6,328 matches
-
agitator rotativ (250 turații/minut) într-un tampon de extracție de 60-150 ml (apendicele 4) timp de două ore cel mult. După caz, pentru a favoriza dispersia, se adaugă 0,02 % de Tween 20 steril și 10-20 g de pietriș steril. 2.1.3. Suspensia se păstrează, în timpul testului, la 4 °C. 2.2. Teste A se vedea diagrama și descrierea testelor în apendicele corespunzătoare. Secțiunea VI Protocoale optimizate pentru detectarea și identificarea R. Solanacearum A. DIAGNOSTIC ȘI TESTE DE DETECTARE
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
Coloniile prezumtive de R. solanacearum se purifică după însămânțare sau diluare și însămânțare într-un mediu nutritiv general pentru a obține colonii izolate (a se vedea apendicele 2). 4.1.4. Culturile pot fi păstrate pe termen scurt în apă sterilă (pH 6-8, fără clor) la temperatura ambiantă și în întuneric sau pe termen lung într-un mediu crioprotector corespunzător între - 68 și - 86 °C sau liofilizate. 4.1.5. Se identifică culturile prezumtive (a se vedea secțiunea VI.B) și
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
C, se păstrează extractul concentrat și se îndepărtează etanolul. (14) Extractul concentrat se lasă să se usuce în aer liber sau într-un SpeedVac ADN. (15) Se face o nouă suspensie de extract concentrat în 100 μl de apă ultrapură sterilă și se lasă la temperatura ambiantă timp de cel puțin douăzeci de minute. (16) Se depozitează la - 20 °C până când extractul este necesar pentru PCR. (17) Se izolează orice precipitat alb prin centrifugare și se utilizează pentru PCR 5 μl
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
care este posibil, se recomandă utilizarea unui protocol PCR compus care include, de asemenea, un control intern al PCR. 6.2.3. Se adaugă 2-5 μl de extract de ADN pe 25 μl de mediu reactiv PCR în tuburi PCR sterile în conformitate cu protocoalele PCR (a se vedea apendicele 6). 6.2.4. Se include un eșantion de control negativ conținând numai un amestec reactiv pentru PCR și se adaugă la aceeași sursă de apă ultrapură ca și cea utilizată în amestecul
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
Se repartizează eșantionul între plantele test. 9.2.2. Inoculare prin incizie Se ține planta între două degete și se pipetează pe tulpină, între cotiledoane și prima frunză, o picătură (circa 5-10 μl) de extract concentrat suspendat. Cu ajutorul unui scalpel steril, plecând de la picătura de extract concentrat, se face o incizie diagonală cu o lungime de 1,0 cm și o adâncime egală aproximativ cu două treimi din grosimea tulpinii. Se închide incizia aplicând vaselină sterilă cu ajutorul unei seringi. 9.3
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
concentrat suspendat. Cu ajutorul unui scalpel steril, plecând de la picătura de extract concentrat, se face o incizie diagonală cu o lungime de 1,0 cm și o adâncime egală aproximativ cu două treimi din grosimea tulpinii. Se închide incizia aplicând vaselină sterilă cu ajutorul unei seringi. 9.3. Prin aceeași tehnică, se inoculează cinci plantule cu o suspensie apoasă de 105-106 celule pe ml dintr-o sușă virulentă de patruzeci și opt de ore din biovar 2 de R. solanacearum drept control pozitiv
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
