4,885 matches
-
unt denaturat cu stigmasterol ordonată: Răspunsul detectorului de ionizare cu flacără Colesterol Lanosterol Stigmasterol Betulină (etalon intern) abscisă: Timpul (în minute) Observație: Integrarea vârfului stigmasterolului trebuie să includă toate traseele cuprinse între punctele 1, 2 și 3. Figura 3a Sitosterol etalon ordonată: Răspunsul detectorului cu ionizare în flacără β-sitosterol Betulină (etalon intern) abscisă: Timpul (în minute) Figura 3b Probă de unt denaturat cu ß- sitosterol ordonată: Răspunsul detectorului cu ionizare în flacără Colesterol β-sitosterol Betulină (etalon intern) abscisă: Timpul (în minute
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
flacără Colesterol Lanosterol Stigmasterol Betulină (etalon intern) abscisă: Timpul (în minute) Observație: Integrarea vârfului stigmasterolului trebuie să includă toate traseele cuprinse între punctele 1, 2 și 3. Figura 3a Sitosterol etalon ordonată: Răspunsul detectorului cu ionizare în flacără β-sitosterol Betulină (etalon intern) abscisă: Timpul (în minute) Figura 3b Probă de unt denaturat cu ß- sitosterol ordonată: Răspunsul detectorului cu ionizare în flacără Colesterol β-sitosterol Betulină (etalon intern) abscisă: Timpul (în minute) Observație: β-sitosterolul conține frecvent o impuritate (stigmastanol) care apare imediat
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
și 3. Figura 3a Sitosterol etalon ordonată: Răspunsul detectorului cu ionizare în flacără β-sitosterol Betulină (etalon intern) abscisă: Timpul (în minute) Figura 3b Probă de unt denaturat cu ß- sitosterol ordonată: Răspunsul detectorului cu ionizare în flacără Colesterol β-sitosterol Betulină (etalon intern) abscisă: Timpul (în minute) Observație: β-sitosterolul conține frecvent o impuritate (stigmastanol) care apare imediat după β-sitosterol. Suprafețele celor două vârfuri trebuie însumate la evaluarea cantității totale de β-sitosterol existente. Stigmastanol Lanosterol Stigmastanol ANEXA XV (Articolul 10) METODĂ DE REFERINȚĂ
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
procent de masă. 4. Principiu - Reconstituirea laptelui praf degresat, îndepărtarea grăsimilor și proteinelor cu acid tricloroacetic, urmată de centrifugare; - Determinarea cantității de glicomacropeptide (GMP) din supranatant prin cromatografie lichidă de înaltă performanță (HPLC); - Evaluarea rezultatelor obținute pentru probe față de probe etalon formate din lapte praf degresat cu sau fără adăugarea unui procent cunoscut de zer praf. 5. Reactivi Toți reactivii trebuie să aibă o puritate analitică recunoscută. Apa utilizată trebuie să fie apă distilată sau apă de o puritate cel puțin
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
volume de apă. Amestecul se filtrează înainte de folosire printr-o membrană filtrantă cu pori cu diametrul de 0,45. Observație: Se poate folosi orice alt solvent de spălare cu efect bactericid care nu afectează eficiența rezoluției coloanelor. 5.4. Probe etalon 5.4.1. Lapte praf degresat care îndeplinește cerințele acestei Rezoluții (adică [o]). 5.4.2. Același lapte praf degresat modificat cu 5% (m/m) zer închegat praf cu compoziție standard (adică [5]). 6. Aparatură 6.1. Balanță analitică. 6
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
mult de + 5˚C în nici o serie de analize. 7. Prelevarea probelor 7.1. Standardul internațional ISO 707 - "Lapte și produse lactate - Metode de prelevare a probelor" conform indicațiilor din anexa I (2) lit. (c) ultimul paragraf. 5.2. Probele etalon se depozitează în condiții în care nu poate surveni nici o deteriorare sau modificare a compoziției. 6. Procedură 8.1. Prepararea probei de analiză Se transferă laptele praf într-un recipient cu o capacitate aproximativ dublă față de volumul laptelui praf, prevăzut
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
mult de 24 de ore, coloanele se clătesc cu apă și se spală cu soluție (5.3) timp de cel puțin trei ore la un debit de 0,2 ml pe minut. 8.4.2. Rezultatele analizei cromatografice a probei etalon [E] se obțin sub forma unei cromatograme în care fiecare vârf se identifică după timpul de retenție RT după cum urmează: Vârful II: Al doilea vârf al cromatogramei cu un RT de aproximativ 17,5 minute. Vârful III: Al treilea vârf
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
