791 matches
-
2001). Genele din T-ADN de Agrobacterium conțin motive cis cutia TATA, cutia CAAT, semnal de poliadenilare) necesare pentru expresia lor în celula vegetală eucariotă (Barker și colab., 1983). În T-ADN au fost identificate două clase generale de gene: oncogene și gene legate de sinteza opinelor. Prin produșii lor, bacteriooncogenele alterează sinteza fitohormonilor și sensibilitatea celulelor infectate determinând apariția unui fenotip tumoral (Klee și colab., 1984). T-ADN din sușele de tip octopină de A. tumefaciens 15955 și Ach5 conține
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
gene legate de sinteza opinelor. Prin produșii lor, bacteriooncogenele alterează sinteza fitohormonilor și sensibilitatea celulelor infectate determinând apariția unui fenotip tumoral (Klee și colab., 1984). T-ADN din sușele de tip octopină de A. tumefaciens 15955 și Ach5 conține cinci oncogene desemnate iaaM, iaaH, ipt, 6b și 5 (Zhu și colab., 2000). Oncogena iaaM codifică pentru triptofan monooxigenază, enzimă care convertește triptofanul în indol-3-acetamidă. Oncogena iaaH codifică pentru indolacetamida hidrolază care catalizează sinteza fitohormonului acidul indol acetic (IAA) din indol-3-acetamidă (Fig
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
și sensibilitatea celulelor infectate determinând apariția unui fenotip tumoral (Klee și colab., 1984). T-ADN din sușele de tip octopină de A. tumefaciens 15955 și Ach5 conține cinci oncogene desemnate iaaM, iaaH, ipt, 6b și 5 (Zhu și colab., 2000). Oncogena iaaM codifică pentru triptofan monooxigenază, enzimă care convertește triptofanul în indol-3-acetamidă. Oncogena iaaH codifică pentru indolacetamida hidrolază care catalizează sinteza fitohormonului acidul indol acetic (IAA) din indol-3-acetamidă (Fig. 33.4). Produsul genei ipt mediază condensarea adenozin monofosfatului (AMP) cu izopentenil
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
1984). T-ADN din sușele de tip octopină de A. tumefaciens 15955 și Ach5 conține cinci oncogene desemnate iaaM, iaaH, ipt, 6b și 5 (Zhu și colab., 2000). Oncogena iaaM codifică pentru triptofan monooxigenază, enzimă care convertește triptofanul în indol-3-acetamidă. Oncogena iaaH codifică pentru indolacetamida hidrolază care catalizează sinteza fitohormonului acidul indol acetic (IAA) din indol-3-acetamidă (Fig. 33.4). Produsul genei ipt mediază condensarea adenozin monofosfatului (AMP) cu izopentenil pirofosfatul (iPePP) și / sau cu un terpenoid necunoscut cu formare de izopentenil
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
Aceasta reprezintă o etapă cu rată limitată în biosinteza citokininei și iPMP/ZMP care sunt rapid convertite în transzeatină, sub acțiunea enzimelor codificate de celula vegetală gazdă. Acumularea masivă de auxină și citokinină condiționată de activitatea enzimelor sintetizate sub direcția oncogenelor iaaM, iaaH și ipt reprezintă factorul determinator primar al tumorigenezei. Se crede că produșii oncogenelor secundare 6b(tml) și 5 ar modifica doar efectele fitohormonilor în celula vegetală. După opinia lui Hooykaas și colaboratorii (1988) și a lui Gaudin și
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
rapid convertite în transzeatină, sub acțiunea enzimelor codificate de celula vegetală gazdă. Acumularea masivă de auxină și citokinină condiționată de activitatea enzimelor sintetizate sub direcția oncogenelor iaaM, iaaH și ipt reprezintă factorul determinator primar al tumorigenezei. Se crede că produșii oncogenelor secundare 6b(tml) și 5 ar modifica doar efectele fitohormonilor în celula vegetală. După opinia lui Hooykaas și colaboratorii (1988) și a lui Gaudin și colaboratorii (1994) produsul genei 6b ar modifica răspunsul la hormoni, potențial prin creșterea sensibilității la
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
