4,885 matches
-
descrise în prezenta metodă. Dacă se modifică semnificativ condițiile de testare, se aplică un prag și valori ale probelor martor diferite. Prin urmare, se recomandă calibrarea metodologiei și a pragului de rezistență prin realizarea testului cu o serie de substanțe etalon selectate dintre substanțele chimice utilizate în studiul de validare (3). 1.6. Principiul metodei de testare - testul pe model de piele umană Materialul de testat se aplică pe suprafața unui model tridimensional de piele umană, ce conține o epidermă restructurată
jrc4584as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89750_a_90537]
-
Informații suplimentare Modelul de piele utilizat, precum și protocolul exact privind timpul de expunere și procedurile de spălare etc. au un impact important asupra rezultatelor de viabilitate celulară. Se recomandă etalonarea metodologiei și modelului predictiv prin testarea unei serii de substanțe etalon de referință, selectate dintre substanțele chimice utilizate în studiul de validare de la ECVAM (3). Este esențial să se demonstreze că metoda utilizată este reproductibilă în cadrul aceluiași laborator și între laboratoare, pentru o gamă variată de substanțe chimice, în conformitate cu normele internaționale
jrc4584as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89750_a_90537]
-
și justificarea oricăror modificări. Rezultatele: - prezentarea sub formă de tabele a valorilor rezistenței (testul RET) sau a valorilor viabilității celulare în procente (testul cu model de piele umană) pentru materialul de testat, martorii pozitiv și negativ și orice substanță chimică etalon de referință, inclusiv datele pentru experimentele concomitente/repetate și valorile medii, - descrierea oricăror altor efecte observate. Discutarea rezultatelor Concluzii 4. BIBLIOGRAFIA (1) ECVAM (1998), ECVAM News & Views, ATLA 26, pp. 275-280. (2) Fentem, J.H., Archer, G.E.B., Balls, M., Botham, P.A.
jrc4584as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89750_a_90537]
-
3.3) și apă de exemplu: 980 + 20 (v + v) Debit: 1 - 2 ml/min Detector (4.5.2): Detector UV (325 nm) sau detector fluorimetric (excitație: 325 nm/emisie 475 nm) 5.6 Calibrarea 5.6.1. Prepararea soluțiilor etalon de lucru Se pun cu pipeta 20 ml din soluția mamă de acetat de vitamina A (3.11.1) sau 20 ml de soluție mamă de palmitat de vitamina A (3.12.1) într-un balon cu fundul plat sau
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
10) și se dizolvă din nou reziduul în 10,0 ml de metanol (3.3). Concentrația nominală a acestei soluții este de 560 UI de vitamina A per ml. Conținutul exact trebuie determinat conform pct. 5.6.3.3. Soluția etalon de lucru trebuie preparată pentru fiecare folosire. Se pun cu pipeta 2,0 ml din această soluție etalon de lucru într-un balon gradat de 20 ml, se completează până la gradație cu metanol (3.3) și se amestecă. Concentrația nominală
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
acestei soluții este de 560 UI de vitamina A per ml. Conținutul exact trebuie determinat conform pct. 5.6.3.3. Soluția etalon de lucru trebuie preparată pentru fiecare folosire. Se pun cu pipeta 2,0 ml din această soluție etalon de lucru într-un balon gradat de 20 ml, se completează până la gradație cu metanol (3.3) și se amestecă. Concentrația nominală a acestei soluții etalon de lucru diluată este de 56 UI de vitamina A per ml. 5.6
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
preparată pentru fiecare folosire. Se pun cu pipeta 2,0 ml din această soluție etalon de lucru într-un balon gradat de 20 ml, se completează până la gradație cu metanol (3.3) și se amestecă. Concentrația nominală a acestei soluții etalon de lucru diluată este de 56 UI de vitamina A per ml. 5.6.2. Prepararea soluțiilor de calibrare și curba de calibrare Se transferă 1,0, 2,0, 5,0 și 10,0 ml din soluția etalon de lucru
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
acestei soluții etalon de lucru diluată este de 56 UI de vitamina A per ml. 5.6.2. Prepararea soluțiilor de calibrare și curba de calibrare Se transferă 1,0, 2,0, 5,0 și 10,0 ml din soluția etalon de lucru diluată într-o serie de baloane gradate de 20 ml, se completează până la gradație cu metanol (3.3) și se amestecă. Concentrațiile nominale ale acestor soluții sunt de 2,8, 5,6, 14,0 și respectiv 28,0
