493 matches
-
cu apă distilată * Reactiv Fehling (I, II) Mod de lucru: Intr-o eprubetă se măsoară 10 cm3 soluție de amidon și se incubează minute într-o baie de apă la temperatura de 370C. Se adaugă 0,5 cm3 soluție de amilază, se omogenizează și se introduce din nou în baia de apă. Din amestecul de reacție se colectează la intervale de 2-3 minute, probe de câte 1 cm3 și se adaugă în fiecare probă 2 picături soluție de iod. Se obține
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
care s a atins punctul acromic. Se efectuează reacția Fehling pentru punerea în evidență a maltozei ca produs final al hidrolizei enzimatice a amidonului. Interpretarea rezultatelor Prezența maltozei (diglucid reducător) ca produs final al hidrolizei enzimatice a amidonului sub acțiunea amilazei - este indicată de apariția precipitatului roșu-cărămiziu de oxid cupros (Cu2O). Gama de culori constatată în decursul hidrolizei enzimatice denotă prezența dextrinelor care, în funcție de masa lor moleculară, se colorează diferit cu iodul. 6.8.2. Factorii care influențează activitatea enzimatică Enzimele
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
de temperatură: 370C (temperatura optimă) și 600 C. Se urmărește evoluția procesului de hidroliză enzimatică prin efectuarea reacției de culoare cu iodul și a reacției Fehling. Reactivi * Soluție de amidon 1 % * Soluție de iod în iodură de potasiu 0,3 % *Amilază salivară: (diluată în raport de 1/10 cu apă distilată) * Reactiv Fehling (I, II) Mod de lucru Tehnica pentru evidențierea activității amilazei salivare la temperatura de 370C se bazează pe procedeul menționat anterior. Pentru evidențierea efectului temperaturii de 600C asupra
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
și a reacției Fehling. Reactivi * Soluție de amidon 1 % * Soluție de iod în iodură de potasiu 0,3 % *Amilază salivară: (diluată în raport de 1/10 cu apă distilată) * Reactiv Fehling (I, II) Mod de lucru Tehnica pentru evidențierea activității amilazei salivare la temperatura de 370C se bazează pe procedeul menționat anterior. Pentru evidențierea efectului temperaturii de 600C asupra activității enzimatice se procedează identic, dar în condiții de inactivare termică a enzimei.Soluția de amilază salivară conținută într-o eprubetă se
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
de lucru Tehnica pentru evidențierea activității amilazei salivare la temperatura de 370C se bazează pe procedeul menționat anterior. Pentru evidențierea efectului temperaturii de 600C asupra activității enzimatice se procedează identic, dar în condiții de inactivare termică a enzimei.Soluția de amilază salivară conținută într-o eprubetă se menține câteva minute pe o baie de apă la temperatura de 600C înainte de a fi pusă în contact cu substratul de reacție, și anume, cu soluția de amidon. Se efectuează reacția cu iodul și
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
pe o baie de apă la temperatura de 600C înainte de a fi pusă în contact cu substratul de reacție, și anume, cu soluția de amidon. Se efectuează reacția cu iodul și reacția Fehling. Rezultate și interpretare La temperatură ridicată (600C), amilaza suferă un proces de denaturare termică însoțit de inactivarea sa. Ca urmare, enzima pierde proprietatea catalitică de a hidroliza amidonul. Amidonul rămas nehidrolizat reacționează cu iodul, obținîndu-se culoarea albastră caracteristică. Reacția Fehling este de asemenea, negativă, deoarece amilaza fiind denaturată
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