boala cancerului de colet. Dar, mecanismele moleculare din planta gazdă pe care le exploatează A. tumefaciens în cursul infecției servesc altor funcții fiziologice ale plantei gazdă, astfel că silențierea unor asemenea gene endogene trebuie să aibă efecte pleiotropice negative. Silențierea oncogenelor reprezintă o altă strategie în rezistența mediată prin silențiere genică posterioară transferului T-ADN (PTGS) care interferă cu dezvoltarea tumorilor de colet, urmare a integrării T-ADN în genomul plantei. Expresia bacteriooncogenelor iaaM, iaaH și ipt în celulele plantelor transformate
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
interferă cu dezvoltarea tumorilor de colet, urmare a integrării T-ADN în genomul plantei. Expresia bacteriooncogenelor iaaM, iaaH și ipt în celulele plantelor transformate se asociază cu sinteza rapidă a auxinei și citokininei care inițiază și asigură progresia tumorigenezei. Aceste oncogene prezintă un înalt conservatorism de secvență (~90%) la toate sușele de A. tumefaciens care au fost caracterizate (Escobar și colab., 2001). Plantele transformate de Arabidopsis, Lycopersicon esculentum și Juglans regia prin utilizarea de constructe autocomplementare ARN desemnate să inițieze PTGS
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
același plasmid Ti) ceea ce este un indiciu că tumorile naturale dintr-o zonă restrânsă au fost induse de mai multe tipuri de plasmid Ti. Escobar și colaboratorii (2001) au studiat mecanismul de silențiere mediată de ARN de interferență (iARN) a oncogenelor ce conferă rezistență la tumorigeneza de colet. Agrobacterium tumefaciens este unul dintre singurele organisme care posedă un sistem de transfer de gene pe orizontală, bine caracterizat, având o suită de oncogene care, atunci când sunt integrate în genomul plantei gazdă orchestrează
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
de silențiere mediată de ARN de interferență (iARN) a oncogenelor ce conferă rezistență la tumorigeneza de colet. Agrobacterium tumefaciens este unul dintre singurele organisme care posedă un sistem de transfer de gene pe orizontală, bine caracterizat, având o suită de oncogene care, atunci când sunt integrate în genomul plantei gazdă orchestrează biosinteza de novo a auxinei și citokininei, spre a genera tumori. În mod specific, oncogenele iaaM și ipt care au omologie de aproximativ 90% la diferitele tulpini de A. tumefaciens, sunt
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
mod specific, oncogenele iaaM și ipt care au omologie de aproximativ 90% la diferitele tulpini de A. tumefaciens, sunt nemijlocit implicate în tumorigeneză. Autorii au realizat două constructe moleculare desemnate să inițieze sinteza ARN de interferență (iARN) pentru cele două oncogene, generându-se plante transgenice de Arabidopsis thaliana și Lycopersicum esculentum care sunt înalt rezistente la boala cancerului de colet. Cercetătorii au evidențiat că inocularea in vitro a radicelelor cu două biovarietăți de A. tumefaciens a permis exprimarea de 0,0-1
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
azot pentru tulpinile infectante de Agrobacterium tumefaciens. Expresia bacterio-oncogenelor determină superproducție de hormoni vegetali (auxine și citokinine) fiind modificată sensibilitatea fitohormonală a gazdei, ceea ce determină inițierea unui proces necontrolat, anarhic de creștere / diviziune celulară, finalizat cu formarea tumorii vegetale. Regiunea oncogenă a T-ADN reprezintă „secvența miez” deoarece ea prezintă înaltă omologie de secvență printre toate sușele virulente de A. tumefaciens. Escobar și colaboratorii (2001) au pus la punct o strategie de combatere a cancerului de colet la plantele de cultură
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
