KorAP: Find »[drukola/base=antigen & drukola/pos=noun]« with Poliqarp

<1 ...194 195 196 ...221 >

5,517 matches

Corola-website/Law/87589_a_88376

prin adăugarea diluțiilor serului de testare. Anticorpii VBLA prezenți în serul de testare blochează reacția anticorpului monoclonal (ACM) și determină reducerea dezvoltării scontate a culorii la adăugarea substratului enzimatic. MATERIALE ȘI REACTIVI 1. Plăci de microtitrare cu fundul plat. 2. Antigenul: se prepară după descrierea de mai jos. 3. Tampon de blocare: 5% (w/v), lapte praf deshidratat "Marvel", 0,1% (v/v) Tween-20 (furnizat sub formă de sirop monolaurat de sorbiton de polioxietilenă) în ser fiziologic tamponat cu fosfat (PBS

jrc2435as1994 by Guvernul României (1994) [Corola-website/Law/87589_a_88376]
apă distilată. NU UITAȚI: ADĂUGAȚI ÎNTOTDEAUNA ACID LA APĂ, NICIODATĂ APĂ LA ACID. 8. Un agitator orbital. 9. Un cititor al plăcii Elisa (testul poate fi citit vizual). FORMAT DE TESTARE H G F E D C B A Gol Antigen+ conjugat 1 ACM martor Antigen+ ACM+ conjugat 2 + ve martor Antigen+ ser pozitiv+ ACM+ conjugat 3 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 Seruri de testare 1/2 1/4 1

jrc2435as1994 by Guvernul României (1994) [Corola-website/Law/87589_a_88376]
ÎNTOTDEAUNA ACID LA APĂ, NICIODATĂ APĂ LA ACID. 8. Un agitator orbital. 9. Un cititor al plăcii Elisa (testul poate fi citit vizual). FORMAT DE TESTARE H G F E D C B A Gol Antigen+ conjugat 1 ACM martor Antigen+ ACM+ conjugat 2 + ve martor Antigen+ ser pozitiv+ ACM+ conjugat 3 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 Seruri de testare 1/2 1/4 1/8 1/16 1/2

jrc2435as1994 by Guvernul României (1994) [Corola-website/Law/87589_a_88376]
LA ACID. 8. Un agitator orbital. 9. Un cititor al plăcii Elisa (testul poate fi citit vizual). FORMAT DE TESTARE H G F E D C B A Gol Antigen+ conjugat 1 ACM martor Antigen+ ACM+ conjugat 2 + ve martor Antigen+ ser pozitiv+ ACM+ conjugat 3 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 Seruri de testare 1/2 1/4 1/8 1/16 1/2 1/4 1/8 1/16

jrc2435as1994 by Guvernul României (1994) [Corola-website/Law/87589_a_88376]
4 1/8 1/16 1/2 1/4 1/8 1/16 4 5 Seruri de testare 6 7 8 9 10 11 12 PROTOCOL DE TESTARE Martor orb Rândul 1 A-H este un martor orb constând din antigenul VBLA și conjugat. Acesta poate fi utilizat pentru acoperirea cititorului Elisa. ACM martor Rândul 2 A- H este anticorpul monoclonal martor și constă din antigenul VBLA, anticorpul monoclonal și conjugatul. Acesta reprezintă un martor negativ. Media citirilor densității optice de pe

jrc2435as1994 by Guvernul României (1994) [Corola-website/Law/87589_a_88376]
PROTOCOL DE TESTARE Martor orb Rândul 1 A-H este un martor orb constând din antigenul VBLA și conjugat. Acesta poate fi utilizat pentru acoperirea cititorului Elisa. ACM martor Rândul 2 A- H este anticorpul monoclonal martor și constă din antigenul VBLA, anticorpul monoclonal și conjugatul. Acesta reprezintă un martor negativ. Media citirilor densității optice de pe acest rând martor reprezintă valoarea de inhibare 0%. Martor pozitiv Rândul 3 A- H este martorul pozitiv. Acesta constă din antigen VBLA, diluții de antiser

