6,328 matches
-
cea a eșantionului de lapte. Se omogenizează cu grijă această primă diluție cu ajutorul agitatorului (4.1.9) timp de 5 până la 10 secunde. Se obține astfel prima diluție 10-1. 7.4 Pregătirea diluțiilor zecimale următoare Se transferă, cu ajutorul unei pipete sterile (4.2.3), 1 ml din prima diluție (7.3) în 9 ml de diluant (6.1), urmându-se indicațiile de la pct. 7.3. Se obține astfel o diluție 10-2. Se repetă aceste operațiuni de obținere a diluțiilor zecimale următoare
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
de la pct. 7.3. Se obține astfel o diluție 10-2. Se repetă aceste operațiuni de obținere a diluțiilor zecimale următoare până se ajunge la numărul adecvat de microorganisme (8.1). 7.5 Inocularea cutiilor Petri Se transferă, cu ajutorul unei pipete sterile (4.2.3), 1 ml de eșantion sau de diluție zecimală corespunzătoare pe o placă (4.2.4). Analiza trebuie să examineze cel puțin două diluții. Pentru fiecare diluție, se pregătesc două plăci alese corespunzător (8.1). 7.6 Turnarea
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
clopote Durham de dimensiuni care să permită utilizarea lor în aceste eprubete. 4.2.2 Baloane cu capacitate de la 150 la 250 ml pentru mediul selectiv solid (pct. 5.1). 4.2.3 Pipete din sticlă sau din material sintetic steril, neciobite, cu capacitate nominală de 1-10 ml, cu un orificiu de scurgere cu diametru între 1,75 și 3 mm. 4.2.4 Cutii Petri din sticlă sau material sintetic steril, transparent și incolor, fundul plăcilor având un diametru interior
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
2.3 Pipete din sticlă sau din material sintetic steril, neciobite, cu capacitate nominală de 1-10 ml, cu un orificiu de scurgere cu diametru între 1,75 și 3 mm. 4.2.4 Cutii Petri din sticlă sau material sintetic steril, transparent și incolor, fundul plăcilor având un diametru interior de aproximativ 90-100 de mm. Înălțimea interioară trebuie să fie de cel puțin 10 mm. Fundul nu trebuie să prezinte nici un fel de neregularități care ar putea stânjeni numărarea coloniilor. 4
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
-ul să fie de 7,4 ± 0,1 la o temperatură de 25șC. Se aduce rapid la starea de fierbere agitându-se din când în când și se repartizează imediat mediul în cantități de 100 până la 150 ml în baloane sterile (pct. 4.2.2). Se răcește mediul la 45 ± 1șC într-o baie de apă (pct. 4.1.5). Sterilitatea mediului trebuie verificată în momentul utilizării (vezi pct. 6.4). Mediul se folosește imediat, în primele trei ore de la prepararea
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
sau lăsată spuma să se disperseze. Timpul scurs între omogenizare și prelevarea probei nu trebuie să depășească 3 minute. 6.3 Inseminarea cutiilor Petri Se inseminează 3 ml de eșantion de lapte (pct. 6.2) transferându-se, cu ajutorul unei pipete sterile (pct. 4.2.3), 1 ml de eșantion pe fiecare dintre cele trei plăci (pct. 4.2.4). 6.4 Turnarea mediului Se toarnă geloza VRBL (pct. 6.1) pe fiecare placă inseminată în cantități de cca. 12 ml. Se
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
1°C. 4.1.8. pH-metru. 4.2. Sticlărie de laborator 4.2.1. Flacoane pentru eșantioane cu capac adecvat. Notă Anumite dopuri din cauciuc pot depune substanțe inhibante la gura flaconului. 4.2.2. Cutiile Petri din material sintetic steril sau din sticlă incoloră transparentă, având un diametru interior minim de aproximativ 140 mm, cu fund perfect plat. 4.2.3. Flacoane cu o capacitate de 250 ml. 4.2.4. Pipete (astupate cu vată) din sticlă sau din material
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
din sticlă incoloră transparentă, având un diametru interior minim de aproximativ 140 mm, cu fund perfect plat. 4.2.3. Flacoane cu o capacitate de 250 ml. 4.2.4. Pipete (astupate cu vată) din sticlă sau din material sintetic steril, cu capacitate nominală de 1 ml și de 10 ml. 4.2.5. Spatule de sticlă 4.2.6. Eprubete sau fiole cu capac sau dop și un diametru interior de aproximativ 8 mm. 4.2.7. Sterilizarea sticlăriei de
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