solanacearum. 3.3. Un test ELISA este pozitiv atunci când valoarea ELISA a culturii este egală cel puțin cu jumătatea celei obținute pentru controlul pozitiv. 4. Testul PCR 4.1. Se prepară o suspensie de circa 106 celule/ml în apă sterilă pentru biologie moleculară. 4.2. Se încălzesc 100 μl din suspensie în tuburi închise într-un bloc de încălzire sau în baie de abur fierbinte la 100 °C timp de patru minute. Eșantioanele pot fi păstrate apoi la o temperatură
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
2. Testul poate fi realizat inoculând prin injectarea profundă a mediilor cu culturi pure de izolat de R. solanacearum și prin incubare la 28 °C. În cazul în care mediile sunt repartizate pe plăci de cultură cu 96 de godeuri sterile (200 μl/godeu), se poate observa o modificare a culorii, în 72 ore, din verde oliv în galben, ceea ce indică un rezultat pozitiv al testului. Biovar 1 2 3 4 5 Utilizarea: Maltozei - + + - + Lactozei - + + - + D (+) Celobiozei - + + - + Manitolului - - + + + Sorbitolului - - + + - Dulcitolului - - + + - Teste
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
simptomelor de ofilire și/sau epinastie, cloroză și de pipernicire. (5) Se izolează plantele simptomatice îndepărtând o secțiune de țesut din tulpină la 2 cm deasupra punctului inoculării. Se mărunțește și se suspendă într-un volum mic de apă distilată sterilă sau cu un tampon fosfat de 50 mM (apendicele 4). Se izolează suspensia prin diluare într-un mediu adecvat, de preferință mediu selectiv (apendicele 2), se incubează timp de 48-72 ore la 28 °C și se observă formarea coloniilor tipice
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
de tuberculi prelevați de la o varietate de cartof cu coaja albă cunoscută ca fiind neinfectată cu R. solanacearum. Taloanele se tratează după metoda obișnuită și se face o nouă suspensie de extract concentrat în 10 ml. Se pregătesc zece microfiole sterile de 1,5 ml cu 900 μl de extract concentrat resuspendat. Se introduc 100 μl din suspensia de R. solanacearum în prima microfiolă. Se omogenizează în agitator. Se stabilesc niveluri decimale de contaminare continuând diluarea în următoarele cinci microfiole. Cele
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
contaminare continuând diluarea în următoarele cinci microfiole. Cele șase microfiole contaminate vor fi utilizate drept control pozitiv. Cele patru microfiole necontaminate se vor folosi în calitate de control negativ. Se etichetează microfiolele în consecință. Se prepară alicote de 100 μl în microfiole sterile de 1,5 ml pentru a obține nouă replici din fiecare eșantion de control. Se păstrează între - 16 și - 24 °C până la utilizare. Prezența și nivelul R. solanacearum în eșantioanele de control trebuie confirmate în primul rând prin IF. Pentru
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
CTA CCT GCC-3΄ Primer antisens Y-2 5΄-CCC ACT GCT GCC TCC CGT AGG AGT-3΄ Dimensiunea prevăzută a amplimerului matricei ADN de R. solanacearum = 288 bp 1.2. Amestecul reactiv pentru PCR Reactiv Cantitate per reacție Concentrație finală Apă ultrapură sterilă 17,65 μl Tampon PCR x 101 (15 mM MgCl2) 2,5 μl 1 x (1,5 mM MgCl2) Amestec dNTP (20 mM) 0,25 μl 0,2 mM Primer OLI-1 (20 μΜ) 1,25 μl 1 μΜ Primer Y-2
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
gcg ggg g-3΄ Primer antisens Ps-2 5΄-ggg gat ttc aca tcg gtc ttg ca-3΄ Dimensiunea prevăzută a amplimerului matricei ADN de R. solanacearum = 553 bp. 2.2. Amestecul reactiv pentru PCR Reactiv Cantitate per reacție Concentrație finală Apă ultrapură sterilă 16,025 μl Tampon PCR x 101 2,5 μl 1 x (1,5 mM MgCl2) BSA (fracțiune V) (10 %) 0,25 μl 0,1 % Amestec dNTP (20 mM) 0,125 μl 0,1 mM Primer Ps-1 (10 μΜ) 0