jrc2435as1994 by Guvernul României (1994) [Corola-website/Law/87589_a_88376]
martor și constă din antigenul VBLA, anticorpul monoclonal și conjugatul. Acesta reprezintă un martor negativ. Media citirilor densității optice de pe acest rând martor reprezintă valoarea de inhibare 0%. Martor pozitiv Rândul 3 A- H este martorul pozitiv. Acesta constă din antigen VBLA, diluții de antiser pozitiv VBLA, ACM și conjugat. Este inclus ca indicator pentru funcționarea corespunzătoare a testului și, de la un test la altul, ar trebui să se obțină niveluri similare de inhibiție. Serurile de testare În formatul de testare

jrc2435as1994 by Guvernul României (1994) [Corola-website/Law/87589_a_88376]
de punct final de diluție serică. Alternativ, pentru studiile serologice pe scară largă, serurile pot fi testate la o singură diluție (1/4) sau la două diluții (1/2 și 1/4) ca test de screening rapid. PROCEDURA 1. Diluați antigenul VBLA la concentrația pre-titrată în PBS, sonicați scurt pentru dispersarea virusului agregat (dacă nu aveți sonicator, pipetați cu putere) și adăugați 50 μl în toate godeurile plăcii Elisa. Loviți ușor marginile plăcii pentru dispersarea antigenului. 2. Incubați la 37ș C

jrc2435as1994 by Guvernul României (1994) [Corola-website/Law/87589_a_88376]
screening rapid. PROCEDURA 1. Diluați antigenul VBLA la concentrația pre-titrată în PBS, sonicați scurt pentru dispersarea virusului agregat (dacă nu aveți sonicator, pipetați cu putere) și adăugați 50 μl în toate godeurile plăcii Elisa. Loviți ușor marginile plăcii pentru dispersarea antigenului. 2. Incubați la 37ș C timp de 60 de minute pe un agitator orbital. Spălați plăcile de trei ori prin inundare și goliți godeurile cu PBS nesteril și uscați pe hârtie absorbantă. 3. Adăugați 50 μl tampon de blocare pentru

jrc2435as1994 by Guvernul României (1994) [Corola-website/Law/87589_a_88376]
utilizându-se următoarea formulă: Valorile de inhibiție mai mari de 40% la o diluție a serului de 1/4 sunt considerate pozitive. Citirea vizuală este posibilă deoarece o inhibiție de 40% este valoarea cea mai scăzută perceptibilă cu ochiul. PREPARAREA ANTIGENULUI ELISA VBLA 1. Spălați 10 șiruri de celule confluente BHK-21 de trei ori cu mediu Eagle fără ser și infectați cu serotipul 1 al virusului bolii limbii albastre în mediul Eagle fără ser. 2. Incubați la 37ș C și examinați

jrc2435as1994 by Guvernul României (1994) [Corola-website/Law/87589_a_88376]
pe o pernă de 5 ml de sucroză 40% (w/v în PBS) utilizând tuburi de centrifugare Beckmann de 30 ml și un rotor SW 28. 11. Aruncați supernatantul, scurgeți tuburile minuțios și resuspendați peleta în PBS prin sonicare. Stocați antigenul în alicoți la -70ș C. TITRAREA ANTIGENULUI ELISA VBLA Antigenul Elisa la boala limbii albastre se titrează cu testul Elisa indirect. Diluții duble de antigen se titrează față de o diluție constantă (1/50) cu anticorp monoclonal 3-17-A3. Protocolul este următorul

jrc2435as1994 by Guvernul României (1994) [Corola-website/Law/87589_a_88376]
sucroză 40% (w/v în PBS) utilizând tuburi de centrifugare Beckmann de 30 ml și un rotor SW 28. 11. Aruncați supernatantul, scurgeți tuburile minuțios și resuspendați peleta în PBS prin sonicare. Stocați antigenul în alicoți la -70ș C. TITRAREA ANTIGENULUI ELISA VBLA Antigenul Elisa la boala limbii albastre se titrează cu testul Elisa indirect. Diluții duble de antigen se titrează față de o diluție constantă (1/50) cu anticorp monoclonal 3-17-A3. Protocolul este următorul: PROCEDURA 1. Diluați antigen VBLA în PBS

