAG1 și RAG2 și, pentru activitatea combinatorie este necesară expresia ambelor gene
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
1990) au permis identificarea genelor RAG1 și RAG2, prin transfecția unei linii celulare fibroblastice de șoarece, care conținea un substrat de rearanjare integrat cu ADN genomic. Autorii au identificat, cu frecvență mică, celule în care substratul genic a suferit procesul rearanjării. Locusul unic, responsabil pentru activarea rearanjării, conține ambele gene RAG1 și RAG2 și, pentru activitatea combinatorie este necesară expresia ambelor gene. La toate speciile studiate - șoarece, om, găină și broasca Xenopus - genele RAG1 și RAG2 formează o unitate genetică remarcabilă
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
și RAG2, prin transfecția unei linii celulare fibroblastice de șoarece, care conținea un substrat de rearanjare integrat cu ADN genomic. Autorii au identificat, cu frecvență mică, celule în care substratul genic a suferit procesul rearanjării. Locusul unic, responsabil pentru activarea rearanjării, conține ambele gene RAG1 și RAG2 și, pentru activitatea combinatorie este necesară expresia ambelor gene. La toate speciile studiate - șoarece, om, găină și broasca Xenopus - genele RAG1 și RAG2 formează o unitate genetică remarcabilă. Genele RAG sunt învecinate, strâns lincate
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
1992). Delețiile în locusul genic ce se extinde prin RAG permit identificarea indivizilor hemizigoți pentru RAG, indivizii umani având reactivitate imunitară normală. Sinteza genelor RAG1 și ARNm RAG2 în fibroblastele 3T3 de șoarece, sau în alte linii celulare inactive pentru rearanjările genice, conduce la rearanjarea V(D)J a substratelor test, la nivele care se apropie de cele care au loc în liniile celulare pre-B. Transfecția selectivă numai a genei RAG1 sau doar a genei RAG2 determină evenimente foarte rare de
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
genic ce se extinde prin RAG permit identificarea indivizilor hemizigoți pentru RAG, indivizii umani având reactivitate imunitară normală. Sinteza genelor RAG1 și ARNm RAG2 în fibroblastele 3T3 de șoarece, sau în alte linii celulare inactive pentru rearanjările genice, conduce la rearanjarea V(D)J a substratelor test, la nivele care se apropie de cele care au loc în liniile celulare pre-B. Transfecția selectivă numai a genei RAG1 sau doar a genei RAG2 determină evenimente foarte rare de rearanjare, dar detectabile, probabil
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
genice, conduce la rearanjarea V(D)J a substratelor test, la nivele care se apropie de cele care au loc în liniile celulare pre-B. Transfecția selectivă numai a genei RAG1 sau doar a genei RAG2 determină evenimente foarte rare de rearanjare, dar detectabile, probabil ca urmare a expresiei genei partenere endogene, la un nivel redus. Rata proceselor de rearanjare crește de peste 1000 de ori, în experiențele de transfecție cu ambele gene. Moleculele de ADN rearanjate, izolate din fibroblaste, au structuri asemănătoare
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
au loc în liniile celulare pre-B. Transfecția selectivă numai a genei RAG1 sau doar a genei RAG2 determină evenimente foarte rare de rearanjare, dar detectabile, probabil ca urmare a expresiei genei partenere endogene, la un nivel redus. Rata proceselor de rearanjare crește de peste 1000 de ori, în experiențele de transfecție cu ambele gene. Moleculele de ADN rearanjate, izolate din fibroblaste, au structuri asemănătoare acelora formate în celulele limfoide - în general joncțiuni semnal perfecte și joncțiuni codificatoare formate cu pierdere de nucleotide
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