de comprimate. 5.2. Soluții etalon de penicilină 5.2.1. Se prepară, în flaconul cu capac adecvat, o soluție de penicilină de 60 μg/ml = (100 UL/ ml) prin dizolvarea benzilpenicilinatului de sodiu sau de potasiu în apa distilată sterilă. 5.2.2. Se prepară o soluție diluată de penicilină prin adăugarea a 1,25 ml de soluție de penicilină (pct. 5.2.1.) în apă distilată sterilă și se completează până la 1 000 ml. Această soluție diluată conține 0
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
ml) prin dizolvarea benzilpenicilinatului de sodiu sau de potasiu în apa distilată sterilă. 5.2.2. Se prepară o soluție diluată de penicilină prin adăugarea a 1,25 ml de soluție de penicilină (pct. 5.2.1.) în apă distilată sterilă și se completează până la 1 000 ml. Această soluție diluată conține 0,075 μg de penicilină/ml ( = 0,125 UL de penicilină/ml). 5.2.3. Se prepară 75 ml de soluție etalon de penicilină care conține 0,004 μg
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
se amestecă. 5.2.4. Soluțiile de penicilină descrise la pct. 5.2.1 la 5.2.3 trebuie preparate pe loc. 5.3. Laptele fără substanțe inhibante Se prepară un lapte martor fără substanțe inhibante, dizolvând, în apa distilată sterilă, lapte praf degresat (10% m/v) în care s-a verificat în prealabil absența substanțelor inhibante. Se poate de asemenea folosi o cantitate adecvată de lapte proaspăt omogenizat în care s-a verificat absența substanțelor inhibante; acest lapte va fi
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
1.1). Gelatina înclinată este inseminată în striuri cu ajutorul unei anse îmbibate cu tulpina de probă apoi este incubată în aerobioză timp de 48 de ore la 63 ± 1oC. După incubare, se închide ermetic eprubeta cu ajutorul unui dop de cauciuc steril. Cultura de rezervă astfel obținută poate fi conservată mai multe luni în frigider, la 5oC. 5.5 Cultura de probă (suspensie de spori) 5.5.1. Se varsă aseptic 20 ml de geloză nutritivă topită (pct. 5.1.1) pe
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
astfel obținută poate fi conservată mai multe luni în frigider, la 5oC. 5.5 Cultura de probă (suspensie de spori) 5.5.1. Se varsă aseptic 20 ml de geloză nutritivă topită (pct. 5.1.1) pe o cutie Petri sterilă (pct. 4.2.2) și se lasă să se răcească la temperatura ambiantă. 5.5.2. Cu ajutorul unei pipete sterile (pct. 4.2.4), se transferă 5 ml de apă distilată sterilă în eprubeta cu cultura de rezervă (pct. 5
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
5.5.1. Se varsă aseptic 20 ml de geloză nutritivă topită (pct. 5.1.1) pe o cutie Petri sterilă (pct. 4.2.2) și se lasă să se răcească la temperatura ambiantă. 5.5.2. Cu ajutorul unei pipete sterile (pct. 4.2.4), se transferă 5 ml de apă distilată sterilă în eprubeta cu cultura de rezervă (pct. 5.4.2) și se recuperează prin spălare sporii de pe gelatina înclinată, cu ajutorul unei anse sterile. Suspensia de spori se conservă
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
pct. 5.1.1) pe o cutie Petri sterilă (pct. 4.2.2) și se lasă să se răcească la temperatura ambiantă. 5.5.2. Cu ajutorul unei pipete sterile (pct. 4.2.4), se transferă 5 ml de apă distilată sterilă în eprubeta cu cultura de rezervă (pct. 5.4.2) și se recuperează prin spălare sporii de pe gelatina înclinată, cu ajutorul unei anse sterile. Suspensia de spori se conservă la 5oC și se folosește în următoarele 36 de ore. 5.5
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
5.2. Cu ajutorul unei pipete sterile (pct. 4.2.4), se transferă 5 ml de apă distilată sterilă în eprubeta cu cultura de rezervă (pct. 5.4.2) și se recuperează prin spălare sporii de pe gelatina înclinată, cu ajutorul unei anse sterile. Suspensia de spori se conservă la 5oC și se folosește în următoarele 36 de ore. 5.5.3. Cu ajutorul unei pipete sterile (pct. 4.2.4), se transferă 0,5 ml din suspensia de spori (pct. 5.5.2) pe
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
de rezervă (pct. 5.4.2) și se recuperează prin spălare sporii de pe gelatina înclinată, cu ajutorul unei anse sterile. Suspensia de spori se conservă la 5oC și se folosește în următoarele 36 de ore. 5.5.3. Cu ajutorul unei pipete sterile (pct. 4.2.4), se transferă 0,5 ml din suspensia de spori (pct. 5.5.2) pe o placă cu mediul (pct. 5.5.1) și se etalează cu grijă inoculumul pe toată suprafața cu o spatulă de sticlă