jrc2435as1994 by Guvernul României (1994) [Corola-website/Law/87589_a_88376]
v în PBS) utilizând tuburi de centrifugare Beckmann de 30 ml și un rotor SW 28. 11. Aruncați supernatantul, scurgeți tuburile minuțios și resuspendați peleta în PBS prin sonicare. Stocați antigenul în alicoți la -70ș C. TITRAREA ANTIGENULUI ELISA VBLA Antigenul Elisa la boala limbii albastre se titrează cu testul Elisa indirect. Diluții duble de antigen se titrează față de o diluție constantă (1/50) cu anticorp monoclonal 3-17-A3. Protocolul este următorul: PROCEDURA 1. Diluați antigen VBLA în PBS pe placa de

jrc2435as1994 by Guvernul României (1994) [Corola-website/Law/87589_a_88376]
28. 11. Aruncați supernatantul, scurgeți tuburile minuțios și resuspendați peleta în PBS prin sonicare. Stocați antigenul în alicoți la -70ș C. TITRAREA ANTIGENULUI ELISA VBLA Antigenul Elisa la boala limbii albastre se titrează cu testul Elisa indirect. Diluții duble de antigen se titrează față de o diluție constantă (1/50) cu anticorp monoclonal 3-17-A3. Protocolul este următorul: PROCEDURA 1. Diluați antigen VBLA în PBS pe placa de microtitrare într-o serie de diluție dublă (50 μl/godeu) utilizând o pipetă multi-canal. 2

jrc2435as1994 by Guvernul României (1994) [Corola-website/Law/87589_a_88376]
-70ș C. TITRAREA ANTIGENULUI ELISA VBLA Antigenul Elisa la boala limbii albastre se titrează cu testul Elisa indirect. Diluții duble de antigen se titrează față de o diluție constantă (1/50) cu anticorp monoclonal 3-17-A3. Protocolul este următorul: PROCEDURA 1. Diluați antigen VBLA în PBS pe placa de microtitrare într-o serie de diluție dublă (50 μl/godeu) utilizând o pipetă multi-canal. 2. Incubați o oră la 37ș C pe un agitator orbital. 3. Spălați plăcile de trei ori cu PBS. 4

jrc2435as1994 by Guvernul României (1994) [Corola-website/Law/87589_a_88376]
9. Adăugați substrat și cromogen după descrierea anterioară. Opriți reacția după zece minute prin adăugarea a 1 M acid sulfuric (50 μl/godeu). La testul competitiv, anticorpul monoclonal trebuie să fie în exces, pentru aceasta fiind aleasă o diluție a antigenului care se încadrează în curba de titrare (nu în regiunea platoului) care dă aproximativ 0,8 OD după zece minute. Protocol pentru testul de imunodifuziune în gel de agar pentru depistarea anticorpilor împotriva bolii epizootice hemoragice Testul de imunodifuziune în

jrc2435as1994 by Guvernul României (1994) [Corola-website/Law/87589_a_88376]
dă aproximativ 0,8 OD după zece minute. Protocol pentru testul de imunodifuziune în gel de agar pentru depistarea anticorpilor împotriva bolii epizootice hemoragice Testul de imunodifuziune în gel de agar se efectuează în conformitate cu următorul protocol: MATERIALE ȘI REACTIVI 1. Antigen Antigenul de precipitare se prepară în orice sistem de cultură de celule care susține multiplicarea rapidă a serotipului corespunzător al virusului bolii hemoragice epizootice. Se recomandă celule BKH sau vero. Antigenul este prezent în fluidul supernatant la sfârșitul creșterii virusului

jrc2435as1994 by Guvernul României (1994) [Corola-website/Law/87589_a_88376]
aproximativ 0,8 OD după zece minute. Protocol pentru testul de imunodifuziune în gel de agar pentru depistarea anticorpilor împotriva bolii epizootice hemoragice Testul de imunodifuziune în gel de agar se efectuează în conformitate cu următorul protocol: MATERIALE ȘI REACTIVI 1. Antigen Antigenul de precipitare se prepară în orice sistem de cultură de celule care susține multiplicarea rapidă a serotipului corespunzător al virusului bolii hemoragice epizootice. Se recomandă celule BKH sau vero. Antigenul este prezent în fluidul supernatant la sfârșitul creșterii virusului, dar

