4,885 matches
-
pun probleme de ordin toxicologic și/sau ecotoxicologic sau de mediu. La cerere, trebuie să se furnizeze următoarele eșantioane: i) probe de preparat; ii) un etalon pentru analiza substanței active pure; iii) un etalon al substanței active tehnice; iv) un etalon pentru analiza metaboliților caracteristici și/sau a altor componente incluse în definiția reziduului; v) dacă sunt disponibile, probe ale substanțelor de referință din impuritățile importante. Definiții: vezi anexa II pct. 4.1 și 4.2. 5.1. Metode de analiză
jrc3013as1996 by Guvernul României () [Corola-website/Law/88168_a_88955]
-
este saponificat cu hidroxid de potasiu într-o soluție de etanol, iar substanțele nesaponificabile sunt extrase cu ajutorul dietil eterului. Sterolii se transformă în trimetil-silil-eteri și sunt analizați prin cromatografie în fază de gaz cu coloană capilară prin raportare la un etalon intern/ betulina. 3. APARATURA 3.1. Balon de saponificare de 150 ml, dotat cu un refrigerator cu reflux cu capete rodate. 3.2. Conducte de decantare de 500 ml. 3.3. Baloane de 250 ml. 3.4. Conducte de egalizare
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
cunoască normele de siguranță aplicabile în cazul utilizării TRI-SIL și trebuie să ia toate măsurile de precauție care se impun). 4.7. Lanosterol 4.8. Sitosterol, cu puritate cunoscută, mai mare sau egală cu 90% (P). Observația 1: Puritatea materialelor etalon utilizate pentru calibrare trebuie determinată prin metoda de normalizare. Se presupune că toți sterolii din probă sunt reprezentați în cromatogramă, că suprafața totală a vârfurilor reprezintă 100% din compușii sterolilor și că sterolii dau aceeași reacție la detector. Liniaritatea sistemului
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
sterolii din probă sunt reprezentați în cromatogramă, că suprafața totală a vârfurilor reprezintă 100% din compușii sterolilor și că sterolii dau aceeași reacție la detector. Liniaritatea sistemului trebuie validată pentru nivelurile de concentrație luate în calcul. 4.8.1. Soluție etalon de sitosterol: se prepară o soluție cu o precizie de 0,001 mg/ml, conținând aproximativ 0,5 mg/ml (W1) de sitosterol (4.8) în eter dietilic (4.4). 4.9. Stigmasterol, cu puritate cunoscută, mai mare sau egală
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
o precizie de 0,001 mg/ml, conținând aproximativ 0,5 mg/ml (W1) de sitosterol (4.8) în eter dietilic (4.4). 4.9. Stigmasterol, cu puritate cunoscută, mai mare sau egală cu 90% (P). 4.9.1. Soluție etalon de stigmasterol: se prepară o soluție cu o precizie de 0,001 mg/ml, conținând aproximativ 0,2 mg/ml (W1) de stigmasterol (4.9) în eter dietilic (4.4). 4.10. Amestec pentru testul de rezoluție. Se prepară o
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
4.10. Amestec pentru testul de rezoluție. Se prepară o soluție conținând 0,05 mg/ml de lanosterol (4.7) și 0,5 mg/ml de sitosterol (4.8) în eter dietilic (4.4). 5. PROCEDURĂ 5.1. Prepararea soluțiilor etalon pentru cromatografie. Se adaugă soluția etalon intern (4.3.1) la soluția etalon de sterol adecvată și, simultan, la proba saponificată (vezi 5.2.2). 5.1.1. Soluția cromatografică etalon de sitosterol: se transferă 1 ml de soluție etalon
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
rezoluție. Se prepară o soluție conținând 0,05 mg/ml de lanosterol (4.7) și 0,5 mg/ml de sitosterol (4.8) în eter dietilic (4.4). 5. PROCEDURĂ 5.1. Prepararea soluțiilor etalon pentru cromatografie. Se adaugă soluția etalon intern (4.3.1) la soluția etalon de sterol adecvată și, simultan, la proba saponificată (vezi 5.2.2). 5.1.1. Soluția cromatografică etalon de sitosterol: se transferă 1 ml de soluție etalon de sitosterol (4.8.1) în
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
05 mg/ml de lanosterol (4.7) și 0,5 mg/ml de sitosterol (4.8) în eter dietilic (4.4). 5. PROCEDURĂ 5.1. Prepararea soluțiilor etalon pentru cromatografie. Se adaugă soluția etalon intern (4.3.1) la soluția etalon de sterol adecvată și, simultan, la proba saponificată (vezi 5.2.2). 5.1.1. Soluția cromatografică etalon de sitosterol: se transferă 1 ml de soluție etalon de sitosterol (4.8.1) în fiecare din cele două eprubete de reacție
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