și formula 9.1.1. Calcularea factorilor de răspuns R: Vârful II: Vârful IV: unde: RII și RIV = factorii de răspuns pentru vârfurile II și respectiv IV, AII [0] și AIV [0] = suprafețele vârfurilor II și respectiv IV pentru proba etalon [0] obținute la 8.5.3. Vârful III: unde: RII = coeficientul de răspuns al vârfului III, AIII [0] și AIII [5] = suprafețele vârfurilor III pentru probele etalon [0] și respectiv [5] obținute la 8.5.3. W = cantitatea de zer
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
AII [0] și AIV [0] = suprafețele vârfurilor II și respectiv IV pentru proba etalon [0] obținute la 8.5.3. Vârful III: unde: RII = coeficientul de răspuns al vârfului III, AIII [0] și AIII [5] = suprafețele vârfurilor III pentru probele etalon [0] și respectiv [5] obținute la 8.5.3. W = cantitatea de zer din proba etalon [5] adică 5. 9.1.2. Calcularea suprafeței relative a vârfurilor probei [E]: SII [E] = RII x AII [E] SIII [E] = RII x AIII
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
la 8.5.3. Vârful III: unde: RII = coeficientul de răspuns al vârfului III, AIII [0] și AIII [5] = suprafețele vârfurilor III pentru probele etalon [0] și respectiv [5] obținute la 8.5.3. W = cantitatea de zer din proba etalon [5] adică 5. 9.1.2. Calcularea suprafeței relative a vârfurilor probei [E]: SII [E] = RII x AII [E] SIII [E] = RII x AIII [E] SIV [E] = RIV x AI [E] unde: SII [E], SIII [E], SIV [E] = suprafețele relative
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
A se determină conform anexei XVIII. Probele pentru care se obțin rezultate pozitive se analizează pentru detectarea glicomacropeptidelor A prin procedura de cromatografie lichidă de înaltă performanță în fază inversată (procedura HPLC). Evaluarea rezultatelor se face prin referire la probe etalon formate din lapte praf degresat care conțin sau nu conțin un procent cunoscut de zer praf. Rezultatele mai mari de 1% (m/m) indică prezența substanțelor solide din zer închegat. 5. Reactivi Toți reactivii utilizați trebuie să fie de calitate
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
0,45 μm. 5.3. Conservarea coloanei După analize, coloana se clătește cu eluantul B (cu un gradient) iar apoi se clătește cu acetonitril (cu un gradient timp de 30 de minute). Coloana se păstrează în acetonitril. 5.4. Probele etalon 5.4.1. Lapte praf degresat care îndeplinește cerințele pentru depozitare publică (adică (0)). 5.4.2. Același lapte praf degresat, modificat cu 5% (m/m) zer închegat praf cu compoziție standard (adică (5)). 5.4.3. Același lapte praf
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
bucla injectorului, inclusiv) timpul de retenție de 26 + 2 minute pentru GMPA este optim. Pentru sistemele reglabile cu un volum mort mai mic (de exemplu 2 ml) timpul optim de retenție este de 22 minute. Se recoltează soluții de probă etalon (5.4) cu și fără 50 ș6 zer închegat. Se injectează 100 μl de supranatant sau de filtrat (8.3.3.) în sistemul HPLC care funcționează în condițiile de gradient de explorare din Tabelul 1. Tabelul 1 Condiții de gradient
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
aparatului sau a coloanelor, fie originii sau naturii probei analizate. Dacă există dubii, analiza se repetă. 8.5. Calibrarea 8.5.1. Se aplică cu exactitate procedura descrisă de la pct. 8.2 la pct. 8.4.4 folosindu-se probele etalon (5.4.1 - 5.4.2). Se folosesc soluții proaspăt preparate, întrucât GMP se degradează într-un mediu 8% tricloroacetic la temperatura camerei. La 4˚C soluția este stabilă timp de 24 ore. Pentru seriile lungi de analize este de
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
similară cu cea din Figura 1. În această figură vârful GMPA este precedat de două vârfuri mici. Este extrem de important să se obțină o separare similară. 8.5.2. Înainte de determinarea cromatografică a probei se injectează 100 μl din proba etalon care nu conține zer închegat (0) (5.4.1). Pe cromatogramă nu trebuie să apară un vârf pentru timpul de retenție al vârfului GMPA. 8.5.3. Coeficientul de răspuns R se determină prin injectarea aceluiași volum de filtrat (8
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
9. Exprimarea rezultatelor 9.1. Metoda de calcul și formula 9.1.1. Calcularea coeficientului de răspuns R: Vârful GMP = W/H Unde: R = coeficientul de răspuns al vârfului GMP H = înălțimea vârfului GMP W = cantitatea de zer din proba etalon (5). 9.2. Calcularea procentului de zer închegat praf din probă W(E) = R x H(E) Unde: W(E) = procentul (m/m) de zer închegat din probă (E). R = coeficientul de răspuns al vârfului GMP (9.1.1) H
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