jrc2435as1994 by Guvernul României (1994) [Corola-website/Law/87589_a_88376]
se efectuează în conformitate cu următorul protocol: MATERIALE ȘI REACTIVI 1. Antigen Antigenul de precipitare se prepară în orice sistem de cultură de celule care susține multiplicarea rapidă a serotipului corespunzător al virusului bolii hemoragice epizootice. Se recomandă celule BKH sau vero. Antigenul este prezent în fluidul supernatant la sfârșitul creșterii virusului, dar necesită o concentrație de 50 până la 100 de ori pentru a fi eficient. Acest lucru se poate realiza prin orice procedură standard de concentrare proteică; virusul din antigen poate fi

jrc2435as1994 by Guvernul României (1994) [Corola-website/Law/87589_a_88376]
sau vero. Antigenul este prezent în fluidul supernatant la sfârșitul creșterii virusului, dar necesită o concentrație de 50 până la 100 de ori pentru a fi eficient. Acest lucru se poate realiza prin orice procedură standard de concentrare proteică; virusul din antigen poate fi inactivat prin adăugarea a 0,3% (v/v) beta-propiolactonă. 2. Ser martor pozitiv cunoscut Prin utilizarea serulului și antigenului internațional de referință, se produce un ser standard național, standardizat pentru o proporție optimă împotriva serului internațional de referință

jrc2435as1994 by Guvernul României (1994) [Corola-website/Law/87589_a_88376]
ori pentru a fi eficient. Acest lucru se poate realiza prin orice procedură standard de concentrare proteică; virusul din antigen poate fi inactivat prin adăugarea a 0,3% (v/v) beta-propiolactonă. 2. Ser martor pozitiv cunoscut Prin utilizarea serulului și antigenului internațional de referință, se produce un ser standard național, standardizat pentru o proporție optimă împotriva serului internațional de referință, liofilizat și utilizat ca ser martor cunoscut la fiecare test. 3. Ser de testare. PROCEDURA 1. 1% agaroză preparată în soluție

jrc2435as1994 by Guvernul României (1994) [Corola-website/Law/87589_a_88376]
5,0 mm, se decupează în agar. Structura are un godeu central și șase godeuri aranjate în jurul său în formă de cerc cu raza de 3 mm. 1 6 2 X 5 3 4 3. Godeul central se umple cu antigen standard. Godeurile periferice 2, 4 și 6 se umplu cu serul pozitiv cunoscut, straturile 1, 3 și 5 se umplu cu seruri de testare. 4. Sistemul se incubează timp de 72 de ore la temperatura camerei într-o cameră umedă

jrc2435as1994 by Guvernul României (1994) [Corola-website/Law/87589_a_88376]
3 și 5 se umplu cu seruri de testare. 4. Sistemul se incubează timp de 72 de ore la temperatura camerei într-o cameră umedă închisă. INTERPRETAREA Serul de testare este pozitiv dacă formează o linie specifică de precipitare cu antigenul și dacă formează o linie completă de identitate cu serul martor. Serul de testare este negativ dacă nu formează o linie specifică cu antigenul și nu curbează linia serului martor. Vasele petri trebuie examinate pe un fundal negru și utilizând

jrc2435as1994 by Guvernul României (1994) [Corola-website/Law/87589_a_88376]
umedă închisă. INTERPRETAREA Serul de testare este pozitiv dacă formează o linie specifică de precipitare cu antigenul și dacă formează o linie completă de identitate cu serul martor. Serul de testare este negativ dacă nu formează o linie specifică cu antigenul și nu curbează linia serului martor. Vasele petri trebuie examinate pe un fundal negru și utilizând iluminare indirectă. 1 JO L 194, 22.07.1988, p. 10. 2 JO L 186, 28.07.1993, p. 28. 3 JO L 8

jrc2435as1994 by Guvernul României (1994) [Corola-website/Law/87589_a_88376]
Corola-website/Law/90665_a_91452

împotriva VPCA, denumit de aici înainte "antiser de cobai", este un antiser cu spectru larg, policlonal și imun; este specific serogrupului PCA și permite detectarea tuturor serotipurilor cunoscute ale virusului acestei boli. Principiul testului este o diminuare a reacției între antigenul VPCA și un antiser de cobai pe un eșantion de ser de testat. Anticorpii VPCA din eșantionul de ser de testat sunt în competiție cu cei ai antiserului de cobai, ceea ce antrenează o reducere a culorii preconizate (după adăugarea unui

jrc5495as2001 by Guvernul României (2001) [Corola-website/Law/90665_a_91452]