942 matches
-
cele indicate anterior (pct. 5.3.3). Se îndepărtează cu grijă excesul de tampon IF. 5.3.7. Se pipetează 5-10 f2μl tampon glicerol fosfat 0,1 M (apendicele 4) sau o altă soluție antidecolorare de montare comercială în fiecare godeu și se acoperă cu o lamelă. 5.4. Citirea testului de imunofluorescență 5.4.1. Se examinează lamele-test la un microscop cu sursă de lumină epifluorescentă și cu filtre adaptate pentru a lucra cu izotiocianat de fluoresceină, cu ulei de
EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
5.4.1. Se examinează lamele-test la un microscop cu sursă de lumină epifluorescentă și cu filtre adaptate pentru a lucra cu izotiocianat de fluoresceină, cu ulei de imersie sau în apă, la o mărire de 500-1.000. Se examinează godeurile pe două diametre în unghi drept și de-a lungul perimetrului. Pentru probele fără celule sau cu un număr redus de celule se examinează cel puțin 40 câmpuri microscopice. Se verifică mai întâi lama de control pozitiv. Celulele trebuie să
EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
la titrul de anticorpi sau la diluția de lucru determinată. Testul IF (pct. 5) trebuie repetat în cazul în care apare o colorație anormală. 5.4.2. Se caută prezența celulelor intens fluorescente cu morfologie caracteristică bacteriei Ralstonia solanacearum în godeurile lamelor-test (vezi website-ul http://forum.europa.eu.int/ Public/irc/sanco/Home/main). Intensitatea fluorescenței trebuie să fie echivalentă cu cea a tulpinii de control pozitiv la aceeași diluție de anticorpi. Celulele cu colorație incompletă sau cu fluorescență slabă nu
EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
În cazul în care se suspectează o contaminare, testul trebuie repetat. Acest lucru se poate întâmpla atunci când în toate lamele unei serii de analize se observă celule pozitive din cauza unei contaminări a tamponului sau atunci când celulele pozitive se observă în afara godeurilor. 5.4.3. Există un anumit număr de probleme care afectează specificitatea testului de imunofluorescență. La nivelul conurilor de țesut vascular și în bucățile de tulpini pot apărea populații de celule fluorescente atipice din punct de vedere morfologic, precum și bacterii
EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
1X (a se vedea apendicele 7). Cutia se preincubează timp de cel puțin 10 minute în incubatorul de hibridizare la o temperatură de 45°C. 7.2.3. Se pipetează 10 f2μl de soluție de hibridizare (apendicele 7) în 8 godeuri (godeuri 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 și 10; vezi figura 7.1) ale fiecărei lame, lăsând goale cele două godeuri din mijloc (3 și 8). 7.2.4. Se acoperă cu lamele (24 x 24 mm) primul și
EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
a se vedea apendicele 7). Cutia se preincubează timp de cel puțin 10 minute în incubatorul de hibridizare la o temperatură de 45°C. 7.2.3. Se pipetează 10 f2μl de soluție de hibridizare (apendicele 7) în 8 godeuri (godeuri 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 și 10; vezi figura 7.1) ale fiecărei lame, lăsând goale cele două godeuri din mijloc (3 și 8). 7.2.4. Se acoperă cu lamele (24 x 24 mm) primul și ultimele
EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
de 45°C. 7.2.3. Se pipetează 10 f2μl de soluție de hibridizare (apendicele 7) în 8 godeuri (godeuri 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 și 10; vezi figura 7.1) ale fiecărei lame, lăsând goale cele două godeuri din mijloc (3 și 8). 7.2.4. Se acoperă cu lamele (24 x 24 mm) primul și ultimele 4 godeuri, având grijă să nu prindă aer sub ele. Lamele se introduc în camera umedă încălzită în prealabil și se
EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
2, 4, 5, 6, 7, 9 și 10; vezi figura 7.1) ale fiecărei lame, lăsând goale cele două godeuri din mijloc (3 și 8). 7.2.4. Se acoperă cu lamele (24 x 24 mm) primul și ultimele 4 godeuri, având grijă să nu prindă aer sub ele. Lamele se introduc în camera umedă încălzită în prealabil și se lasă timp de 5 ore în incubator la 45°C la întuneric, pentru hibridizare. 7.2.5. Se pregătesc 3 recipiente
EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
minute. 7.2.9. Lamele se introduc scurt într-o baie de apă Milli Q și se așază pe o hârtie de filtru. Se îndepărtează umiditatea în exces tamponând ușor suprafața umedă cu hârtie de filtru. Se pipetează în fiecare godeu 5-10 f2μl de soluție antidecolorare (de exemplu, Vectashield produs de Vecta Laboratories CA, USA, sau altă soluție echivalentă) și se acoperă întreaga suprafață a lamei cu o lamelă (24 x 60 mm). 7.3. Citirea testului FISH 7.3.1
EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
colorate în roșu fluorescent. Se compară morfologia celulelor din probe cu cea a celulelor din controlul pozitiv. Celulele trebuie să fie colorate complet și intens fluorescente. Testul FISH (pct. 7) trebuie repetat în cazul în care apare o colorație anormală. Godeurile se examinează de-a lungul a două diametre perpendiculare și în jurul perimetrului. Pentru probele care nu conțin celule sau conțin un număr mic de celule, se examinează cel puțin 40 de câmpuri microscopice. 7.3.2. Se observă prezența celulelor
EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
considerare. 7.3.3. La cea mai mică suspiciune de contaminare, testul trebuie repetat. Aceasta se poate întâmpla atunci când în toate lamele unei serii de analize se observă celule pozitive din cauza contaminării tamponului sau atunci când celulele pozitive se observă în afara godeurilor. 7.3.4. Există un anumit număr de probleme inerente care afectează specificitatea testului FISH. La nivelul conurilor de țesut vascular și tulpinii pot apare populații de celule fluorescente cu morfologie atipică și populații de bacterii saprofite care dau reacții
EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
C pe baie de apă sau într-un bloc de încălzire.) ... (2) Se adaugă un volum egal de tampon 2X (apendicele 4) și se omogenizează prin vortexare. (3) Se pipetează alicote de 100 f2μl de extract în cel puțin două godeuri ale plăcii de microtitrare (de exemplu, Nunc-Polysorp sau echivalent) și se incubează o oră la 37°C sau peste noapte la 4°C. ... (4) Se îndepărtează extractele din godeuri. Se spală godeurile de 3 ori cu PBS-Tween (apendicele 4), lăsând
EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
pipetează alicote de 100 f2μl de extract în cel puțin două godeuri ale plăcii de microtitrare (de exemplu, Nunc-Polysorp sau echivalent) și se incubează o oră la 37°C sau peste noapte la 4°C. ... (4) Se îndepărtează extractele din godeuri. Se spală godeurile de 3 ori cu PBS-Tween (apendicele 4), lăsând ultima soluție de spălare în godeuri cel puțin 5 minute. (5) Se prepară diluția corespunzătoare a antiserului anti-Ralstonia solanacearum în tampon de saturație (apendicele 4). Pentru anticorpii comerciali validați
EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
100 f2μl de extract în cel puțin două godeuri ale plăcii de microtitrare (de exemplu, Nunc-Polysorp sau echivalent) și se incubează o oră la 37°C sau peste noapte la 4°C. ... (4) Se îndepărtează extractele din godeuri. Se spală godeurile de 3 ori cu PBS-Tween (apendicele 4), lăsând ultima soluție de spălare în godeuri cel puțin 5 minute. (5) Se prepară diluția corespunzătoare a antiserului anti-Ralstonia solanacearum în tampon de saturație (apendicele 4). Pentru anticorpii comerciali validați, se folosesc diluțiile
EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
exemplu, Nunc-Polysorp sau echivalent) și se incubează o oră la 37°C sau peste noapte la 4°C. ... (4) Se îndepărtează extractele din godeuri. Se spală godeurile de 3 ori cu PBS-Tween (apendicele 4), lăsând ultima soluție de spălare în godeuri cel puțin 5 minute. (5) Se prepară diluția corespunzătoare a antiserului anti-Ralstonia solanacearum în tampon de saturație (apendicele 4). Pentru anticorpii comerciali validați, se folosesc diluțiile recomandate (de obicei, de două ori mai concentrate decât titrul). ... (6) Se pipetează 100
EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
minute. (5) Se prepară diluția corespunzătoare a antiserului anti-Ralstonia solanacearum în tampon de saturație (apendicele 4). Pentru anticorpii comerciali validați, se folosesc diluțiile recomandate (de obicei, de două ori mai concentrate decât titrul). ... (6) Se pipetează 100 f2μl în fiecare godeu și se incubează o oră la 37°C. ... (7) Se îndepărtează soluția de anticorpi din godeuri și se spală în conformitate cu cele indicate anterior [pct. (4)]. ... (8) Se prepară diluția corespunzătoare de conjugat secundar de anticorpi și de fosfatază alcalină în
EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
Pentru anticorpii comerciali validați, se folosesc diluțiile recomandate (de obicei, de două ori mai concentrate decât titrul). ... (6) Se pipetează 100 f2μl în fiecare godeu și se incubează o oră la 37°C. ... (7) Se îndepărtează soluția de anticorpi din godeuri și se spală în conformitate cu cele indicate anterior [pct. (4)]. ... (8) Se prepară diluția corespunzătoare de conjugat secundar de anticorpi și de fosfatază alcalină în tampon de saturație Se pipetează 100 f2μl în fiecare godeu și se incubează o oră la
EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
Se îndepărtează soluția de anticorpi din godeuri și se spală în conformitate cu cele indicate anterior [pct. (4)]. ... (8) Se prepară diluția corespunzătoare de conjugat secundar de anticorpi și de fosfatază alcalină în tampon de saturație Se pipetează 100 f2μl în fiecare godeu și se incubează o oră la 37°C. ... (9) Se îndepărtează conjugatul de anticorpi din godeuri și se spală în conformitate cu cele indicate anterior [pct. (4)]. ... (10) Se pipetează 100 f2μl de soluție de substrat de fosfatază alcalină (apendicele 4) în
EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
8) Se prepară diluția corespunzătoare de conjugat secundar de anticorpi și de fosfatază alcalină în tampon de saturație Se pipetează 100 f2μl în fiecare godeu și se incubează o oră la 37°C. ... (9) Se îndepărtează conjugatul de anticorpi din godeuri și se spală în conformitate cu cele indicate anterior [pct. (4)]. ... (10) Se pipetează 100 f2μl de soluție de substrat de fosfatază alcalină (apendicele 4) în fiecare godeu. Se incubează în întuneric la temperatura ambiantă și se măsoară absorbanța la 405 nm
EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
se incubează o oră la 37°C. ... (9) Se îndepărtează conjugatul de anticorpi din godeuri și se spală în conformitate cu cele indicate anterior [pct. (4)]. ... (10) Se pipetează 100 f2μl de soluție de substrat de fosfatază alcalină (apendicele 4) în fiecare godeu. Se incubează în întuneric la temperatura ambiantă și se măsoară absorbanța la 405 nm la intervale regulate în termen de 90 de minute. ... b) DAS-ELISA ... (1) Se prepară diluția corespunzătoare de imunoglobuline policlonale anti-Ralstonia solanacearum în tampon concentrat cu pH
EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
absorbanța la 405 nm la intervale regulate în termen de 90 de minute. ... b) DAS-ELISA ... (1) Se prepară diluția corespunzătoare de imunoglobuline policlonale anti-Ralstonia solanacearum în tampon concentrat cu pH 9,6 (apendicele 4). Se adaugă 200 f2μl în fiecare godeu. Se incubează timp de 4-5 ore la 37°C sau timp de 16 ore la 4°C. ... (2) Se spală godeurile de 3 ori cu PBS-Tween (apendicele 4). ... Se adaugă 190 f2μl de extract de probă în cel puțin două
EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
imunoglobuline policlonale anti-Ralstonia solanacearum în tampon concentrat cu pH 9,6 (apendicele 4). Se adaugă 200 f2μl în fiecare godeu. Se incubează timp de 4-5 ore la 37°C sau timp de 16 ore la 4°C. ... (2) Se spală godeurile de 3 ori cu PBS-Tween (apendicele 4). ... Se adaugă 190 f2μl de extract de probă în cel puțin două godeuri. De asemenea, se adaugă controlul pozitiv și negativ în câte două godeuri pe fiecare placă. Se incubează timp de 16
EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
Se incubează timp de 4-5 ore la 37°C sau timp de 16 ore la 4°C. ... (2) Se spală godeurile de 3 ori cu PBS-Tween (apendicele 4). ... Se adaugă 190 f2μl de extract de probă în cel puțin două godeuri. De asemenea, se adaugă controlul pozitiv și negativ în câte două godeuri pe fiecare placă. Se incubează timp de 16 ore la 4°C. (3) Se spală godeurile de 3 ori cu PBS-Tween (apendicele 4). ... (4) Se prepară o diluție
EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
16 ore la 4°C. ... (2) Se spală godeurile de 3 ori cu PBS-Tween (apendicele 4). ... Se adaugă 190 f2μl de extract de probă în cel puțin două godeuri. De asemenea, se adaugă controlul pozitiv și negativ în câte două godeuri pe fiecare placă. Se incubează timp de 16 ore la 4°C. (3) Se spală godeurile de 3 ori cu PBS-Tween (apendicele 4). ... (4) Se prepară o diluție corespunzătoare de anticorpi monoclonali specifici Ralstonia solanacearum în PBS (apendicele 4) conținând
EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]
-
Se adaugă 190 f2μl de extract de probă în cel puțin două godeuri. De asemenea, se adaugă controlul pozitiv și negativ în câte două godeuri pe fiecare placă. Se incubează timp de 16 ore la 4°C. (3) Se spală godeurile de 3 ori cu PBS-Tween (apendicele 4). ... (4) Se prepară o diluție corespunzătoare de anticorpi monoclonali specifici Ralstonia solanacearum în PBS (apendicele 4) conținând, de asemenea, 0,5 % seralbumină bovină (BSA) și se pipetează 190 f2μl în fiecare godeu. Se
EUR-Lex () [Corola-website/Law/189771_a_191100]