ridicată (600C), amilaza suferă un proces de denaturare termică însoțit de inactivarea sa. Ca urmare, enzima pierde proprietatea catalitică de a hidroliza amidonul. Amidonul rămas nehidrolizat reacționează cu iodul, obținîndu-se culoarea albastră caracteristică. Reacția Fehling este de asemenea, negativă, deoarece amilaza fiind denaturată termic nu produce hidroliza amidonului cu formare de maltoză care să reducă reactivul Fehling. In consecință, nu se constată apariția precipitatului roșu-cărămiziu de Cu2O. 6.8.2.2. Influența pH-ului Enzimele își manifestă activitatea lor catalitică într-
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
enzimatici. Modificări mai mult sau mai puțin accentuate în raport cu valoarea pH-ului optim determină, de regulă, o diminuare sau chiar o inhibare a activității enzimatice. Principiul metodei Se determină la temperatura optimă (370C) și la valori diferite de pH activitatea amilazei salivare, prin măsurarea timpului în care substratul (amidonul) este hidrolizat până la produși ce nu se mai colorează cu iodul (punctul acromic). Se compară activitatea enzimatică cu valorile de pH corespunzătoare și se stabilește pH-ul optim de activitate al amilazei
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
amilazei salivare, prin măsurarea timpului în care substratul (amidonul) este hidrolizat până la produși ce nu se mai colorează cu iodul (punctul acromic). Se compară activitatea enzimatică cu valorile de pH corespunzătoare și se stabilește pH-ul optim de activitate al amilazei salivare. Reactivi: * Soluție de amidon 1 % (substrat). * Soluție de iod în KI 0,3 %. *Amilază salivară (diluată 1/10). * Soluție de KH2PO4 6,6 · 10-2 m (9,080 g/l). * Soluție de 6,6 · 10-2 m (9,4790 g/l
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
se mai colorează cu iodul (punctul acromic). Se compară activitatea enzimatică cu valorile de pH corespunzătoare și se stabilește pH-ul optim de activitate al amilazei salivare. Reactivi: * Soluție de amidon 1 % (substrat). * Soluție de iod în KI 0,3 %. *Amilază salivară (diluată 1/10). * Soluție de KH2PO4 6,6 · 10-2 m (9,080 g/l). * Soluție de 6,6 · 10-2 m (9,4790 g/l). Din ultimele două soluții se prepară: * Soluție tampon fosfați de pH=5,2 (98,0
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
pH=8,2 Amidon Tampon fosfați pH=5,2 Tampon fosfați pH=6,8 Tampon fosfați pH=8,2 5,0 2,0 5,0 2,0 5,0 2,0 Se incubează 5 minute la 370C Ulterior se adaugă: Amilază salivară 0,5 0,5 0,5 Eprubetele conținând probele respective se mențin pe baie de apă la 370C. La intervale de timp diferite (3, 5, 7, 15, 20 de minute) se colectează probe de câte 1 cm3. Se adaugă
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
la pH=6,8, punctul acromic atingându-se în aproximativ 10 minute. La valorile de pH 5,2 și 8,2 viteza de reacție este redusă, punctul acromic atingându-se în aproximativ 20 de minute. In concluzie, activitatea optimă a amilazei salivare este la pH = 6,8. 6.8.2.3. Influența efectorilor enzimatici Efectorii enzimatici sunt substanțe de natură chimică diferită care modifică activitatea enzimatică, respectiv viteza reacțiilor enzimatice. In funcție de acțiunea pe care o exercită asupra enzimelor, efectorii pot
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
este influențată de prezența anumitor ioni în mediul de reacție. Astfel, α-amilaza este activată de anionul Clși este inhibată de prezența unor cationi ca Ag+, Pb2+, Cu2+. 6.8.2.3.1. Influența activatorilor enzimatici Principiul metodei Se determină activitatea amilazei salivare în prezența și în absența ionului de Cl-. Activitatea enzimei este invers proporțională cu timpul în care se atinge nivelul acromic. Reactivi: * Soluție de amidon 1% (substrat). * Soluție tampon fosfați de pH=6,8. * Soluție de NaCl 1 %. * Soluție
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