secvență printre toate sușele virulente de A. tumefaciens. Escobar și colaboratorii (2001) au pus la punct o strategie de combatere a cancerului de colet la plantele de cultură (tumorigeneză) prin utilizarea interferenței ARN (iARN) vizând silențierea bacteriooncogenelor iaaM și ipt. Oncogena iaaM codifică pentru o triptofanmonooxigenază care convertește triptofanul în indolacetamidă - precursorul auxinei. Oncogena ipt codifică pentru enzima care catalizează condensarea AMP și izopentenilpirofosfatului spre a se forma citokinin zeatina. Expresia ambelor aceste bacteriooncogene în celula gazdă este necesară și suficientă
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
pus la punct o strategie de combatere a cancerului de colet la plantele de cultură (tumorigeneză) prin utilizarea interferenței ARN (iARN) vizând silențierea bacteriooncogenelor iaaM și ipt. Oncogena iaaM codifică pentru o triptofanmonooxigenază care convertește triptofanul în indolacetamidă - precursorul auxinei. Oncogena ipt codifică pentru enzima care catalizează condensarea AMP și izopentenilpirofosfatului spre a se forma citokinin zeatina. Expresia ambelor aceste bacteriooncogene în celula gazdă este necesară și suficientă pentru formarea tumorilor de colet ale plantelor, în natură. Interferența ARN (iARN) este
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
condusă de promotorul ubi3 și genele autocomplementare iaaM și ipt conduse de promotorii virusului mozaicului conopidei. Deși A. tumefaciens prezintă o mare diversitate în organizarea structurală a ADN genomic și a plasmidului Ti, la diferitele sușe virulente, toate acestea prezintă oncogene care manifestă o mare omologie de organizare și funcționare în inducerea tumorigenezei la plante. Escobar și colaboratorii (2001) au valorificat aceste particularități genomice spre a obține rezistență la tumorigeneza de colet, prin țintirea oncogenelor iaaM și ipt pe calea silențierii
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
diferitele sușe virulente, toate acestea prezintă oncogene care manifestă o mare omologie de organizare și funcționare în inducerea tumorigenezei la plante. Escobar și colaboratorii (2001) au valorificat aceste particularități genomice spre a obține rezistență la tumorigeneza de colet, prin țintirea oncogenelor iaaM și ipt pe calea silențierii genice mediate de iARN. Căile biosintezei endogene de fitohormoni pot include reacții care sunt analoage biochimic cu cele catalizate de iaaM și ipt, neexistând gene în genomul vegetal care să prezinte similitudine semnificativă cu
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
Lycopersicon esculentum) și Arabidopsis, două plante cu mare susceptibilitate la boala „cancerul de colet”. Plantele transformate cu pDE00.0201 au fost regenerate prin selecție cu kanamicină. Figura 33.7. Vectorul binar pDE00.0201 de Agrobacterium pentru expresia transcriptelor autocomplementare ale oncogenelor iaaM și ipt. Săgețile indică direcția de transcriere. LB și RB desemnează secvențele de graniță din stânga și din dreapta ale T-ADN (din Escobar și colab., 2001). Transformarea plantelor și expresia transgenelor au fost confirmate prin analiză Southern a ADN genomic
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
remarcat că două ținte ARN diferite au fost silențiate simultan cu o mare eficiență (Chuang și Meyerowitz, 2000; Smith și colab., 2000; Waterhouse și colab., 1998). Nu au fost constatate indicii de fenotip morfologic care să ateste silențierea unei singure oncogene precum tumori radiculare, tumori caulinare, atenuare (Ooms și colab., 1981). Linii virtual rezistente de tomate și de Arabidopsis au fost analizate prin hibridare Southern genomică dovedindu-se a avea unul, două sau trei inserte T-ADN. S-au făcut analize
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
tumorigeneză. Această linie a prezentat trei evenimente independente de inserție a T-ADN, cel puțin unul dintre ele fiind capabil de expresie GUS. Linia aceasta a exprimat în medie 25,3% tumorigeneză, dar a fost incapabilă de inițiere a silențierii oncogenelor. Există alternativa ca un număr mare de copii ale transgenei la indivizii specifici T1 să poată realiza silențierea transcripțională a promotorului virusului mozaicului conopidei care dirijează constructele silențiate. Atât pentru Arabidopsis, cât și pentru tomate, nu au apărut diferențe fenotipice