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
de R. solanacearum = 718 bp (în prezența primerului Rs) Dimensiunea prevăzută a amplimerului controlului intern al PCR de 18S ARNr = 310 bp (în prezența primerului Ns) 3.2. Amestecul reactiv pentru PCR Reactiv Cantitate per reacție Concentrație finală Apă ultrapură sterilă 12,625 μl Tampon PCR x 101 (1,5 mM MgCl2) 2,5 μl 1 x (1,5 mM MgCl2) BSA (fracțiune V) (10 %) 0,25 μl 0,1 % Amestec dNTP (20 mM) 0,125 μl 0,1 mM Primer
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
CTC-3΄ Dimensiunea prevăzută a amplimerului matricei ADN de R. solanacearum: cu Rs-1-F/Rs-1-R = 718 bp cu Rs-1-F/Rs-3-R = 716 bp. 4.2. Amestecul reactiv pentru PCR (a) PCR specific biovarului 1/2 Reactiv Cantitate per reacție Concentrație finală Apă ultrapură sterilă 12,925 μl Tampon PCR x 101 2,5 μl 1 x (1,5 mM MgCl2) BSA (fracțiune V) (10 %) 0,25 μl 0,1 % Amestec dNTP (20 mM) 0,125 μl 0,1 mM Primer Rs-1-F (10 μΜ) 2
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
1 U Volumul eșantionului 5,0 μl Volum total 25,0 μl 1 Metodele au fost validate prin polimerază Taq PerkinElmer (AmpliTaq) și Gibco BRL. (b) PCR specific biovarului 3/4/5 Reactiv Cantitate per reacție Concentrație finală Apă ultrapură sterilă 14,925 μl Tampon PCR x 101 2,5 μl 1 x (1,5 mM MgCl2) BSA (fracțiune V) (10 %) 0,25 μl 0,1 % Amestec dNTP (20 mM) 0,125 μl 0,1 mM Primer Rs-1-F (10 μΜ) 1
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
de soluție de hibridizare. IMPORTANT: FORMAMIDA ESTE FOARTE TOXICĂ. PRIN URMARE, SE POARTĂ MĂNUȘI ȘI SE IAU MĂSURILE DE SIGURANȚĂ NECESARE! Tabelul 1. Cantități recomandate pentru prepararea amestecului de hibridizare Numărul de lame 1 4 6 8 10 Apă ultrapură sterilă 23,1 92,4 138,6 184,8 231,0 Hibmix 3X 30,0 120,0 180,0 240,0 300,0 Dodecilsulfat de sodiu (DSS) de 1 % 0,9 3,6 5,4 7,2 9,0 Formamidă 27
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
alte organe vizibil afectate. Organele și țesuturile menționate pot fi grupate, dar materiile fecale trebuie în mod imperativ tratate separat. Eșantioanele de excremente și de organe trebuie omogenizate (cu un malaxor închis sau un pistil cu mortar și cu nisip steril) într-un mediu antibiotic până la obținerea suspensiilor de 10-20 % p/v în mediu. Tampoanele imersate și suspensiile trebuie lăsate să se liniștească timp de circa două ore la temperatura mediului înconjurător (sau un timp mai îndelungat la 4 °C), apoi
32006D0437-ro () [Corola-website/Law/294831_a_296160]
-
VII Test de patogenicitate in vivo și evaluarea rezultatelor Virulența, pentru pui, a virusurilor influența A izolate pe păsări trebuie evaluată cu ajutorul unui test de indice al patogenicității intravenoase (IPIV) care se efectuează după cum urmează: (a) Într-o soluție fiziologică sterilă se diluează la 1/10 lichid alantoidian infectat proaspăt, cu un titru hemaglutinant > 1/16 (> 24 sau > log2, reciproca 4), de la cel mai scăzut nivel de trecere disponibil și, de preferință, de la izolarea inițială, fără selecție prealabilă
32006D0437-ro () [Corola-website/Law/294831_a_296160]
-
după cum urmează, în sensul regulamentului: #1 desemnează toate părțile și produsele, cu excepția: (a) semințelor, sporilor și polenului (inclusiv a conglomeratelor de polen); (b) culturilor de plantule sau de țesuturi obținute in vitro, în mediu solid sau lichid, transportate în containere sterile; și (c) florilor tăiate de la plante înmulțite artificial. #2 desemnează toate părțile și produsele, cu excepția: (a) semințelor și polenului; (b) culturilor de plantule sau de țesuturi obținute in vitro, în mediu solid sau lichid, transportate în containere sterile; (c) florilor
