9,263 matches
-
în cazul legării nespecifice BN. Legarea specifică, B S se calculează ca diferență între B T și B N: BS = BT BN Calculul este similar cu cel utilizat în metoda DCC, dar în plus față de aceasta, este posibilă calcularea: afinității receptorului pentru steroid (din valoarea constantei de disociere Kd ), a capacității de legare pe celulă, B max și trasarea curbelor de saturare, care reprezintă grafic legarea specifică B S în funcție de concentrația ligandului radioactiv [273]. În figura următoare sunt prezentate, schematic, metodele
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
exemplu de uter de șobolan). Metoda permite: realizarea distribuției electroforetice a proteinelor care prezintă situsuri de legare pentru hormonul steroidic testat, evaluarea proteinelor "vinovate" de legarea nespecifică BN, aprecierea masei moleculare proteice, testarea influenței molibdatului asupra stabilității unității complexului proteină (receptoare) hormon steroidic de tip sexual [275]. Atât separarea în sine, cât și caracterizarea ulterioară a proteinelor depind de caracteristicile gelului de poliacrilamidă: lungimea fibrelor și distribuția și forma porilor. Acestea pot controlate prin alegerea adecvată a concentrației de acrilamidă totală
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
coeficient de retardare (este funcție primară de masa moleculară), log Yc = intersecția cu ordonata (este funcție primară de raportul sarcină netă/ suprafață), T este temperatura absolută,. Printre alte aplicații potențiale ale tehnicii de separare prin electroforeză se pot include: identificarea "receptorilor orfani" (receptorii nelegați de hormon), studierea stabilității complexelor receptor-steroid, a relației dintre receptorul citoplasmatic (dacă acesta există într adevăr!) receptor nuclear sau a mecanismului de activare al receptorului. În cadrul Colectivului de Receptori Hormonali din Institutul Oncologic București s-a realizat
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
aplicații potențiale ale tehnicii de separare prin electroforeză se pot include: identificarea "receptorilor orfani" (receptorii nelegați de hormon), studierea stabilității complexelor receptor-steroid, a relației dintre receptorul citoplasmatic (dacă acesta există într adevăr!) receptor nuclear sau a mecanismului de activare al receptorului. În cadrul Colectivului de Receptori Hormonali din Institutul Oncologic București s-a realizat separarea electroforetică a receptorilor, după ce aceștia au format complexe cu ligandul (estradiol) marcat radioactiv (3 H); după separare, identificarea fracțiunilor s-a realizat prin determinarea radioactivității . Erori posibile
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
de separare prin electroforeză se pot include: identificarea "receptorilor orfani" (receptorii nelegați de hormon), studierea stabilității complexelor receptor-steroid, a relației dintre receptorul citoplasmatic (dacă acesta există într adevăr!) receptor nuclear sau a mecanismului de activare al receptorului. În cadrul Colectivului de Receptori Hormonali din Institutul Oncologic București s-a realizat separarea electroforetică a receptorilor, după ce aceștia au format complexe cu ligandul (estradiol) marcat radioactiv (3 H); după separare, identificarea fracțiunilor s-a realizat prin determinarea radioactivității . Erori posibile în determinările asupra receptorilor
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
clare. Câteva dintre cazurile de erori sunt prezentate în continuare. În orice caz, de existența rezultatelor fals pozitive sau negative trebuie să se țină seama în stabilirea conduitei terapeutice. Rezultate fals negative: În unele situații clinice, determinările de concentrație a receptorului pentru estrogen sunt "negative" (concentrația receptorului este la limita de detecție), dar dacă se realizează totuși terapia hormonală, se detectează existența unui răspuns pozitiv. Factorii majori care ar putea contribui la această situație aparent contradictorie sunt culegerea neatentă a specimenelor
