9,263 matches
-
o dotare puțin peste medie, iar ușurința cu care se recoltează, posibilitatea menținerii serurilor congelate până la 6 luni, impactul psihologic benefic asupra pacientei, accesibilitatea prețului, impun introducerea acestor noi determinări în mod curent. Capitolul 9 RECEPTORII HORMONALI DETERMINARE DE ESTROGEN RECEPTORI ȘI PROGESTERON RECEPTORI ÎN CANCERUL GLANDEI MAMARE Descoperirea receptorilor intracelulari pentru hormonii steroidici a reprezentat baza științifică care a permis elucidarea mecanismelor de acțiune ale acestor hormoni, la nivel molecular. Ca principiu de bază al acțiunii acestora, se consideră că
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
peste medie, iar ușurința cu care se recoltează, posibilitatea menținerii serurilor congelate până la 6 luni, impactul psihologic benefic asupra pacientei, accesibilitatea prețului, impun introducerea acestor noi determinări în mod curent. Capitolul 9 RECEPTORII HORMONALI DETERMINARE DE ESTROGEN RECEPTORI ȘI PROGESTERON RECEPTORI ÎN CANCERUL GLANDEI MAMARE Descoperirea receptorilor intracelulari pentru hormonii steroidici a reprezentat baza științifică care a permis elucidarea mecanismelor de acțiune ale acestor hormoni, la nivel molecular. Ca principiu de bază al acțiunii acestora, se consideră că ei se leagă
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
foarte mult răspunsul organismului la terapie. Descifrarea corectă a mecanismelor ce privesc dependența, respectiv independența hormonală a tumorii glandei mamare constituie obiectul cercetării în domeniu. În celule, transportul informației genetice se realizează prin intermediul moleculelor "semnal" care sunt captate de molecule "receptoare". Moleculele semnal sunt reprezentate de structuri specifice, cum ar fi: hormoni, neurotransmițători, retinoizi, medicamente, etc. , care interacționează cu receptorii lor specifici. Ele mediază comunicarea celulară prin mai multe variante de acțiune: autocrin acționează asupra celulelor care le produc; paracrin acționează
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
care recunosc și leagă, cu afinitate mare, moleculele-semnal care se mai numesc și liganzi. Numărul de liganzi fiind prea mare și diferit ca structură, s-a preferat clasificarea după modul de localizare a receptorilor. Astfel, se consideră două categorii de receptori: receptori de membrană, situații la suprafața externă a membranei celulare; receptori intracelulari, care se află în citoplasmă. Receptorii de membrană interacționează cu molecule mari, care nu pot traversa membrana celulară (hormoni peptidici, factori de creștere, etc.), formând complecși receptor-ligand. Receptorul
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
recunosc și leagă, cu afinitate mare, moleculele-semnal care se mai numesc și liganzi. Numărul de liganzi fiind prea mare și diferit ca structură, s-a preferat clasificarea după modul de localizare a receptorilor. Astfel, se consideră două categorii de receptori: receptori de membrană, situații la suprafața externă a membranei celulare; receptori intracelulari, care se află în citoplasmă. Receptorii de membrană interacționează cu molecule mari, care nu pot traversa membrana celulară (hormoni peptidici, factori de creștere, etc.), formând complecși receptor-ligand. Receptorul de
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
numesc și liganzi. Numărul de liganzi fiind prea mare și diferit ca structură, s-a preferat clasificarea după modul de localizare a receptorilor. Astfel, se consideră două categorii de receptori: receptori de membrană, situații la suprafața externă a membranei celulare; receptori intracelulari, care se află în citoplasmă. Receptorii de membrană interacționează cu molecule mari, care nu pot traversa membrana celulară (hormoni peptidici, factori de creștere, etc.), formând complecși receptor-ligand. Receptorul de membrană, în urma interacțiunii cu ligandul specific, este activat și poate
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
servesc la recunoașterea specifică a elementului de răspuns hormonal (sau steroidic), localizat în ADN, genomic adiacent genelor țintă. S-a sugerat că primul "deget" conține informația primară pentru specificitatea secvențială de legare, în timp ce cel de-al doilea "deget" stabilizează legarea receptorului la elementul de răspuns al ADN. Adiacent "degetului de zinc" C-terminal se află o secvență scurtă care pare a fi, cel puțin în parte, responsabilă de localizarea intranucleară a receptorului. Un alt semnal de translocare nucleară hormono-dependentă ar putea
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
legare, în timp ce cel de-al doilea "deget" stabilizează legarea receptorului la elementul de răspuns al ADN. Adiacent "degetului de zinc" C-terminal se află o secvență scurtă care pare a fi, cel puțin în parte, responsabilă de localizarea intranucleară a receptorului. Un alt semnal de translocare nucleară hormono-dependentă ar putea fi localizat în partea C-terminală, acoperind LBD. Resturile de aminoacizi din aceste regiuni par a fi responsabile pentru interacțiunea cu o proteină complexantă (de ex. proteinele de șoc termic de
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