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
de calibrare și se determină înălțimile medii ale vârfurilor (suprafețele). În funcție de înălțimile medii ale vârfurilor (suprafețele), se trasează o curbă de calibrare ținând cont de rezultatele controlului UV (5.6.3.3). 5.6.3. Calibrarea prin UV a soluțiilor etalon 5.6.3.1. Soluția mamă de acetat de vitamina A Se pun cu pipeta 2,0 ml din soluția mamă de acetat de vitamina A (3.11.1) într-un balon gradat de 50 ml (4.2.2) și
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
trebuie să fie cuprinsă între 325 nm și 327 nm. Calculul conținutului de vitamina A: UI de vitamina A/ml = E326 x 19,0 ( pentru palmitatul de vitamina A = 957 la 326 nm în propanol-2) 5.6.3.3. Soluția etalon de lucru de vitamina A Se pun cu pipeta 3,0 ml din soluția etalon de lucru nediluată de vitamina A, preparată conform pct. 5.6.1, într-un balon gradat de 50 ml (4.2.2) și se completează
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
UI de vitamina A/ml = E326 x 19,0 ( pentru palmitatul de vitamina A = 957 la 326 nm în propanol-2) 5.6.3.3. Soluția etalon de lucru de vitamina A Se pun cu pipeta 3,0 ml din soluția etalon de lucru nediluată de vitamina A, preparată conform pct. 5.6.1, într-un balon gradat de 50 ml (4.2.2) și se completează până la gradație cu propanol-2 (3.8). Se pun cu pipeta 5,0 ml din această
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
exemplu: 980 + 20 (v + v) Debit: 1 - 2 ml/min Detector (4.5.2): detector fluorimetric (excitație: 295 nm/emisie 330 nm) sau detector UV (292 nm) 5.6. Calibrare (acetat de DL-α-tocoferol sau DL--tocoferol) 5.6.1. Soluție etalon de acetat de DL--tocoferol 5.6.1.1. Prepararea soluției etalon de lucru Se pun cu pipeta 25 ml din soluția mamă de acetat DL--tocoferol (3.10.1) într-un balon cu fundul plat sau conic de 500
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
5.2): detector fluorimetric (excitație: 295 nm/emisie 330 nm) sau detector UV (292 nm) 5.6. Calibrare (acetat de DL-α-tocoferol sau DL--tocoferol) 5.6.1. Soluție etalon de acetat de DL--tocoferol 5.6.1.1. Prepararea soluției etalon de lucru Se pun cu pipeta 25 ml din soluția mamă de acetat DL--tocoferol (3.10.1) într-un balon cu fundul plat sau conic de 500 ml (4.2.1) și se hidrolizează conform procedurii descrise la pct.
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
se dizolvă din nou reziduul în 25,0 ml de metanol (3.3). Concentrația nominală a acestei soluții este de 45,5 g de DL--tocoferol per ml, echivalent cu 50 g de acetat de DL--tocoferol per ml. Soluția etalon de lucru trebuie preparată pentru fiecare folosire. 5.6.1.2. Prepararea soluțiilor de calibrare și curba de calibrare Se transferă 1,0, 2,0, 4,0 și 10,0 ml din soluția etalon de lucru într-o serie de
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
de DL--tocoferol per ml. Soluția etalon de lucru trebuie preparată pentru fiecare folosire. 5.6.1.2. Prepararea soluțiilor de calibrare și curba de calibrare Se transferă 1,0, 2,0, 4,0 și 10,0 ml din soluția etalon de lucru într-o serie de baloane gradate de 20 ml, se completează până la gradație cu metanol (3.3) și se amestecă. Concentrațiile nominale ale acestor soluții sunt de 2,5, 5,0, 10,0 și respectiv 25,0 g
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
și 320 nm. Absorbția maximă trebuie să fie de 284 nm: = 43,6 la 284 nm în etanol La această diluție, ar trebui să se obțină o valoare de extincție între 0,84 și 0,88. 5.6.2. Soluția etalon de DL --tocoferol 5.6.2.1. Prepararea soluției etalon de lucru Se pun cu pipeta 2,0 ml din soluția etalon de DL--tocoferol (3.11.1) într-un balon gradat de 50 ml, se dizolvă în metanol (3
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
nm: = 43,6 la 284 nm în etanol La această diluție, ar trebui să se obțină o valoare de extincție între 0,84 și 0,88. 5.6.2. Soluția etalon de DL --tocoferol 5.6.2.1. Prepararea soluției etalon de lucru Se pun cu pipeta 2,0 ml din soluția etalon de DL--tocoferol (3.11.1) într-un balon gradat de 50 ml, se dizolvă în metanol (3.3) și se completează până la gradație cu metanol. Concentrația nominală
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