ionului de Cl-. Activitatea enzimei este invers proporțională cu timpul în care se atinge nivelul acromic. Reactivi: * Soluție de amidon 1% (substrat). * Soluție tampon fosfați de pH=6,8. * Soluție de NaCl 1 %. * Soluție de iod în KI 0,3 %. *Amilaza salivară (diluată 1 /10). Mod de lucru Se realizează următoarea schemă experimentală: Soluții Probă (cm3) Martor (cm3) Amidon Tampon fosfați pH=6,8 NaCl Apă distilată Se incubează 5 minute la 370C. Ulterior se adaugă: Amilază salivară 0,5 0
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
în KI 0,3 %. *Amilaza salivară (diluată 1 /10). Mod de lucru Se realizează următoarea schemă experimentală: Soluții Probă (cm3) Martor (cm3) Amidon Tampon fosfați pH=6,8 NaCl Apă distilată Se incubează 5 minute la 370C. Ulterior se adaugă: Amilază salivară 0,5 0,5 Eprubetele se mențin pe baie de apă la 370C. Se efectuează reacția cu iodul după procedeul descris anterior. Interpretarea rezultatelor In proba care conține ioni de clor (NaCl) se constată că hidroliza enzimatică a amidonului
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
0,5 Eprubetele se mențin pe baie de apă la 370C. Se efectuează reacția cu iodul după procedeul descris anterior. Interpretarea rezultatelor In proba care conține ioni de clor (NaCl) se constată că hidroliza enzimatică a amidonului decurge rapid, α amilaza manifestând o activitate maximă în prezența acestor ioni (Cl-). In concluzie, ionii de clor se comportă ca activatori ai amilazei salivare. 6.8.2.3.2. Influența inhibitorilor enzimatici Principiul metodei Se determină activitatea amilazei salivare în prezența și în
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
Interpretarea rezultatelor In proba care conține ioni de clor (NaCl) se constată că hidroliza enzimatică a amidonului decurge rapid, α amilaza manifestând o activitate maximă în prezența acestor ioni (Cl-). In concluzie, ionii de clor se comportă ca activatori ai amilazei salivare. 6.8.2.3.2. Influența inhibitorilor enzimatici Principiul metodei Se determină activitatea amilazei salivare în prezența și în absența cationului Pb2+; se măsoară timpul necesar atingerii punctului acromic. Reactivi * Soluție de amidon 1% (substrat). * Soluție tampon fosfați de
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
a amidonului decurge rapid, α amilaza manifestând o activitate maximă în prezența acestor ioni (Cl-). In concluzie, ionii de clor se comportă ca activatori ai amilazei salivare. 6.8.2.3.2. Influența inhibitorilor enzimatici Principiul metodei Se determină activitatea amilazei salivare în prezența și în absența cationului Pb2+; se măsoară timpul necesar atingerii punctului acromic. Reactivi * Soluție de amidon 1% (substrat). * Soluție tampon fosfați de pH=6,8. * Soluție de Pb(NO3)2 1 · 10-3 m * Soluție de iod în
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
și în absența cationului Pb2+; se măsoară timpul necesar atingerii punctului acromic. Reactivi * Soluție de amidon 1% (substrat). * Soluție tampon fosfați de pH=6,8. * Soluție de Pb(NO3)2 1 · 10-3 m * Soluție de iod în KI 0,3 %. *Amilaza salivară (diluată 1 /10). Mod de lucru Se realizează aceeși schemă experimentală ca în cazul determinării influenței activatorilor enzimatici, cu deosebire că volumul din soluția de clorură de sodiu se substituie cu același volum dintr-o soluție de azotat de
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
volum dintr-o soluție de azotat de plumb. Interpretarea rezultatelor In proba care conține ionii Pb2+ se constată că viteza de hidroliză enzimatică a amidonului este mult diminuată în comparație cu proba martor. In concluzie, ionii Pb2+ se comportă ca inhibitori ai amilazei salivare, determinând scăderea activității enzimatice (sau chiar inhibarea totală a acesteia la concentrații mai mari de Pb2+). 6.9. TESTE DE AUTOEVALUARE 1. Enzimele sunt: a). lipide; b). glucide; c). protide; d). polinucleotide. 3. Viteza de reacție este: a). proporțională
Biochimie by Lucia Carmen Trincă () [Corola-publishinghouse/Science/532_a_1322]