cu promotorul și cu factorii de transcripție specifici celulei. Regiunea D o secvență hidrofilă pare a avea un rol de "balama" (de legătură) între domeniile de legare de ADN și respectiv, de hormon. Celulele tipice conțin până la 10 molecule de receptori steroidici; fiecare poate lega o moleculă de hormon streroidic, cu o afinitate ridicată. De exemplu, receptorul pentru estrogen, în organe țintă ca uterul și glandele mamare are constanta de disociere pentru estrogen de circa 3 x 10 M -1 . Purificarea
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
lega o moleculă de hormon streroidic, cu o afinitate ridicată. De exemplu, receptorul pentru estrogen, în organe țintă ca uterul și glandele mamare are constanta de disociere pentru estrogen de circa 3 x 10 M -1 . Purificarea avansată a pro-teinei receptoare pentru hormonii estrogenici, prin cromatografie de înaltă performanță (HPLC) a permis determinarea masei moleculare: 200 kDa și a constantei de sedimentare pentru proteina din fracția citosolică, a cărei valoare este de 4S, devenind 5S, după legarea estrogenului. Răspunsul legării receptorilor
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
se realizează în două etape: inducerea directă a transcripției unui număr mic de gene specifice răspunsul primar; produșii acestor gene activează alte gene și produc un răspuns secundar întârziat [261]. Fiecare dintre hormonii steroidici din vertebrate acționează prin legarea de receptori specifici, diferiți pentru fiecare moleculă de hormon steroidic, chiar dacă diferența structurală dintre hormoni este minimă. În plus, același hormon poate produce efecte diferite în diverse celule, astfel că ei conduc la răspunsuri foarte variate, depinzând de tipul celular. Există o
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
Deși efectele unei clase de hormoni pot fi influențate de stadiul metabolic al celulei sau de ciclul celular, ele sunt caracteristice acestei clase de hormoni și sunt, de aceea specifice fiecărui hormon. Răspunsul celular este mediat de o interacțiune a receptorului hormonal cu HRE de pe ADN, care sunt recunoscute, în mod specific, de receptorii proteici. Există diverse clase de HRE, iar selectivitatea răspunsului hormonal constă în utilizarea unui HRE specific pentru un grup de receptori. METODE DE ANALIZĂ ALE PROTEINELOR RECEPTOARE
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
este mediat de o interacțiune a receptorului hormonal cu HRE de pe ADN, care sunt recunoscute, în mod specific, de receptorii proteici. Există diverse clase de HRE, iar selectivitatea răspunsului hormonal constă în utilizarea unui HRE specific pentru un grup de receptori. METODE DE ANALIZĂ ALE PROTEINELOR RECEPTOARE PENTRU ESTROGENI ȘI PROGESTERON Pentru caracterizarea receptorilor pentru estrogeni și progesteronă (ER și PR), din țesut de glandă mamară umană, sunt aplicate numeroase metode. Din punct de vedere clinic, aceste studii sunt utile, deoarece
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
receptorului hormonal cu HRE de pe ADN, care sunt recunoscute, în mod specific, de receptorii proteici. Există diverse clase de HRE, iar selectivitatea răspunsului hormonal constă în utilizarea unui HRE specific pentru un grup de receptori. METODE DE ANALIZĂ ALE PROTEINELOR RECEPTOARE PENTRU ESTROGENI ȘI PROGESTERON Pentru caracterizarea receptorilor pentru estrogeni și progesteronă (ER și PR), din țesut de glandă mamară umană, sunt aplicate numeroase metode. Din punct de vedere clinic, aceste studii sunt utile, deoarece permit prezicerea răspunsului la terapia endocrină
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
terapia endocrină, dar din punct de vedere al laboratorului, multe dintre metodele de investigare ale receptorilor necesită timp, aparatură și reactivi scumpi, sunt dificil de executat și, în plus, pot avea o sensibilitate scăzută, iar rezultatele privind concentrațiile de proteină receptoare nu sunt întotdeauna comparabile, chiar în cadrul aceluiași laborator și, cu atât mai puțin, între diversele laboratoare. Receptorii hormonali sunt proteine labile termic. Stabilitatea lor este puternic influențată și de pH și de tăria ionică a soluțiilor utilizate. De aceea, imediat
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
sunt proteine labile termic. Stabilitatea lor este puternic influențată și de pH și de tăria ionică a soluțiilor utilizate. De aceea, imediat după prelevarea chirurgicală a specimenelor, țesutul este răcit și menținut la 4C pe gheață, ca să se asigure stabilitatea receptorului pentru controlul patologic. La temperatura camerei, timpul de înjumătățire al proteinei-receptor, tl/2, este de cca 2 ore. Domeniul maxim de stabilitate a fost evaluat la pH = 7,4 7,8. Se evită contactul direct al tumorii cu soluție salină
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
ar putea descrește, în mod fals, valorile receptorilor pentru estrogeni și progesteronă. În studiile standard se acceptă ca valori minime pentru determinarea ER sau PR concentrații ale proteinei citosolice de 1 mg/ml, în citosol extras din tumori cu activitate receptoare ridicată și respectiv, 3 mg/ml, în citosol extras din tumori cu valori ale receptorilor scăzute. Menținerea integrității receptorului este realizată prin includerea a 10 20 nM de molibdat de sodiu în tamponul de extracție. Valorile se raportează la concentrația