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
dar ca aceste celule să nu acumuleze transcripte iaaM și ipt și deci să nu inițieze tumorigeneza. În țesuturile plantelor infectate ar fi putut exista trei populații potențiale de ARNm iaaM / ipt: transcripte autocomplementare derivate din constructe integrate silențiatoare de oncogene (prezente numai în plantele transgenice), transcripte produse în A. tumefaciens vizibile prin expresia regiunii oncogene a plasmidului Ti (produse la un nivel foarte scăzut) și transcripte produse în plantă din T-ADN integrat (Gelvin și colab., 1981). Escobar și colaboratorii
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
Escobar și colaboratorii (2001) au pus la punct o strategie de silențiere oncogenică în tumorigeneza indusă de A. tumefaciens prin care aceasta a fost semnificativ perturbată în numeroase linii transgenice de plante de Arabidopsis și Lycopersicon esculentum. Cum la nivelul oncogenelor iaaM și ipt din diferite izolate de A. tumefaciens exită o identitate de secvență de aproximativ 90% este posibil ca o asemenea strategie să ofere un spectru îngust de rezistență la tumorigeneză de colet. Admițând că A. tumefaciens nu posedă
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
în pattern-ul de metilare ce însoțesc activarea unei gene ipt din T-ADN silențiat din celulele vegetale transformate cu A. tumefaciens. Autorii au încrucișat o plantă mascul sterilă de Nicotiana tabacum transformată cu un izolat de Agrobacterium care conținea oncogena silențiată ipt într-un T-ADN hipermetilat cu o plantă femelă normală și au constatat că starea metilată a genei ipt a fost stabil transmisă prin meioză la descendenți. Dar, atunci când țesuturile acestor plante au fost trecute în cultură, bacteriooncogena
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
legare la ADN, față de situsul țintă al acesteia. John și Amasino (1989) au realizat analiza schimbărilor în metilarea ADN legate de schimbările în expresia genică a T-ADN în celulele cancerului de colet. Acest T-ADN conține bacteriooncogene derivate din oncogene vegetale care codifică sinteza unor enzime implicate în biosinteza factorilor de creștere la plante (Weiler și Schroder, 1987). Amasino și colaboratorii (1984) au pornit de la o plantă de tutun (planta C) care purta în genomul său o copie hipermetilată și
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
său o copie hipermetilată și deci inactivă transcripțional de T-ADN. Planta era derivată dintr-o linie tumorală de cancer de colet transformată cu T-ADN al unui plasmid Ti de tip octopină. Dintr-un cancer de colet în care oncogena ipt nu era exprimată, deoarece secvența sa de nucleotide era hipermetilată, autorii au izolat o linie celulară în cadrul căreia au obținut revertanți în care expresia genică a fost reactivată, fie spontan, fie în urma tratamentului cu 5-azacitidină. Această reactivare genică a
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]
-
ADN fusese reinițiată au fost menținute independent ca teratoame (formațiuni tumorale formatoare de lăstari) sau culturi dezorganizate pe mediu lipsit de fitohormoni. Diferitele fenotipuri ale acestor linii au fost determinate cel mai probabil de diferențele în nivelul de expresie a oncogenelor din T-ADN implicate în biosinteza auxinei (Amasino și colab., 1984). Țesuturile CX2 au fost menținute ca fenocopii ale liniilor celulare teratomatoase pe mediu cu citokinină. Fenotipurile acestor linii celulare crescute în condițiile menționate mai sus sunt prezentate în imaginile
Imunogenetică și oncogenetică. Principii de oncogenetică și oncogenomică. Partea II by Lucian Gavrilă, Aurel Ardelean () [Corola-publishinghouse/Science/91988_a_92483]