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
sunt prezentate în continuare. În orice caz, de existența rezultatelor fals pozitive sau negative trebuie să se țină seama în stabilirea conduitei terapeutice. Rezultate fals negative: În unele situații clinice, determinările de concentrație a receptorului pentru estrogen sunt "negative" (concentrația receptorului este la limita de detecție), dar dacă se realizează totuși terapia hormonală, se detectează existența unui răspuns pozitiv. Factorii majori care ar putea contribui la această situație aparent contradictorie sunt culegerea neatentă a specimenelor (probelor de țesut) ce sunt supuse
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
determinată de diluarea probei la extracția citosolului). Teoretic, o dublare a concentrației proteice din citosol ar conduce la o creștere proporțională a concentrației receptorilor. În realitate însă, datorită limitelor de sensibilitate a metodelor, pentru intervalul 1-3 mg/ml proteină, concentrația receptorului se menține "constantă". În cazul utilizării metodelor biochimice, rezultatele pot fi modificate de interferența altor receptori nespecifici prezenți în specimenele tumorale, ca de exemplu: albumina, corticosteroidul legat de globulină (CBG) sau "hormonul steroidic legat de globulină" (SHBG). Pentru reducerea acestor
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
conduce la o creștere proporțională a concentrației receptorilor. În realitate însă, datorită limitelor de sensibilitate a metodelor, pentru intervalul 1-3 mg/ml proteină, concentrația receptorului se menține "constantă". În cazul utilizării metodelor biochimice, rezultatele pot fi modificate de interferența altor receptori nespecifici prezenți în specimenele tumorale, ca de exemplu: albumina, corticosteroidul legat de globulină (CBG) sau "hormonul steroidic legat de globulină" (SHBG). Pentru reducerea acestor interferențe se recomandă alegerea adecvată a steroizilor marcați și a competitorilor. In cazul altei metode, DCC
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
acestor interferențe se recomandă alegerea adecvată a steroizilor marcați și a competitorilor. In cazul altei metode, DCC, nivelul determinărilor poate fi afectat de timpul de expunere la cărbune. O concentrație excesivă de cărbune conduce la rezultate eronate datorită disocierii complexului receptor hormon. Rezultate fals pozitive. În mod "normal", tumorile RE+ sunt responsive la terapia hormonală. Există însă și cazuri contrarii. O explicație posibilă o reprezintă fenomenul de heterogenicitate tumorală. C. J. Menedez-Botet și colab. a observat că în 38% din cazuri se
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
specific al ADN; (d) implicarea în procesul de transcripție, și apoi în cel de translație. Aceste "defecte" pot fi prezente și în celulele ER+/PR+ și constituie o posibilă explicație a responsivității scăzute la terapie. Domenii de valori ale proteinelor receptoare pentru hormonii steroidici Dintre metodele prezentate în paragrafele anterioare, cea mai dea utilizată este DCC; în cazul acesteia, interpretarea rezultatelor se face în limitele prezentate în Tabelul 7. 1: În cazul metodei ICA care este mai puțin sensibilă limita inferioară
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
d = 3 x 10-10 M (56). În ceea ce privește valorile masei moleculare s-au raportat două valori: 7 8 x 107 Da, pentru receptorul inactiv (monomer) și respectiv, 13 14 x 107 Da, pentru receptorul activ (dimer). DETERMINAREA ESTROGEN RECEPTORILOR ȘI PROGESTERON RECEPTORILOR Plecând de la datele de literatură, prezentate în prima parte a lucrării s au efectuat două categorii de determinări experimentale; prima a vizat proteinele receptoare pentru hormonii estrogenici și pentru progesteronă, iar a doua, proteina pS2. În capitolul de față se