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
2.) sau o cultură mai veche de 36 de ore, tehnica de repicare se va face de cel puțin două ori, cu un interval de maximum 36 de ore între fiecare subcultură. 5.5.4. Se transferă, cu ajutorul unei pipete sterile (pct. 4.2.4), 10 ml de apă distilată în cutia cu cultura (pct. 5.5.3) și se elimină sporii în suspensie de la suprafață cu ajutorul unei baghete de sticlă. Se transferă suspensia de spori (pct. 4.2.3) într-
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
cultura (pct. 5.5.3) și se elimină sporii în suspensie de la suprafață cu ajutorul unei baghete de sticlă. Se transferă suspensia de spori (pct. 4.2.3) într-un flacon (pct. 5.2.3) cu 250 ml de apă distilată sterilă. Se închide flaconul și se agită puternic. Culturile care nu se recoltează imediat trebuie să fie conservate la frigider, la 0-6oC. 5.5.5. Suspensia de spori inseminată pe mediul gelatinat (pct. 5.1.2) fără trimetoprim trebuie să prezinte
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
de spori proaspeți (pct. 5.5.4) cu cinci părți de mediu gelatinat (pct. 5.6.1) într-o eprubetă sau într-un flacon; se amestecă cu grijă. 5.6.3. Se transferă într-o eprubetă sau într-o fiolă sterilă (pct. 5.6.2) 0,3 ml de mediu inseminat (pct. 4.2.6) calculat pentru a obține un strat uniform, cu o grosime de 5 mm, apoi se închide eprubeta cu un dop sau un capac și, pentru fiolă
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
g/ml (0,01UL/ ml); c) 0,03 g/ml (0,05UL/ ml); d) 0,06 g/ml (0,1UL/ ml); 5.3. Soluția de penicilinază 5.3.1. Se dizolvă o cantitate suficientă de penicilinază (betalactamază) în apa distilată sterilă pentru a se obține o concentrație de 1 000 UL/ml. Această soluție, de preferință repartizată în porții mici, poate fi păstrată la 0-5oC, timp de cel mult patru săptămâni. Notă Penicilinaza nu a fost supusă unei standardizări internaționale. În
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
și numărul necesar de părți din mediul pentru proba de detectare a substanțelor inhibante (pct. 5.1.2) pentru a obține densitatea adecvată de colonii în mediul inseminat; se omogenizează corespunzător. 5.6.3. Se toarnă, pe o cutie Petri sterilă (lit. A pct. 4.2.2) în prealabil încălzită la 55oC, mediul inseminat (pct. 5.6.2.), în așa fel încât să se obțină un start gros de 0,6 la 0,8 mm. La o cutie Petri cu diametru
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
eșantioanele de lapte la 80 ± 1oC timp de 10 minute, pentru a se evita influența substanțelor inhibante termolabile nespecifice. 6.1.3. Se omogenizează cu grijă, apoi se transferă aproximativ 10 ml din eșantionul de lapte încălzit într-un flacon steril cu gâtul larg. Se adaugă aproximativ 0,4 ml din soluția de penicilinază (pct. 5.3) în lapte și se amestecă bine. 6.2. Detectarea substanțelor inhibante 6.2.1. Se scufundă un disc cu hârtie absorbantă (pct. 4.3
jrc1705as1991 by Guvernul României () [Corola-website/Law/86853_a_87640]
-
sedimentul. (b) Filtrare a supranatantului printr-un filtru de hârtie (Whatman nr. 1) ținut într-un filtru de sticlă sinterizată (nr. 2 = 40-100 μm) folosind o pompă de apă. Se colectează filtratul într-un tub centrifugal. Se spală filtrul cu steril de sare de fosfat tamponată, la un volum maxim al filtratului de 35 ml. (c) Centrifugare a filtratului până la 4 000 g timp de 20 de minute. 3.3. Se suspendă granulele în steril de fosfat tamponat de 0,01
jrc2214as1993 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87367_a_88154]
-
tub centrifugal. Se spală filtrul cu steril de sare de fosfat tamponată, la un volum maxim al filtratului de 35 ml. (c) Centrifugare a filtratului până la 4 000 g timp de 20 de minute. 3.3. Se suspendă granulele în steril de fosfat tamponat de 0,01 M (apendice 2) pentru a se obține un volum total de aproximativ 1 ml. Se face divizarea în două părți egale și se păstrează o parte în scopuri de referință prin congelare la -20
jrc2214as1993 by Guvernul României () [Corola-website/Law/87367_a_88154]