7,100 matches
-
colorație incompletă sau cu fluorescență slabă nu trebuie luate în considerare. 7.3.3. La cea mai mică suspiciune de contaminare, testul trebuie refăcut. Aceasta se poate întâmpla atunci când toate lamele unui lot indică prezența de celule pozitive din cauza contaminării tamponului sau atunci când celulele pozitive sunt izolate (în afara ferestrelor) pe mijlocul lamei. 7.3.4. Există un anumit număr de chestiuni inerente specificității testului FISH. Pot apărea populații de celule fluorescente cu morfologie atipică și de bacterii saprofite care provoacă reacții
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
o suspensie de 105-106 celule/ml din sușa omologă de R. solanacearum. Se include un extract de eșantion care a dat anterior rezultate negative pentru R. solanacearum și o suspensie a unei bacterii care nu provoacă reacții încrucișate într-un tampon fosfat (PBS) ca eșantioane de control negativ. Drept eșantion de control pozitiv, se folosesc alicote de extracte de eșantion care au dat anterior rezultate negative, amestecate cu 103-104 de celule/ml de biovar 2 de R. solanacearum (de exemplu, sușa
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
de 100-200 μl de extract concentrat. (Se încălzește timp de patru minute la 100 °C în baie de abur sau într-un bloc de încălzire pentru a reduce rezultatele nespecifice în anumite cazuri). (2) Se adaugă un volum egal de tampon dublu concentrat (apendicele 4) și se omogenizează în agitator. (3) Se aplică 100 μl alicote în fiecare dintre minimum două godeuri ale plăcii de microtitrare (de exemplu, Nunc-Polysorp sau echivalent) și se incubează o oră la 37 °C sau peste
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
la 4 °C. (4) Se scot extractele din godeuri. Se spală godeurile de trei ori cu PBS-Tween (apendicele 4), lăsând ultima soluție de spălare cel puțin cinci minute în godeuri. (5) Se prepară diluția corespunzătoare a antiserului anti-R. solanacearum în tampon de saturație (apendicele 4). Pentru anticorpii comerciali validați, se folosesc diluțiile recomandate (de obicei, de două ori mai concentrate decât titrul). (6) Se aplică 100 μl în fiecare godeu și se incubează o oră la 37 °C. (7) Se scoate
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
și se incubează o oră la 37 °C. (7) Se scoate soluția de anticorpi din godeuri și se spală în conformitate cu cele indicate anterior (punctul 4). (8) Se prepară diluția corespunzătoare de conjugați secundari de anticorpi și de fosfatază alcalină în tampon de saturație. Se adaugă 100 μl în fiecare godeu și se incubează o oră la 37 °C. (9) Se scoate conjugatul de anticorpi din godeuri și se spală în conformitate cu cele indicate anterior (punctul 4). (10) Se adaugă 100 μl de
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
4) în fiecare godeu. Se incubează în întuneric la temperatura ambiantă și se măsoară absorbanța la 405 nm la intervale regulate în termen de 90 de minute. (b) DAS-ELISA (1) Se prepară diluția corespunzătoare de imunoglobuline policlonale anti-R. solanacearum în tampon concentrat cu pH 9,6 (apendicele 4). Se adaugă 200 μl în fiecare godeu. Se incubează timp de patru-cinci ore la 37 °C sau timp de 16 ore la 4 °C. (2) Se spală godeurile de trei ori cu PBS-Tween
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
seringi. 9.3. Prin aceeași tehnică, se inoculează cinci plantule cu o suspensie apoasă de 105-106 celule pe ml dintr-o sușă virulentă de patruzeci și opt de ore din biovar 2 de R. solanacearum drept control pozitiv și cu tampon de concentrare (apendicele 4) drept control negativ. Se separă plantele de control pozitiv și negativ de celelalte plante pentru a evita contaminările încrucișate. 9.4. Plantele test se cresc în încăperi de carantină până la patru săptămâni la 25-30 °C și
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
Creștere la 40 °C - Creștere în 1 % NaCl + Creștere în 2 % NaCl - Activitatea dihidrolazei argininei - Lichefierea gelatinei - Hidroliza amidonului - Hidroliza esculinei - Producție de levan - 2. Testul IF 2.1. Se prepară o suspensie de circa 106 celule/ml într-un tampon de imunofluorescență (apendicele 4). 2.2. Se prepară o serie de diluții duble dintr-un antiser corespunzător (a se vedea website-ul http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). 2.3. Se aplică procedura testului IF (secțiunea VI
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