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
și respectiv, 13 14 x 107 Da, pentru receptorul activ (dimer). DETERMINAREA ESTROGEN RECEPTORILOR ȘI PROGESTERON RECEPTORILOR Plecând de la datele de literatură, prezentate în prima parte a lucrării s au efectuat două categorii de determinări experimentale; prima a vizat proteinele receptoare pentru hormonii estrogenici și pentru progesteronă, iar a doua, proteina pS2. În capitolul de față se prezintă rezultatele privind proteinele receptoare Studiul prezent a avut ca scop identificarea expresiei ER și PR în tumori mamare și corelarea nivelelor de expresie
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
literatură, prezentate în prima parte a lucrării s au efectuat două categorii de determinări experimentale; prima a vizat proteinele receptoare pentru hormonii estrogenici și pentru progesteronă, iar a doua, proteina pS2. În capitolul de față se prezintă rezultatele privind proteinele receptoare Studiul prezent a avut ca scop identificarea expresiei ER și PR în tumori mamare și corelarea nivelelor de expresie a celor două tipuri de receptori cu o serie de parametri: vârstă, status menopauzal, volumul tumoral, statusul ganglionilor axilari, tipul histologic
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
progesteronă, iar a doua, proteina pS2. În capitolul de față se prezintă rezultatele privind proteinele receptoare Studiul prezent a avut ca scop identificarea expresiei ER și PR în tumori mamare și corelarea nivelelor de expresie a celor două tipuri de receptori cu o serie de parametri: vârstă, status menopauzal, volumul tumoral, statusul ganglionilor axilari, tipul histologic, gradul de diferențiere. Acest studiu s-a desfășurat pe două nivele pentru compararea rezultatelor cu două echipe de cercetare diferite: I. un lot de paciente
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
Se constată că pe măsură ce diferențierea este mai redusă, raportul dintre tumorile ER+ și cele ERse modifică în favoarea celor din urmă. Gradarea Fisher oferă aproximativ aceleași relații, 11 din tumorile de grad 2 și 21 din cele de grad 3 exprimă receptorul ER. Invazia spațiului vasculo-limfatic este un alt parametru ce prezintă relații cu ER. Receptorul este exprimat în 15 din cele 19 paciente la care ISVL este absentă. Această expresie este prezentă la 17 din cele 31 de cazuri la care
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
în 15 din cele 19 paciente la care ISVL este absentă. Această expresie este prezentă la 17 din cele 31 de cazuri la care spațiul vasculo-limfatic este invadat. Remarcăm că expresia ER scade odată cu prezența invaziei în spațiul vasculo-limfatic. Expresia receptorului pentru progesteron (PR). Lotul studiat a fost clasificat, în funcție de marcajul pentru PR în: 17 cazuri negative, 17 cazuri cu marcaj slab (+), 8 cazuri cu marcaj moderat (++), 8 cazuri cu marcaj intens (+++). Rezultate oarecum asemănătoare celor din studiul ER au derivat
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
Lotul studiat a fost clasificat, în funcție de marcajul pentru PR în: 17 cazuri negative, 17 cazuri cu marcaj slab (+), 8 cazuri cu marcaj moderat (++), 8 cazuri cu marcaj intens (+++). Rezultate oarecum asemănătoare celor din studiul ER au derivat din studiul expresiei receptorului pentru progesteron. Din numărul total de cazuri, 33 au exprimat PR, în timp ce 17 au fost PR-. Luând în discuție ca parametru statusul menopauzal, se constată că raportul dintre tumorile PR+ și cele PReste aproximativ egal în preși în postmenopauză (13
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
exprimat în totalitate acest tip de receptor. Carcinoamele ductale invazive au fost PR+ în 61,5% din cazuri, carcinoamele medulare nu au exprimat acest receptor, cele mixte exprimându-l în toate cazurile. În raport de exprimarea concomitentă a celor doi receptori, lotul studiat a prezentat următoarele fenotipuri maligne: 31 cazuri ER+PR+, 16 cazuri ER PR-, 2 cazuri ER-PR+ și 1 caz ER+PR-. Studiul expresiei PS2 Materiale și metodă Lotul de studiu a fost reprezentat de 25 de cazuri, diagnosticate