32005R1332-ro () [Corola-website/Law/294308_a_295637]
-
în containere sterile; și (c) florilor tăiate de la plante înmulțite artificial. #2 desemnează toate părțile și produsele, cu excepția: (a) semințelor și polenului; (b) culturilor de plantule sau de țesuturi obținute in vitro, în mediu solid sau lichid, transportate în containere sterile; (c) florilor tăiate de la plante înmulțite artificial și (d) derivaților chimici și produselor farmaceutice finite. #3 desemnează rădăcinile întregi sau secționate și părțile de rădăcini, cu excepția părților sau produselor fabricate, cum ar fi prafuri, tablete, extracte, tonice, ceaiuri și produse
32005R1332-ro () [Corola-website/Law/294308_a_295637]
-
și produse zaharoase. #4 desemnează toate părțile și produsele, cu excepția: (a) semințelor, cu excepția semințelor de cactuși mexicani originari din Mexic și polenul; (b) culturilor de plantule sau de țesuturi obținute in vitro, în mediu solid sau lichid, transportate în containere sterile; (c) florilor tăiate de la plante înmulțite artificial; (d) fructelor, părților și produselor acestora, din plante aclimatizate sau înmulțite artificial; și (e) elementelor de trunchiuri (ramificații), părților și produselor acestora, din plante din genul Opunția subgenul Opunția înmulțite artificial. #5 desemnează
32005R1332-ro () [Corola-website/Law/294308_a_295637]
-
lemn și bucățile de material neprelucrate; #8 desemnează toate părțile și produsele, cu excepția: (a) semințelor și polenului (inclusiv a conglomeratelor de polen); (b) culturilor de plantule sau de țesuturi obținute in vitro, în mediu solid sau lichid, transportate în containere sterile; (c) florilor tăiate de la plante înmulțite artificial și (d) fructelor, părților și produselor din plante din genul Vanilla înmulțite artificial. #9 desemnează toate părțile și produsele, cu excepția: celor care poartă eticheta: "Produced from Hoodia spp. material obtained through controlled harvesting
32005R1332-ro () [Corola-website/Law/294308_a_295637]
-
taxoni, pot fi comercializați pe baza unui certificat de înmulțire artificială. În plus, semințele și polenul (inclusiv conglomeratele de polen), florile tăiate, culturile de plantule sau de țesuturi obținute in vitro, în mediu solid sau lichid și transportate în containere sterile, obținute din acești hibrizi nu intră sub incidența dispozițiilor regulamentului. 14. Urină, excrementele și ambra cenușie care constituie deșeuri obținute fără manipularea animalului în cauză nu intră sub incidența dispozițiilor regulamentului. 15. În ceea ce privește speciile de fauna incluse la anexă D
32005R1332-ro () [Corola-website/Law/294308_a_295637]
-
rajah (I) Cănișoară mare ORCHIDACEAE Orhidee ORCHIDACEAE spp. (ÎI) (cu exceptia speciilor incluse la anexă A)10 #8 Orhidee Pentru speciile următoare, incluse la anexă A, culturile de țesuturi obținute in vitro, în mediu solid sau lichid și transportate în containere sterile nu intră sub incidența dispozițiilor prezentului regulament) Aerangis ellisii (I) Cephalanthera cucullata (ÎI) Capișon Cypripedium calceolus (ÎI) Papucul doamnei Dendrobium cruentum (I) Sânge viu Goodyera macrophylla (ÎI) Orhidee de Madeira Laelia jongheana (I) Orhidee de Minas Gerais Laelia lobata (I
32005R1332-ro () [Corola-website/Law/294308_a_295637]