sau epinastie, cloroză și de pipernicire. (5) Se izolează plantele simptomatice îndepărtând o secțiune de țesut din tulpină la 2 cm deasupra punctului inoculării. Se mărunțește și se suspendă într-un volum mic de apă distilată sterilă sau cu un tampon fosfat de 50 mM (apendicele 4). Se izolează suspensia prin diluare într-un mediu adecvat, de preferință mediu selectiv (apendicele 2), se incubează timp de 48-72 ore la 28 °C și se observă formarea coloniilor tipice de R. solanacearum. Apendicele
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
și negative Se crește timp de 48 ore o sușă virulentă de biovar 2 rasa 3 de R. solanacearum (de exemplu, sușa NCPPB 4156 = PD 2762 = CFBP 3857) într-un mediu general SMSA și se face o suspensie într-un tampon fosfat 10 mM pentru a obține o densitate celulară de circa 2 x 108 ufc/ml. În general, aceasta se obține printr-o suspensie ușor tulbure echivalentă cu o densitate optică de 0,15-600 nm. Se îndepărtează taloanele de la două sute
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
control pozitiv și negativ pentru fiecare serie de eșantioane de testare. Pentru testele IF și FISH, R. solanacearum trebuie detectat în cel puțin 106 și 104 celule/ml de control pozitiv și în nici un eșantion de control negativ. Apendicele 4 Tampoane pentru procedura de testare GENERALITĂȚI: tampoanele sterilizate nedeschise pot fi păstrate până la un an. 1. Tampoane pentru procedura de extracție 1.1. Tampon de extracție (50 mM tampon fosfat, pH 7,0) Acest tampon este utilizat pentru extracția bacteriei din
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
serie de eșantioane de testare. Pentru testele IF și FISH, R. solanacearum trebuie detectat în cel puțin 106 și 104 celule/ml de control pozitiv și în nici un eșantion de control negativ. Apendicele 4 Tampoane pentru procedura de testare GENERALITĂȚI: tampoanele sterilizate nedeschise pot fi păstrate până la un an. 1. Tampoane pentru procedura de extracție 1.1. Tampon de extracție (50 mM tampon fosfat, pH 7,0) Acest tampon este utilizat pentru extracția bacteriei din țesuturile plantei prin omogenizare sau agitare
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
R. solanacearum trebuie detectat în cel puțin 106 și 104 celule/ml de control pozitiv și în nici un eșantion de control negativ. Apendicele 4 Tampoane pentru procedura de testare GENERALITĂȚI: tampoanele sterilizate nedeschise pot fi păstrate până la un an. 1. Tampoane pentru procedura de extracție 1.1. Tampon de extracție (50 mM tampon fosfat, pH 7,0) Acest tampon este utilizat pentru extracția bacteriei din țesuturile plantei prin omogenizare sau agitare. Na2HPO4 4,26 g KH2PO4 2,72 g Apă distilată
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
106 și 104 celule/ml de control pozitiv și în nici un eșantion de control negativ. Apendicele 4 Tampoane pentru procedura de testare GENERALITĂȚI: tampoanele sterilizate nedeschise pot fi păstrate până la un an. 1. Tampoane pentru procedura de extracție 1.1. Tampon de extracție (50 mM tampon fosfat, pH 7,0) Acest tampon este utilizat pentru extracția bacteriei din țesuturile plantei prin omogenizare sau agitare. Na2HPO4 4,26 g KH2PO4 2,72 g Apă distilată 1, 00 l Se dizolvă ingredientele, se
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
de control pozitiv și în nici un eșantion de control negativ. Apendicele 4 Tampoane pentru procedura de testare GENERALITĂȚI: tampoanele sterilizate nedeschise pot fi păstrate până la un an. 1. Tampoane pentru procedura de extracție 1.1. Tampon de extracție (50 mM tampon fosfat, pH 7,0) Acest tampon este utilizat pentru extracția bacteriei din țesuturile plantei prin omogenizare sau agitare. Na2HPO4 4,26 g KH2PO4 2,72 g Apă distilată 1, 00 l Se dizolvă ingredientele, se verifică pH-ul și se
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
eșantion de control negativ. Apendicele 4 Tampoane pentru procedura de testare GENERALITĂȚI: tampoanele sterilizate nedeschise pot fi păstrate până la un an. 1. Tampoane pentru procedura de extracție 1.1. Tampon de extracție (50 mM tampon fosfat, pH 7,0) Acest tampon este utilizat pentru extracția bacteriei din țesuturile plantei prin omogenizare sau agitare. Na2HPO4 4,26 g KH2PO4 2,72 g Apă distilată 1, 00 l Se dizolvă ingredientele, se verifică pH-ul și se sterilizează în autoclavă la 121 °C
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