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
ductale in situ au exprimat în totalitate acest tip de receptor. Carcinoamele ductale invazive au fost PR+ în 66% din cazuri, celelate tipuri histologice fiind mai heterogene din acest punct de vedere. În raport de exprimarea concomitentă a celor doi receptori, lotul studiat a prezentat următoarele fenotipuri maligne: 20 cazuri ER+PR+, 10 cazuri ER PRși 1 caz ER+PR-. Nivelul II Material biologic În determinările privind proteinele receptoare pentru hormonii steroidici s-a folosit țesut tumoral de glandă mamară umană
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
acest punct de vedere. În raport de exprimarea concomitentă a celor doi receptori, lotul studiat a prezentat următoarele fenotipuri maligne: 20 cazuri ER+PR+, 10 cazuri ER PRși 1 caz ER+PR-. Nivelul II Material biologic În determinările privind proteinele receptoare pentru hormonii steroidici s-a folosit țesut tumoral de glandă mamară umană și țesut din uter de șobolan (Rattus norveticus). Fragmentele tumorale de țesut uman destinate dozărilor biochimice ale receptorilor au fost preluate de la Laboratorul de Anatomie Patologică din Institutul
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
utilizare. Determinările histologie au demonstrat că, în toate cazurile, tumorile au fost localizate la nivelul glandei mamare. Țesutul tumoral extras din uter de șobolan a provenit de la femele imature și a fost folosit pentru experimente de electroforeză. Pentru studiul proteinelor receptoare pentru hormonii estrogenici și progesteron s-a utilizat fracțiunea celulară "solubilă" (citosol) separată din țesutul investigat. Pentru un experiment, pentru a obține o cantitate suficientă de citosol pentru toate determinările (dozare proteine, dozare concentrație receptori, etc.) sunt necesare aproximativ 500
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
de electroforeză. Pentru studiul proteinelor receptoare pentru hormonii estrogenici și progesteron s-a utilizat fracțiunea celulară "solubilă" (citosol) separată din țesutul investigat. Pentru un experiment, pentru a obține o cantitate suficientă de citosol pentru toate determinările (dozare proteine, dozare concentrație receptori, etc.) sunt necesare aproximativ 500 mg de țesut tumoral de glandă mamară umană. Tehnica propriu-zisă pentru extracție va fi dezvoltată ulterior, fiind folosită și pentru dozarea proteinei pS2. Parametrii au următoarele semnificații fizice: T „mic” (ex. 3%) corespunde la un
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
de glandă mamară umană Determinările experimentale efectuate au avut ca obiectiv fundamental evaluarea hormono-dependenței unor tumori de glandă mamară, prin determinarea cantitativă a ER și PR, în scopul selecției pacienților pentru terapia endocrină Practic, s-au dozat proteinele cu funcție de receptori pentru hormonii steroidici de tip "sexual feminini" din fragmente tumorale de glandă mamară umană prin metoda cărbunelui acoperit cu dextran (DCC), utilizând hormoni (estrogen și progesteronă) marcați radioactiv ( 3H). O dozare completă necesită un timp de realizare de două zile
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]
-
cazurile 9 și 15, la care vârstele au fost de 40 respectiv, de 33 de ani, la care receptorii sunt practic, absenți. O altă pacientă de vârstă "mai tânără" 12, (vârstă: 42 de ani) înregistrează valori medii ale celor doi receptori, în timp ce la pacientele mai în vârstă (ex. cazurile 2, 6, ambele în vârstă de 47 de ani), se înregistrează valori ridicate ale receptorilor. Din tabel, se observă că dependențele sunt asemănătoare pentru cele două categorii de receptori: atât pentru ER
CANCERUL GLANDEI MAMARE BIOLOGIE MOLECULARĂ ŞI MARKERITUMORALI Volumul 2 by Emil ANTON, Nicolae IOANID () [Corola-publishinghouse/Science/422_a_768]