codificatoare nu au inserțiile de baze tipic randomizate, probabil pentru că fibroblastele nu exprimă enzima TdT. Coexpresia ARNm RAG 1 și RAG2 a fost evidențiată în țesuturile limfoide, dar nu și în alte țesuturi. Faptul se corelează cu prezența activității de rearanjare genică V(D)J. S-a făcut speculația că expresia la nivele înalte și pe termen lung a genelor RAG ar putea induce rearanjări cromozomale cu consecințe nedorite. Analiza secvenței proteinei RAG1 a evidențiat că jumătatea C - terminală a acesteia
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
în țesuturile limfoide, dar nu și în alte țesuturi. Faptul se corelează cu prezența activității de rearanjare genică V(D)J. S-a făcut speculația că expresia la nivele înalte și pe termen lung a genelor RAG ar putea induce rearanjări cromozomale cu consecințe nedorite. Analiza secvenței proteinei RAG1 a evidențiat că jumătatea C - terminală a acesteia prezintă o oarecare omologie cu produsul genei HPR I de la drojdia de bere Saccharomyces cerevisiae aceasta fiind un supresor al rearanjării deletive și care
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
ar putea induce rearanjări cromozomale cu consecințe nedorite. Analiza secvenței proteinei RAG1 a evidențiat că jumătatea C - terminală a acesteia prezintă o oarecare omologie cu produsul genei HPR I de la drojdia de bere Saccharomyces cerevisiae aceasta fiind un supresor al rearanjării deletive și care, la rândul său, are omologie limitată cu anumite topoizomeraze. Semnificația unei asemenea omologii este neclară. Proteina RAG1 conține o regiune bogată în cisteină, în jumătatea N - terminală și care reprezintă un relict al unor domenii de legare
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
putut fi studiate suficient din punct de vedere biochimic. Nu este clar dacă se leagă la substrat sau acționează ca secvențe semnal. Există însă alte dovezi care sprijină afirmația că RAG1 și RAG 2 pot participa direct la reacția de rearanjare V(D)J, mai curând decât ca factori reglatori. RAG1, nu însă și RAG2, este exprimată în sistemul nervos central la șoarece, ARNm pentru RAG1 fiind distribuit, mai mult sau mai puțin uniform, în toți neuronii, fiind însă mai evident
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
central la șoarece, ARNm pentru RAG1 fiind distribuit, mai mult sau mai puțin uniform, în toți neuronii, fiind însă mai evident în hipocampus și cerebel. Astfel, se deduce că și în creier ar putea să existe un anumit tip de rearanjare genică programată, asemănătoare aceleia din țesuturile limfoide, fără ca expresia RAG1 să fie esențială. Șoarecii transgenici cu gena RAG1 inactivată printr-un proces de mutație orientată (knock-out), sunt imunodeficienți și lipsiți total de activitate de rearanjare genică V(D)J, dar
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
existe un anumit tip de rearanjare genică programată, asemănătoare aceleia din țesuturile limfoide, fără ca expresia RAG1 să fie esențială. Șoarecii transgenici cu gena RAG1 inactivată printr-un proces de mutație orientată (knock-out), sunt imunodeficienți și lipsiți total de activitate de rearanjare genică V(D)J, dar structurile și funcțiile creierului sunt normale. Astfel, rolul expresiei RAG 1, în sistemul nervos, rămâne o enigmă. Analog funcției HPR I de la S. cerevisiae, expresia RAG1 în sistemul nervos, în loc de a promova un anumit tip
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
V(D)J, dar structurile și funcțiile creierului sunt normale. Astfel, rolul expresiei RAG 1, în sistemul nervos, rămâne o enigmă. Analog funcției HPR I de la S. cerevisiae, expresia RAG1 în sistemul nervos, în loc de a promova un anumit tip de rearanjare, ar putea fi implicată în reducerea rearanjărilor accidentale, evitând ca în celulele neuronale (cu durată lungă de viață și determinate a realiza engramarea), să se producă efectele nedorite ale unei asemenea rearanjări, care ar afecta mecanismele engramării asociate proceselor de
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