l) Fulgi de Lubrol Peptizant (*) 0,5 g Silicon antispumant DC Agent antispumant (*) 1,0 ml Pirofosfat tetrasodic Antioxidant 1,0 g Polivinilpirolidonă-40000 (PVP-40) Legarea inhibitorilor PCR 50 g (*) A se utiliza cu metoda de extracție prin omogenizare. 1.2. Tampon de extract concentrat (10 mM tampon fosfat, pH 7,2) Acest tampon este utilizat pentru resuspendarea și diluția extractelor de taloane de tuberculi de cartof ca urmare a concentrării în extract concentrat prin centrifugare. Na2HPO4·12H2O 2,7 g NaH2PO4
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
5 g Silicon antispumant DC Agent antispumant (*) 1,0 ml Pirofosfat tetrasodic Antioxidant 1,0 g Polivinilpirolidonă-40000 (PVP-40) Legarea inhibitorilor PCR 50 g (*) A se utiliza cu metoda de extracție prin omogenizare. 1.2. Tampon de extract concentrat (10 mM tampon fosfat, pH 7,2) Acest tampon este utilizat pentru resuspendarea și diluția extractelor de taloane de tuberculi de cartof ca urmare a concentrării în extract concentrat prin centrifugare. Na2HPO4·12H2O 2,7 g NaH2PO4·2H2O 0,4 g Apă distilată
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
antispumant (*) 1,0 ml Pirofosfat tetrasodic Antioxidant 1,0 g Polivinilpirolidonă-40000 (PVP-40) Legarea inhibitorilor PCR 50 g (*) A se utiliza cu metoda de extracție prin omogenizare. 1.2. Tampon de extract concentrat (10 mM tampon fosfat, pH 7,2) Acest tampon este utilizat pentru resuspendarea și diluția extractelor de taloane de tuberculi de cartof ca urmare a concentrării în extract concentrat prin centrifugare. Na2HPO4·12H2O 2,7 g NaH2PO4·2H2O 0,4 g Apă distilată 1,0 l Se dizolvă ingredientele
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
în extract concentrat prin centrifugare. Na2HPO4·12H2O 2,7 g NaH2PO4·2H2O 0,4 g Apă distilată 1,0 l Se dizolvă ingredientele, se verifică pH-ul și se sterilizează în autoclavă la 121 °C timp de 15 minute. 2. Tampoane pentru testul de imunofluorescență 2.1. Tampon IF: 10 mM PBS, pH 7,2 Acest tampon este utilizat pentru diluarea anticorpilor. Na2HPO4·12H2O 2,7 g NaH2PO4·2H2O 0,4 g NaCl 8,0 g Apă distilată 1,0 l
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
2,7 g NaH2PO4·2H2O 0,4 g Apă distilată 1,0 l Se dizolvă ingredientele, se verifică pH-ul și se sterilizează în autoclavă la 121 °C timp de 15 minute. 2. Tampoane pentru testul de imunofluorescență 2.1. Tampon IF: 10 mM PBS, pH 7,2 Acest tampon este utilizat pentru diluarea anticorpilor. Na2HPO4·12H2O 2,7 g NaH2PO4·2H2O 0,4 g NaCl 8,0 g Apă distilată 1,0 l Se dizolvă ingredientele, se verifică pH-ul
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
distilată 1,0 l Se dizolvă ingredientele, se verifică pH-ul și se sterilizează în autoclavă la 121 °C timp de 15 minute. 2. Tampoane pentru testul de imunofluorescență 2.1. Tampon IF: 10 mM PBS, pH 7,2 Acest tampon este utilizat pentru diluarea anticorpilor. Na2HPO4·12H2O 2,7 g NaH2PO4·2H2O 0,4 g NaCl 8,0 g Apă distilată 1,0 l Se dizolvă ingredientele, se verifică pH-ul și se sterilizează în autoclavă la 121 °C timp
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
Na2HPO4·12H2O 2,7 g NaH2PO4·2H2O 0,4 g NaCl 8,0 g Apă distilată 1,0 l Se dizolvă ingredientele, se verifică pH-ul și se sterilizează în autoclavă la 121 °C timp de 15 minute. 2.2. Tampon IF-Tween Acest tampon este utilizat pentru spălarea lamelor. Se adaugă 0,1 % Tween 20 la tamponul IF. 2.3. Glicerol tamponat fosfatic, pH 7,6 Acest tampon este utilizat ca fluid de suport la ferestrele lamei IF pentru mărirea fluorescenței
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
7 g NaH2PO4·2H2O 0,4 g NaCl 8,0 g Apă distilată 1,0 l Se dizolvă ingredientele, se verifică pH-ul și se sterilizează în autoclavă la 121 °C timp de 15 minute. 2.2. Tampon IF-Tween Acest tampon este utilizat pentru spălarea lamelor. Se adaugă 0,1 % Tween 20 la tamponul IF. 2.3. Glicerol tamponat fosfatic, pH 7,6 Acest tampon este utilizat ca fluid de suport la ferestrele lamei IF pentru mărirea fluorescenței. Na2HPO4.·12H2O 3
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]
-
1,0 l Se dizolvă ingredientele, se verifică pH-ul și se sterilizează în autoclavă la 121 °C timp de 15 minute. 2.2. Tampon IF-Tween Acest tampon este utilizat pentru spălarea lamelor. Se adaugă 0,1 % Tween 20 la tamponul IF. 2.3. Glicerol tamponat fosfatic, pH 7,6 Acest tampon este utilizat ca fluid de suport la ferestrele lamei IF pentru mărirea fluorescenței. Na2HPO4.·12H2O 3,2 g NaH2PO4·2H2O 0,15 g Glicerol 50 ml Apă distilată 100
32006L0063-ro () [Corola-website/Law/295071_a_296400]