trebui să se obțină o valoare de extincție între 0,84 și 0,88. 5.6.2. Soluția etalon de DL --tocoferol 5.6.2.1. Prepararea soluției etalon de lucru Se pun cu pipeta 2,0 ml din soluția etalon de DL--tocoferol (3.11.1) într-un balon gradat de 50 ml, se dizolvă în metanol (3.3) și se completează până la gradație cu metanol. Concentrația nominală a acestei soluții este de 40 g de DL--tocoferol per ml
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
50 ml, se dizolvă în metanol (3.3) și se completează până la gradație cu metanol. Concentrația nominală a acestei soluții este de 40 g de DL--tocoferol per ml, echivalent cu 44,0 g de acetat de DL--tocoferol. Soluția etalon de lucru trebuie preparată pentru fiecare utilizare. 5.6.2.2. Prepararea soluției de calibrare și curba de calibrare Se transferă 1,0, 2,0, 4,0 și 10,0 ml din soluția etalon de lucru în baloane gradate de
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
de acetat de DL--tocoferol. Soluția etalon de lucru trebuie preparată pentru fiecare utilizare. 5.6.2.2. Prepararea soluției de calibrare și curba de calibrare Se transferă 1,0, 2,0, 4,0 și 10,0 ml din soluția etalon de lucru în baloane gradate de 20 ml, se completează până la gradație cu metanol (3.3) și se amestecă. Concentrațiile nominale ale acestor soluții sunt de 2,0, 4,0, 8,0 și 20,0 g/ml de DL--tocoferol
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
distincție între formele D și L. 2. Principiul Pentru determinarea triptofanului total, eșantionul se hidrolizează în mediu bazic cu o soluție de hidroxid de bariu saturată și se încălzește la 110oC timp de douăzeci de ore. După hidroliză, se adaugă etalonul intern. Pentru determinarea triptofanului liber, eșantionul se extrage în mediu acid în prezența etalonului intern. Triptofanul și etalonul din hidrolizat și extract se determină prin CLHP cu ajutorul unui detector fluorimetric. 3. Reactivi 3.1. Se utilizează apă dublu distilată sau
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
hidrolizează în mediu bazic cu o soluție de hidroxid de bariu saturată și se încălzește la 110oC timp de douăzeci de ore. După hidroliză, se adaugă etalonul intern. Pentru determinarea triptofanului liber, eșantionul se extrage în mediu acid în prezența etalonului intern. Triptofanul și etalonul din hidrolizat și extract se determină prin CLHP cu ajutorul unui detector fluorimetric. 3. Reactivi 3.1. Se utilizează apă dublu distilată sau apă de calitate echivalentă (conductivitate < 10 μS/cm) 3.2. Substanța-etalon: triptofan (puritate/conținut
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
cu o soluție de hidroxid de bariu saturată și se încălzește la 110oC timp de douăzeci de ore. După hidroliză, se adaugă etalonul intern. Pentru determinarea triptofanului liber, eșantionul se extrage în mediu acid în prezența etalonului intern. Triptofanul și etalonul din hidrolizat și extract se determină prin CLHP cu ajutorul unui detector fluorimetric. 3. Reactivi 3.1. Se utilizează apă dublu distilată sau apă de calitate echivalentă (conductivitate < 10 μS/cm) 3.2. Substanța-etalon: triptofan (puritate/conținut ≥ 99%) uscat sub vid
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
determină prin CLHP cu ajutorul unui detector fluorimetric. 3. Reactivi 3.1. Se utilizează apă dublu distilată sau apă de calitate echivalentă (conductivitate < 10 μS/cm) 3.2. Substanța-etalon: triptofan (puritate/conținut ≥ 99%) uscat sub vid pe pentoxid difosforic 3.3. Etalon intern propriu-zis: α-metil-triptofan (puritate/conținut ≥ 99%) uscat sub vid pe pentoxid difosforic 3.4. Hidroxid de bariu octahidratat (ar trebui să se evite expunerea excesivă a Ba(OH)2·8H2O la aer pentru a se evita formarea de BaCO3 care
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]
-
balon gradat de 500 ml, se dizolvă 0,2728 g de α-metil-triptofan (3.3) în acid clorhidric (3.13) și se completează până la gradație cu acid clorhidric (3.13). Se depozitează la -18oC cel mult patru săptămâni. 3.17. Soluție etalon de calibrare a triptofanului și etalonului intern Se iau 2,00 ml din soluția mamă de triptofan (3.15) și 2,00 ml din soluția mamă etalon intern (de α-metil-triptofan) (3.16). Se diluează cu apă (3.1) și metanol
jrc4594as2000 by Guvernul României () [Corola-website/Law/89760_a_90547]