creierului sunt normale. Astfel, rolul expresiei RAG 1, în sistemul nervos, rămâne o enigmă. Analog funcției HPR I de la S. cerevisiae, expresia RAG1 în sistemul nervos, în loc de a promova un anumit tip de rearanjare, ar putea fi implicată în reducerea rearanjărilor accidentale, evitând ca în celulele neuronale (cu durată lungă de viață și determinate a realiza engramarea), să se producă efectele nedorite ale unei asemenea rearanjări, care ar afecta mecanismele engramării asociate proceselor de memorie. La păsări, în bursa lui Fabricius
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
nervos, în loc de a promova un anumit tip de rearanjare, ar putea fi implicată în reducerea rearanjărilor accidentale, evitând ca în celulele neuronale (cu durată lungă de viață și determinate a realiza engramarea), să se producă efectele nedorite ale unei asemenea rearanjări, care ar afecta mecanismele engramării asociate proceselor de memorie. La păsări, în bursa lui Fabricius, este exprimată doar RAG2, dar locii genici IgH și IgL conțin doar o singură regiune V funcțională, astfel că recombinarea V(D)J generează un
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
V. Mecanismul conversiei genice este necunoscut. Expresia RAG2 se manifestă în bursă între a 15-a și a 18-a zi de embriogeneză, exact în același timp când are loc conversia genică. Șoarecii transgenici, cu gena RAG2 nefuncțională, nu prezintă rearanjarea V(D)J și nu au celule B sau T mature, dar alte deficiențe funcționale, în afara sistemului limfoid, nu se produc. 5.3. FACTORUL SCID Un alt factor implicat în rearanjarea genică V( D)J este definit de mutația scid
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
genică. Șoarecii transgenici, cu gena RAG2 nefuncțională, nu prezintă rearanjarea V(D)J și nu au celule B sau T mature, dar alte deficiențe funcționale, în afara sistemului limfoid, nu se produc. 5.3. FACTORUL SCID Un alt factor implicat în rearanjarea genică V( D)J este definit de mutația scid (de la Severe Combined Immune Deficiency). Șoarecii cu imunodeficiență severă a imunității umorale și celulare au foarte puține celule B și T, iar liniiile celulare limfoide scid conțin adeseori rearanjări cromozomale ample
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
implicat în rearanjarea genică V( D)J este definit de mutația scid (de la Severe Combined Immune Deficiency). Șoarecii cu imunodeficiență severă a imunității umorale și celulare au foarte puține celule B și T, iar liniiile celulare limfoide scid conțin adeseori rearanjări cromozomale ample. Mutația afectează în primul rând joncțiunile segmentelor codificatoare V(D)J. Factorul scid nu este specific doar celulelor limfoide, afirmația bazându-se pe constatarea că liniile celulare fibroblastice derivate de la șoarecele scid sunt cu mult mai sensibile la
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
regiunilor codificatoare. Consecințele mutației scid sunt foarte diferite față de cele care apar la nivelul genelor RAG1 și RAG2. Celulele care prezintă mutații ale genelor RAG sunt complet inactive în rearanjareaa V(D)J, pe când celulele mutante ale genei scid inițiază rearanjarea genică, dar procesul este blocat într-o etapă ulterioară. Mutația scid este cartată în cromozomul 16, la șoarece, fiind, în consecință, distinctă de locusul genic RAG. Acest fapt este dovedit și de constatarea că fibroblastele transfectate cu RAG1 și RAG2
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]
-
este blocat într-o etapă ulterioară. Mutația scid este cartată în cromozomul 16, la șoarece, fiind, în consecință, distinctă de locusul genic RAG. Acest fapt este dovedit și de constatarea că fibroblastele transfectate cu RAG1 și RAG2 constituie modele de rearanjare tipice pentru celulele scid. Produșii genelor RAG1, RAG2 și scid sunt singurii factori identificați până în prezent, ca fiind esențiali în rearanjarea V(D)J, deși rolul fiecăruia dintre ei nu este încă cunoscut cu exactitate. Terminal-deoxinucleotidil-transferaza (TdT) este implicată în
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de imunogenetică. Partea I by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91987_a_92482]