dietilic (4.4). 5. PROCEDURĂ 5.1. Prepararea soluțiilor etalon pentru cromatografie. Se adaugă soluția etalon intern (4.3.1) la soluția etalon de sterol adecvată și, simultan, la proba saponificată (vezi 5.2.2). 5.1.1. Soluția cromatografică etalon de sitosterol: se transferă 1 ml de soluție etalon de sitosterol (4.8.1) în fiecare din cele două eprubete de reacție (3.7) și se elimină dietil eterul sub flux de azot. Se adaugă 1 ml de soluție etalon
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
etalon pentru cromatografie. Se adaugă soluția etalon intern (4.3.1) la soluția etalon de sterol adecvată și, simultan, la proba saponificată (vezi 5.2.2). 5.1.1. Soluția cromatografică etalon de sitosterol: se transferă 1 ml de soluție etalon de sitosterol (4.8.1) în fiecare din cele două eprubete de reacție (3.7) și se elimină dietil eterul sub flux de azot. Se adaugă 1 ml de soluție etalon intern (4.3.1.1) și se elimină dietil
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
etalon de sitosterol: se transferă 1 ml de soluție etalon de sitosterol (4.8.1) în fiecare din cele două eprubete de reacție (3.7) și se elimină dietil eterul sub flux de azot. Se adaugă 1 ml de soluție etalon intern (4.3.1.1) și se elimină dietil eterul sub flux de azot. 5.1.2. Soluția cromatografică etalon de stigmasterol: se transferă 1 ml de soluție etalon de stigmasterol (4.9.1) în fiecare din cele două eprubete
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
eprubete de reacție (3.7) și se elimină dietil eterul sub flux de azot. Se adaugă 1 ml de soluție etalon intern (4.3.1.1) și se elimină dietil eterul sub flux de azot. 5.1.2. Soluția cromatografică etalon de stigmasterol: se transferă 1 ml de soluție etalon de stigmasterol (4.9.1) în fiecare din cele două eprubete de reacție (3.7) și se elimină dietil eterul sub flux de azot. Se adaugă 1 ml de soluție etalon
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
eterul sub flux de azot. Se adaugă 1 ml de soluție etalon intern (4.3.1.1) și se elimină dietil eterul sub flux de azot. 5.1.2. Soluția cromatografică etalon de stigmasterol: se transferă 1 ml de soluție etalon de stigmasterol (4.9.1) în fiecare din cele două eprubete de reacție (3.7) și se elimină dietil eterul sub flux de azot. Se adaugă 1 ml de soluție etalon intern (4.3.1.2) și se elimină dietil
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
etalon de stigmasterol: se transferă 1 ml de soluție etalon de stigmasterol (4.9.1) în fiecare din cele două eprubete de reacție (3.7) și se elimină dietil eterul sub flux de azot. Se adaugă 1 ml de soluție etalon intern (4.3.1.2) și se elimină dietil eterul sub flux de azot. 5.2. Prepararea substanțelor nesaponificabile 5.2.1. Se topește proba de unt la o temperatură de maximum 35șC; se amestecă cu grijă. Se cântărește, cu
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
Se adaptează refrigeratorul cu reflux și se aduce la aproximativ 75°C timp de 30 de minute. Se deconectează refrigeratorul și se lasă balonul să se răcească la temperatura camerei. 5.2.2. Se adaugă 1,0 ml de soluție etalon intern în balon (4.3.1.1) dacă se determină sitosterolul sau (4.3.1.2) dacă se determină stigmasterolul. Se amestecă bine. Se transferă cantitativ conținutul balonului într-o conductă de decantare de 500 ml (3.2), se spală
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
și se agită puternic pentru a produce dizolvarea. Dacă proba nu s-a dizolvat complet, se aduce la temperatura de 65-70°C. Se lasă să stea cel puțin 5 minute înainte de a se injecta în cromatograful cu gaz. Se sililează etaloanele în același mod ca și probele. Se sililează amestecul pentru testul de rezoluție (4.10) în același mod ca și probele. Observația 4: Sililarea trebuie efectuată într-un mediu anhidru. Sililarea incompletă a betulinei se recunoaște prin obținerea unui al
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
să fie de aproximativ: colesterol 1,0 stigmasterol 1,3 sitosterol 1,5 betulină 2,5 - timpul de retenție al betulinei trebuie să fie de aproximativ 24 minute. 5.4.2. Protocolul de analiză: Se injectează 1 µl de soluție etalon sililată (stigmasterol sau sitosterol) și se ajustează parametrii de calibrare ai integratorului. Se injectează din nou 1 µl de soluție etalon sililată pentru a se determina coeficientul de răspuns față de betulină. Se injectează 1 µl de soluție de probă sililată
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