-
reprezentate de acțiunea enzimelor din salivă. Saliva este produsă de un grup heterogen de glande: glande salivare principale (parotide, sublinguale și submaxilare) și accesorii, diseminate în cavitatea bucală. Saliva are următoarele roluri. a. Digestiv: prin enzimele pe care le conține (amilaza și lipaza salivară); amilaza salivară degradează polizaharidele, iar lipaza salivară degradează trigliceridele (mai ales la nou-născut). b. Gustativ: apa din compoziția salivei dizolvă substanțele sapide favorizând contactul acestora cu mugurii gustativi. c. Protector: saliva realizează lubrefierea și înmuierea alimentelor protejând
Fiziologie umană: funcțiile vegetative by Ionela Lăcrămioara Serban, Walther Bild, Dragomir Nicolae Serban () [Corola-publishinghouse/Science/1306_a_2281]
-
din salivă. Saliva este produsă de un grup heterogen de glande: glande salivare principale (parotide, sublinguale și submaxilare) și accesorii, diseminate în cavitatea bucală. Saliva are următoarele roluri. a. Digestiv: prin enzimele pe care le conține (amilaza și lipaza salivară); amilaza salivară degradează polizaharidele, iar lipaza salivară degradează trigliceridele (mai ales la nou-născut). b. Gustativ: apa din compoziția salivei dizolvă substanțele sapide favorizând contactul acestora cu mugurii gustativi. c. Protector: saliva realizează lubrefierea și înmuierea alimentelor protejând mucoasa bucală și esofagul
Fiziologie umană: funcțiile vegetative by Ionela Lăcrămioara Serban, Walther Bild, Dragomir Nicolae Serban () [Corola-publishinghouse/Science/1306_a_2281]
-
reziduu uscat, format din 0,2% substanțe anorganice și 0,4% substanțe organice. Substanțele anorganice sunt reprezentate de cloruri, bicarbonați și fosfați de sodiu, potasiu sau calciu. In salivă sunt prezente următoarele substanțe organice. a. Enzime cu rol digestiv: ptialina (amilaza salivară) acționează asupra amidonului fiert sau copt, pe care-l descompune în maltoză, maltotrioză și dextrine; își continuă acțiunea în stomac până când bolul alimentar devine acid (pH < 4,5). lipaza salivară (secretată de glandele Ebner de pe fața dorsală a limbii
Fiziologie umană: funcțiile vegetative by Ionela Lăcrămioara Serban, Walther Bild, Dragomir Nicolae Serban () [Corola-publishinghouse/Science/1306_a_2281]
-
de Cl-. Ionul bicarbonic este secretat activ în porțiunea inițială a ductului salivar, la schimb cu Cl-. Ca urmare a permeabilității reduse a pereților ductelor salivare pentru apă, pe măsură ce saliva primară le străbate devine hipotonă (fig. 3). Mecanismul secretor al amilazei salivare La nivelul polului apical, celulele seroase acinare prezintă granule de zimogen care conțin amilaza salivară. Formarea granulelor de zimogen parcurge mai multe etape: enzima este sintetizată la nivelul ribozomilor reticulului endoplasmic și intră în cisternele acestuia; veziculele cu enzimă
Fiziologie umană: funcțiile vegetative by Ionela Lăcrămioara Serban, Walther Bild, Dragomir Nicolae Serban () [Corola-publishinghouse/Science/1306_a_2281]
-
cu Cl-. Ca urmare a permeabilității reduse a pereților ductelor salivare pentru apă, pe măsură ce saliva primară le străbate devine hipotonă (fig. 3). Mecanismul secretor al amilazei salivare La nivelul polului apical, celulele seroase acinare prezintă granule de zimogen care conțin amilaza salivară. Formarea granulelor de zimogen parcurge mai multe etape: enzima este sintetizată la nivelul ribozomilor reticulului endoplasmic și intră în cisternele acestuia; veziculele cu enzimă sintetizată se mișcă către aparatul Golgi unde enzima este încapsulată în vacuole; vacuolele sunt dispuse
Fiziologie umană: funcțiile vegetative by Ionela Lăcrămioara Serban, Walther Bild, Dragomir Nicolae Serban () [Corola-publishinghouse/Science/1306_a_2281]