4.1. Se consideră că zerul este prezent dacă rezultatul obținut la 9.2 este mai mare de 1 % m/m și timpul de retenție al vârfului GMP diferă cu mai mult de 0,2 minute de cel al probei etalon (5). Limita de 1% se stabilește în conformitate cu prevederile de la punctele 9.2 și 9.4.1 din anexa V la Regulamentul (CEE) nr. 625/78. Tabelul I - Ni-4.6 standard ordonată: Absorbanța (220 nm) abscisă: timp (minute) ANEXA XX
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
cu metanol din lapte praf reconstituit. Determinare PS și PE ca derivați ai o-ftaldialdehidei (OPA) prin HPLC în fază inversă (RP) și prin detectare prin fluorescență. Cuantificarea conținutului de PS și PE din proba analizată prin referire la o probă etalon conținând o cantitate cunoscută de PEDP. 4. Reactivi Toți reactivii utilizați trebuie să fie de calitate analitică recunoscută. Apa utilizată trebuie să fie apă distilată sau apă de o puritate cel puțin echivalentă, cu excepția cazurilor în care se precizează altceva
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
cunoscută de PEDP. 4. Reactivi Toți reactivii utilizați trebuie să fie de calitate analitică recunoscută. Apa utilizată trebuie să fie apă distilată sau apă de o puritate cel puțin echivalentă, cu excepția cazurilor în care se precizează altceva. 4.1. Material etalon: PEDP cu o puritate de cel puțin 99% Notă: Materialul etalon se depozitează la - 18°C. 4.2. Reactivi pentru prepararea probei etalon și a probei de analiză 4.2.1. Metanol de calitate HPLC 4.2.2. Cloroform de
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
de calitate analitică recunoscută. Apa utilizată trebuie să fie apă distilată sau apă de o puritate cel puțin echivalentă, cu excepția cazurilor în care se precizează altceva. 4.1. Material etalon: PEDP cu o puritate de cel puțin 99% Notă: Materialul etalon se depozitează la - 18°C. 4.2. Reactivi pentru prepararea probei etalon și a probei de analiză 4.2.1. Metanol de calitate HPLC 4.2.2. Cloroform de calitate HPLC 4.2.3. Monoclorhidrat de triptamină 4.3. Reactivi
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
apă de o puritate cel puțin echivalentă, cu excepția cazurilor în care se precizează altceva. 4.1. Material etalon: PEDP cu o puritate de cel puțin 99% Notă: Materialul etalon se depozitează la - 18°C. 4.2. Reactivi pentru prepararea probei etalon și a probei de analiză 4.2.1. Metanol de calitate HPLC 4.2.2. Cloroform de calitate HPLC 4.2.3. Monoclorhidrat de triptamină 4.3. Reactivi pentru derivarea o-ftaldialdehidei 4.3.1. Hidroxid de sodiu, soluție de apă
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
Licrosferă - 100 coloană (250 x 4,6 mm) sau o coloană echivalentă învelită în octadecilsilan (C 18) cu particule de 5 μm. 6. Prelevarea probelor Prelevarea probelor se realizează conform standardului FIL 50B:1985. 7. Procedura 7.1. Prepararea soluției etalon intern Se cântăresc 30,0 + 0,1 mg de monoclorhidrat de triptamină (4.2.3) într-un balon cotat de 100 ml (5.6) și se completează cu metanol (4.2.1) până la marcaj. Se pipetează 1ml (5.3) din
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
Se centrifughează (5.9) la 27 000 x g timp de 10 minute și se colectează supranatantul într-o fiolă de sticlă (5.10). Notă: Soluția probă se depozitează la 4°C până la finalizarea analizei HPLC. 7.3. Prepararea soluției etalon extern Se cântăresc 55,4 g de PEDP (4.1) într-un balon cotat de 50 ml (5.6) și se adaugă aproximativ 25 ml de cloroform (4.2.2) cu ajutorul unui cilindru gradat (5.11). Se încălzește balonul astupat
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
de minute. 7.5.5. Determinarea conținutului de PS + PE din proba analizată 7.5.6. Se realizează secvența de analiză cromatografică lăsându-se un timp constant între seriile de analize pentru a se obține timpi de reținere constanți. Soluția etalon extern (7.3) se injectează la fiecare 5 -10 soluții probă pentru a se evalua coeficientul de răspuns. Notă: Coloana se curăță prin clătire cu solvent B 100% (7.5.10) timp de cel puțin 30 de minute la fiecare
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]
-
în Figura 1. 8. Calcularea și exprimarea rezultatelor Conținutul de PS și PE din proba analizată se calculează după cum urmează: unde: C = conținutul de PS sau PE (mg/100 g praf) din proba analizată A1 = suprafața vârfului PEDP din soluția etalon din probă (7.3) A2 = Suprafața vârfului PS sau PE din soluția din probă (7.2) T1 = Suprafața vârfului triptaminei din soluția etalon din probă (7.3) T2 = Suprafața vârfului triptaminei din soluția din probă (7.2) 9. Precizie Notă
jrc5187as2001 by Guvernul României () [Corola-website/Law/90355_a_91142]