trebuie să fie de aproximativ 24 minute. 5.4.2. Protocolul de analiză: Se injectează 1 µl de soluție etalon sililată (stigmasterol sau sitosterol) și se ajustează parametrii de calibrare ai integratorului. Se injectează din nou 1 µl de soluție etalon sililată pentru a se determina coeficientul de răspuns față de betulină. Se injectează 1 µl de soluție de probă sililată și se măsoară suprafața vârfurilor. Fiecare serie de probe trebuie precedată și urmată de o injectare de soluție etalon. De regulă
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
de soluție etalon sililată pentru a se determina coeficientul de răspuns față de betulină. Se injectează 1 µl de soluție de probă sililată și se măsoară suprafața vârfurilor. Fiecare serie de probe trebuie precedată și urmată de o injectare de soluție etalon. De regulă, injectarea soluției de probă se poate efectua după o serie de șase probe. Observația 6: Integrarea vârfului stigmasterolului trebuie să prezinte curbele indicate la punctele 1, 2 și 3 din figura 2b. Integrarea vârfului sitosterolului trebuie să înglobeze
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
Integrarea vârfului sitosterolului trebuie să înglobeze suprafața vârfului 22-dihidro-β-sitosterolului (stigmastanol) care apare imediat după sitosterol (vezi figura 3b) în momentul evaluării sitosterolului total. 6. CALCULAREA REZULTATELOR 6.1. Se determină suprafața vârfurilor sterolului și a vârfurilor betulinei în cele două etaloane, la începutul și la finalul fiecărei serii, și se calculează R1: Se determină suprafața vârfului de sterol (stigmasterol sau sitosterol) și a vârfului betulinei în probă și se calculează R2: W1 = conținutul de sterol al etalonului (mg) din 1 ml
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
betulinei în cele două etaloane, la începutul și la finalul fiecărei serii, și se calculează R1: Se determină suprafața vârfului de sterol (stigmasterol sau sitosterol) și a vârfului betulinei în probă și se calculează R2: W1 = conținutul de sterol al etalonului (mg) din 1 ml de soluție etalon (4.8.1 sau 4.9.1) W2 = masa probei (g) (5.2.1) P = puritatea sterolului etalon (4.8 sau 4.9). Conținutul de sterol din probă (mg/kg) = 7. PRECIZIA METODEI
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
și la finalul fiecărei serii, și se calculează R1: Se determină suprafața vârfului de sterol (stigmasterol sau sitosterol) și a vârfului betulinei în probă și se calculează R2: W1 = conținutul de sterol al etalonului (mg) din 1 ml de soluție etalon (4.8.1 sau 4.9.1) W2 = masa probei (g) (5.2.1) P = puritatea sterolului etalon (4.8 sau 4.9). Conținutul de sterol din probă (mg/kg) = 7. PRECIZIA METODEI 7.1. Unt 7.1.1. Repetabilitate
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
și a vârfului betulinei în probă și se calculează R2: W1 = conținutul de sterol al etalonului (mg) din 1 ml de soluție etalon (4.8.1 sau 4.9.1) W2 = masa probei (g) (5.2.1) P = puritatea sterolului etalon (4.8 sau 4.9). Conținutul de sterol din probă (mg/kg) = 7. PRECIZIA METODEI 7.1. Unt 7.1.1. Repetabilitate 7.1.1.1. Stigmasterol Diferența dintre rezultatele a două determinări efectuate în cel mai scurt interval de
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
de preferat rezoluția completă, adică traseul vârfului lanosterolului trebuie să atingă linia de bază înainte de ieșirea din vârf a sitosterolului, cu toate că și o rezoluție incompletă este acceptabilă. Figura 2a Stigmasterol standard ordonată: Răspunsul detectorului cu ionizare în flacără Stigmasterol Betulină (etalon intern) abscisă: Timpul (în minute) Figura 2b Probă de unt denaturat cu stigmasterol ordonată: Răspunsul detectorului de ionizare cu flacără Colesterol Lanosterol Stigmasterol Betulină (etalon intern) abscisă: Timpul (în minute) Observație: Integrarea vârfului stigmasterolului trebuie să includă toate traseele cuprinse
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
este acceptabilă. Figura 2a Stigmasterol standard ordonată: Răspunsul detectorului cu ionizare în flacără Stigmasterol Betulină (etalon intern) abscisă: Timpul (în minute) Figura 2b Probă de unt denaturat cu stigmasterol ordonată: Răspunsul detectorului de ionizare cu flacără Colesterol Lanosterol Stigmasterol Betulină (etalon intern) abscisă: Timpul (în minute) Observație: Integrarea vârfului stigmasterolului trebuie să includă toate traseele cuprinse între punctele 1, 2 și 3. Figura 3a Sitosterol etalon ordonată: Răspunsul detectorului cu ionizare în flacără β-sitosterol Betulină (etalon intern) abscisă: Timpul (în minute
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]