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
minime pentru determinarea ER sau PR concentrații ale proteinei citosolice de 1 mg/ml, în citosol extras din tumori cu activitate receptoare ridicată și respectiv, 3 mg/ml, în citosol extras din tumori cu valori ale receptorilor scăzute. Menținerea integrității receptorului este realizată prin includerea a 10 20 nM de molibdat de sodiu în tamponul de extracție. Valorile se raportează la concentrația de proteină citosolică, determinată prin diverse metode colorimetrice (Lowry) sau prin determinări directe, în ultraviolet. Există mai multe metode
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
de analiză și caracterizare a receptorilor steroidici bazată pe distribuția diferențiată a componentelor amestecului de separat în funcție de diverși factori (masă moleculară, polaritate, etc.) între două faze nemiscibile, una mobilă, iar cealaltă staționară. Avantajele HPLC sunt: timp de analiză scurt, modificarea receptorului este minimă, rezoluția determinărilor este crescută, iar reproductibilitatea este înaltă, permițând și determinări cantitative [267]. Din păcate, studiul HPLC este obositor, pretențios și necesită un echipament scump, o tehnicitate extrem de avansată a experimentatorului [268]. De aceea analize HPLC ale proteinelor
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
este minimă, rezoluția determinărilor este crescută, iar reproductibilitatea este înaltă, permițând și determinări cantitative [267]. Din păcate, studiul HPLC este obositor, pretențios și necesită un echipament scump, o tehnicitate extrem de avansată a experimentatorului [268]. De aceea analize HPLC ale proteinelor receptoare sunt realizate, în mod curent, numai în cercetare și mai rar în determinări curente [269]. . Metoda absorbției pe cărbune acoperit cu dextran (DCC Dextran coated chorcoal assay) sau metoda dozei unice saturate Studiile DCC se bazează pe capacitatea cărbunelui activ
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
probelor de adenocarcinom de glandă mamară, după ce sunt dezghețate, sunt trecute în godeurile plăcuțelor speciale, apoi sunt fixate în etanol și incubate cu unul sau mai mulți anticorpi monoclonali de șoarece anti-ER sau anti-PR uman. Complecșii formați între anticorpi și receptori sunt vizualizați prin metoda imunoperoxidazică indirectă. În determinările de recunoaștere prin metode ICA a determinanților unici situați pe receptorii pentru estrogeni, s-au folosit patru anticorpi monoclonali diferiți (D75P3Y, D547SpY, H222 și H226). Deși toți cei patru anticorpi leagă ambele
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
indirectă. În determinările de recunoaștere prin metode ICA a determinanților unici situați pe receptorii pentru estrogeni, s-au folosit patru anticorpi monoclonali diferiți (D75P3Y, D547SpY, H222 și H226). Deși toți cei patru anticorpi leagă ambele forme (citosolică și nucleară) ale receptorului estrogenic, din extractele tisulare, practic s-a reușit identificarea numai a receptorului nuclear [272]. S-a ajuns astfel la concluzia că, de fapt, țesutul intact conține doar forma nucleară a receptorilor, iar "receptorii citosolici" reprezintă, de fapt, un artefact experimental
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
pe receptorii pentru estrogeni, s-au folosit patru anticorpi monoclonali diferiți (D75P3Y, D547SpY, H222 și H226). Deși toți cei patru anticorpi leagă ambele forme (citosolică și nucleară) ale receptorului estrogenic, din extractele tisulare, practic s-a reușit identificarea numai a receptorului nuclear [272]. S-a ajuns astfel la concluzia că, de fapt, țesutul intact conține doar forma nucleară a receptorilor, iar "receptorii citosolici" reprezintă, de fapt, un artefact experimental, fiind rezultatul omogenizării tisulare. S-a observat existența unei bune corelații între
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
oferă o serie de avantaje, în sensul că permite măsurarea ER și PR din cantități foarte mici de probă, a condus la obținerea unor kituri ce sunt comercializate. Metoda imuno-enzimatică (EIA Enzymatic immunoassays) Obținerea de anticorpi monoclonali specifici pentru proteinele receptoare pentru estrogeni și progesteronă a permis detectarea acestora în stare liberă, independent de procesul de legare al hormonului. A devenit astfel posibilă dezvoltarea studiilor referitoare la ER și PR, în sensul că este posibilă o recunoaștere antigenică directă a proteinelor
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
capacitatea de legare a steroidului. O astfel de metodă este cea imunoenzimatică EIA, care elimină astfel multiplele surse se variabilitate și îmbunătățește gradul informațional cantitativ. În figura de mai jos este prezentată schematic metoda imunoenzimatică de măsurarea a nivelului proteinelor receptoare pentru estrogeni și progesteronă bazată pe recunoașterea antigenică directă. EIA reprezintă o alternativă eficientă față de DCC, atât în privința performanțelor, cât și a costului. Se observă astfel, o concordanță a rezultatelor, determinate prin EIA și respectiv DCC, de până la 100%, în
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]